Germination of Rice Seeds with Tissue Culture Method

材料与试剂

1. 5 ml离心管
   
2. 各种型号吸头 (20 μl, 200 μl, 1 ml)
   
3. 培养皿
   
4. 滤纸
5. 水稻种子
   
6. 75%乙醇
   
7. HgCl₂
   
8. 蔗糖
   
9. 生根培养基 (见溶液配方)
   
10. MS_max(10x) (见溶液配方)
11. MS_min母液(100x) (见溶液配方)
    
12. Fe²⁺-EDTA(100x) (见溶液配方)
    
13. 维生素(100x) (见溶液配方)

仪器设备

1. 移液器
   
2. 摇床
   
3. 超净工作台
   

实验步骤

1. 将种子去除颖壳，挑选质量好，无霉菌斑点的米粒。
   
2. 75%乙醇漂洗1-2 min，漂洗过程中需要不断振荡。
3. 1.5‰ HgCl₂漂洗18-25 min，大约每隔3 min上下翻转振荡一次。
4. 用灭过菌并放凉的ddH₂O漂洗3~5次，去除表面残留的HgCl₂。
5. 将处理好的种子放入生根培养基上，于光培养室培养，约半个月后可长成完整植株，再移入田间。

溶液配方

1. 生根培养基
   

   MSmax母液(10x)	50 ml
   MSmin母液(100x)	5 ml
   Fe2-EDTA母液 (100x)	10 ml
   Vitamin母液 (100x)	10 ml
   蔗糖	20 g
   Phytagel	3 g

   加H₂O 1,000 ml并用1 N KOH调节pH到5.8，煮开后分装到生根管中，封口膜封口灭菌。
   
2. MS_max(10x)

   NH4NO3	16.5 g
   KNO3	19.0 g
   KH2PO4	1.7 g
   MgSO4∙7H2O	3.7 g
   CaCl2∙2H2O	4.4 g 或 CaCl2 3.32g

   逐一溶解药品后，加dH₂O定容到1,000 ml
   
3. MS_min母液(100x)

   KI	0.083 g
   H3BO3	0.62 g
   MnSO4∙4H2O	2.23 g或MnSO4∙H2O 1.69 g
   ZnSO4∙7H2O	0.86 g
   Na2MoO4∙2H2O	0.025 g
   CuSO4∙5H2O	0.0025 g
   CoCl2∙6H2O	0.0025 g

   注：Na₂MoO₄必须单独溶解后再与其它组分混合。
   加dH₂O定容到1,000 ml室温保存
   
4. Fe²⁺-EDTA (100x)
   取一个烧杯加300 ml dH₂O以及FeSO₄∙7H₂O 2.78 g
   在另一个烧杯中也加300ml dH₂O加热到70 °C后加入Na₂ EDTA∙2H₂O 3.73 g
   
5. 维生素(100x)

   Nicotinic acid	0.1 g
   Pyridoxine HCl (VB6)	0.1 g
   Thiamine HCl (VB1)	0.1 g
   Glycine	0.2 g
   Inositol	10 g

   加dH₂O定容到1,000 ml 4 °C保存