2.3. IP RP HPLC mobile phases

Buffer A; 0.1 M triethylammonium acetate (TEAA) pH 7.4. Buffer B; 0.1 M TEAA, pH 7.4, 25% (v/v) acetonitrile. Buffer C; 2.5 mM tetrabutylammonium bromide (TBAB). Buffer D; 2.5 mM tetrabutylammonium bromide, 80% acetonitrile. Buffer E; 20 mM triethylammonium acetate (TEAA) pH 7.4, 80 mM 1,1,1,3,3,3,-hexafluoro-2-propanol (HFIP). Buffer F; 20 mM triethylammonium acetate (TEAA), pH 7.4, 80 mM 1,1,1,3,3,3,-hexafluoro-2-propanol (HFIP) 25% (v/v) acetonitrile. Buffer G; 0.1 M triethylammonium acetate (TEAA) pH 7, 80 mM 1,1,1,3,3,3,-hexafluoro-2-propanol (HFIP). Buffer H; 0.1 M triethylammonium acetate (TEAA), pH 7.4, 80 mM 1,1,1,3,3,3,-hexafluoro-2-propanol (HFIP) 25% (v/v) acetonitrile.

Gradient 1: HPLC buffers A and B. Linear gradient: 25–35% B in 1 min; 35–70% B in 14 min; 70–100% B in 0.1 min; 100% B for 3 min; 100–30% B in 0.4 min; 25% B for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 2: HPLC buffers C and D. Linear gradient: 55% B for 1 min; 50–85% B in 14 min; 85–100% B in 0.5 min; 100% B for 3 min; 100–50% B in 1 min; 55% B for 4 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 3: HPLC buffers E and F. Linear gradient 10–30% F in 20 min, 30–90% F in 1 min; 90% F for 3  min; 90–10% F in 0.4 min; 10% F for 5 min at a flow rate of 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 4: HPLC buffers E and F. Linear gradient 10–20% F in 20 min, 20–30% F over 10 min; 30% F to 90%F in 1 min; 90% F for 3 min; 90–10% F in 0.4 min; 10% F for 5 min at a flow rate of 100 μl min⁻¹.

Gradient 5: HPLC buffers A and B. Linear gradient: 45–50% B in 1 min; 50–80% B in 20 min; 85% B to 100% B in 1 min; 100% B for 2 min; 100–45% B in 0.4 min; 45% B for 4 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 6: HPLC buffers A and B. Linear gradient: 35–40% B in 1 min; 40–60% B in 10 min; 60–68% B in 5 min, 68% B to 100% B in 1 min; 100% B for 2 min; 100–35% B in 0.4 min; 30% B for 4 min. Flow rate: 1.6 ml min⁻¹.

Gradient 7: HPLC buffers A and B. Linear gradient: 15–60% B in 12 min; 60–100% B in 0.1 min; 100% B for 2 min; 100–15% B in 0.4 min; 15% B for 4 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 8: HPLC buffers A and B. Linear gradient 25–30%B in 1 min; 30–45% B 15 min; 45–100% B in 0.1 min; 100% B for 3 min; 100–25% B in 0.4 min; 25% B for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 9: HPLC buffers A and B. Linear gradient 15–20% B in 1 min; 20–75% B 10 min; 75–100% B in 0.1 min; 100% B for 3 min; 100–15% B in 0.4 min; 25% B for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 10: HPLC buffers E and F. Linear gradient 15–20% F in 1 min; 20–75% F 10 min; 75–100% F in 0.1 min; 100% F for 3 min; 100–15% F in 0.4 min; 25% F for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 11: HPLC buffers C and D. Linear gradient 55–90% D in 15 min; 90–100% D in 0.1 min; 100% D for 3 min; 100–55% D in 0.4 min; 55% D for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 12: HPLC buffers E and F. Linear gradient 35–40% F in 1 min; 40–90% F 10 min; 90–100% F in 0.1 min; 100% F for 3 min; 100–35% F in 0.4 min; 35% F for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.

Gradient 13: HPLC buffers C and D. Linear gradient 55–80% D in 15 min; 85–100% D in 0.1 min; 100% D for 3 min; 100–55% D in 0.4 min; 55% D for 5 min. Flow rate: 0.4 ml min⁻¹.