实验动物胚胎操作实验手册

实验动物胚胎操作实验手册

实验动物胚胎操作实验手册

        胚胎学(Embryology)是一门既古老又充满活力的基础性科学学科。1935年,H.施佩曼因发现胚胎发育中的组织者效应;1995年,EF.威斯乔斯发现控制早期胚胎发育的遗传机制;2007年,M.卡佩基等利用胚胎干细胞打靶和囊胚嵌合技术制备基因修饰小鼠;2010年,R.爱德华兹在试管婴儿方面的研究取得重大成果。他们均因此获得了诺贝尔生理学或医学奖。与此同时,胚胎学被视为生命科学研究中最为复杂的科学之一,其主要原因除了胚胎学本身的复杂性之外,还因为胚胎操作(Embryo Manipulation)技术的复杂和精细。胚胎操作技术既包括基础性的实验操作如超数排卵、输精管结扎、配子冻存、体外受精、胚胎移植等,也包括复杂精细的实验操作如显微注射、胚胎切割、体细胞核移植、干细胞打靶及筛选、囊胚嵌合技术、原始生殖细胞示踪、胚胎异体移植等。掌握和发展必要的胚胎操作技术,不仅仅是开展胚胎学研究的需要,也是很多生命科学领域的研究工作及科研辅助工作的必要条件。
        
本次出版的《实验动物胚胎操作实验手册》共分9个章节,57个实验方案,覆盖11种实验动物,包括小鼠、长爪沙鼠、犬、猪、猴、树鼩、鸡、斑马鱼、果蝇、牛及羊。其中,小鼠胚胎操作实验方案(13个)及长爪沙鼠实验方案(7个)的编写围绕基因修饰小鼠制备、品种品系冷冻保种及病原净化控制;犬、猪、猴等大动物胚胎操作方案各有5-6条,内容围绕体细胞克隆及显微注射法制备基因修饰动物;树鼩胚胎操作方案(4个)着重于通过精原干细胞制备基因修饰动物;鸡的胚胎操作方案(7个)偏重鸡胚的应用;斑马鱼胚胎操作技术(5个)围绕品系保存及基因修饰鱼的制备;果蝇(3个)、牛(1个)、羊(1个)简单介绍了与有关受精卵的基本操作。本手册的实验方案基本是由国内高水平科研单位的一线科技工作者所提供。这些成熟的胚胎操作技术体系不仅在国家级实验动物种质资源中心及各单位实验动物支撑平台被广泛采用,而且不少由国内科学家发展优化的创新技术在引领着中国生命科学的进步:如体细胞克隆猴的诞生,精原干细胞介导基因修饰树鼩的培育,以及通过人造精子改造培育健康小鼠并大规模推广应用等。希望该实验手册能够为广大科研工作者提供帮助,希望这些基础的或是先进的胚胎操作技术方法能够推动中国生物医学事业的发展。
        本手册的编写得到14家单位共82位优秀科学工作者的鼎力支持。他们认真撰稿,细致修订,毫无保留把自己的看家绝活与学界共享,在此,向所有参与者表示衷心的感谢!特别感谢本刊的科学顾问李劲松教授和赖良学教授,两位教授的实验室贡献了最多的方案,保证了本手册的高水准!感谢Bio-protocol中国编辑部的信任和支持!略显遗憾的是,由于编者们的研究领域及研究方向不同,不同物种胚胎操作实验技术的发展水平及科学目标的差异较大,本手册无法按照统一的模式组织编写实验方案;此外,大鼠、兔等常用实验动物的胚胎操作实验在本手册中尚未涉及,留待大方之家补充。


吴宝金 孙强
2023年5月



专辑委员会 实验方案目录

责任主编

编委

评审人

腹腔镜引导食蟹猴胚胎移植

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Laparoscopic Guided Embryo Transfer of Cynomolgus Monkey

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精子冷冻与复苏

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猴胞浆内单精子注射

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猴胚胎mRNA胞浆注射

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Cytoplasmic Injection of mRNA In Monkey Embryos

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猴体细胞核移植

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产卵用果蝇准备

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果蝇胚胎显微注射

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果蝇胚胎收集和脱壳处理

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小鼠人工授精技术

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犬体细胞克隆

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羊胚胎生产与移植实验操作

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猪胚胎移植

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受精卵RNA或DNA显微注射

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体内成熟卵母细胞和受精卵收集

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犬发情鉴定

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小鼠非手术胚胎移植技术

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犬胚胎移植

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猪体外受精

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猪体细胞核移植

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鸡体内早期胚胎发育的研究

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鸡胚胎干细胞分离培养及鉴定

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鸡胚血管注射

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鸡胚胎性别的快速鉴定

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鸡原始生殖细胞迁移的示踪

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鸡胚胎异体移植

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鸡卵母细胞体外受精

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结扎公鼠和假孕母鼠的制备

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小鼠超数排卵和成熟卵母细胞的采集

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小鼠精子冻存与复苏

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小鼠胚胎移植

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小鼠胚胎冻存与复苏

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小鼠体外受精

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小鼠囊胚注射

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小鼠卵胞质内单精子注射

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小鼠卵胞质内孤雄单倍体胚胎干细胞注射

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小鼠体细胞核移植

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食蟹猴超数排卵与卵母细胞采集流程

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Superovulation and Oocyte Collection

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斑马鱼的自然交配产卵及胚胎培养技术

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Natural Breeding and Embryo Culture of Zebrafish

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斑马鱼的体外受精

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斑马鱼精子冻存

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斑马鱼胚胎显微注射技术

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Microinjection Techniques of Zebrafish Embryos

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斑马鱼原始生殖细胞移植或替换技术

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Primordial Germ Cells Transplantation or Replacement in Zebrafish

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牛超数排卵与胚胎移植

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Jan 21, 2022
长爪沙鼠超数排卵与取卵

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长爪沙鼠精子冷冻保存

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Sperm Cryopreservation of Mongolian Gerbil

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长爪沙鼠胚胎冷冻保存与复苏

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长爪沙鼠胚胎显微注射(胞浆注射)

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长爪沙鼠胚胎移植

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长爪沙鼠输精管结扎术

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长爪沙鼠体外受精

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In vitro Fertilization of the Mongolian Gerbil Egg

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树鼩睾丸处理诱导生精细胞死亡

树鼩睾丸处理诱导生精细胞死亡

Depletion of Endogenous Germ Cells of Tree Shrew

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树鼩精原干细胞的转基因操作

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树鼩精原干细胞系的分离和建系培养

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Establishment of Spermatogenic Stem Cell Lines from Tree Shrew

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Aug 13, 2021
树鼩精原干细胞移植

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