Microscopy Technique (Squash Slides)

材料与试剂

1. 盖玻片
   
2. 载玻片
   
3. 丙三醇
   
4. 水合氯醛 (Bio Basic INC., High purity)
   
5. ddH₂O
   
6. 丙三醇 (上海森灏精细化工有限公司)
   
7. 透明剂 (见溶液配方)
   

仪器设备

1. 镊子
   
2. 微分干涉显微镜(Nikon 80i)
   

实验步骤

取清洁载玻片，滴加1-2滴透明剂，将材料放置在透明剂中。之后用镊子夹住盖玻片一侧，将其另一侧压在透明剂旁的载玻片上，缓缓放下至水平位置。此时的样品即可用于显微观察 (视频1)。

注意事项

1. 取材尽量小，利于将样品压在同一个焦平面上。
   
2. 对于较大样品，如水稻根尖，建议每个盖玻片只压一个样品，以利于聚焦观察。为了节约耗材，可以在载玻片不同区域分别压片，比如一张普通载玻片上最多可以压三个盖玻片(18 x 18 mm)。
   
3. 盖片时，若有气泡产生，可在盖玻片的一端滴加透明剂，用吸水纸从另一端吸取即可；或将盖玻片取下重新盖上。如果气泡不在样品附近则不用处理。
   
4. 压片时，尽量不要用外力压盖玻片 (比如用铅笔轻敲等操作)，以防损坏样品。如果压片效果不好，只需放置数小时乃至一两天 (期间要及时追加透明剂以防风干)，依靠盖玻片自身的重力即可将样品压好。
   压片时，可以先滴少许透明剂，放上样品并盖上盖玻片。此时，由于透明剂较少，盖玻片一边翘起。从翘起的一侧继续追加少许透明剂(但不充满盖玻片)，这时透明剂在扩散开的同时吸引盖玻片压紧样品，有利于快速有效的压片，可大大降低损坏样品的概率。
   
5. 镜检时，个别材料中出现颜色较深类似木质化的黄褐色斑块，说明材料没有透明好。可以尝试37 °C抽真空15 min，以加快透明剂渗透的速度；也可以追加透明剂并放置更长时间后再观察。
   
6. 盖玻片上表面应保持干净，不得将透明剂溢到上面，否则镜检时会污染物镜，也会降低盖玻片的透明度，影响观察效果。
   
7. 镜检时，使用微分干涉显微镜或者相差显微镜，效果更佳。
   

溶液配方

1. 透明剂

   常用配方：
   水合氯醛	8 g
   ddH2O	3 ml
   丙三醇	1 ml
   其他配方：
   水合氯醛	10 g
   ddH2O	3 ml
   丙三醇	2 ml