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水稻细胞中蛋白质的免疫金标亚细胞定位

Subcellular Localization of Proteins in Rice Cells Using Immunogold Labeling Technique

曹 曹剑波
邵 邵林
袁猛 袁猛

发表时间: 2018年05月30日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010126 浏览次数: 5697

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实验原理：根据抗原与抗体的特异性结合原理，结合透射电镜对细胞超微结构的成像技术，利用胶体金颗粒具有高电子密度的特性，金标抗体结合处在透射电镜下呈现黑色颗粒。
实验目的：根据金标抗体在细胞中的位置，来确定目的蛋白质(抗原)在细胞中的分布。

Keywords: 免疫金标 search 蛋白质亚细胞定位 search 透射电镜 search

材料与试剂

  1. 2 ml离心管
  2. 吸管
  3. 注射器
  4. 牙签
  5. 培养皿
  6. 液氮50 L
  7. 包埋模具 (geltin胶囊)
  8. 玻璃条
  9. 铜网
  10. 铜网镊子
  11. 细毛笔
  12. 滤纸
  13. 蜡板
  14. 乙醇(国药试剂)
  15. 多聚甲醛
  16. 25%戊二醛(进口品质)
  17. NaH2PO4·2H2O
  18. Na2HPO4·12H2O
  19. NaCl
  20. PBS
  21. NaOH
  22. LOWICRYL K4M Embedding Kit (Electron Microscopy Science, USA, catalog number: 14330)
  23. TWEEN20
  24. BSA
  25. Glycine
  26. 0.01 M PBS, pH 7.2缓冲液 (见溶液配方)
  27. 固定剂 (见溶液配方)
  28. 脱水剂 (见溶液配方)
  29. 包埋剂 (见溶液配方)
  30. PBST (见溶液配方)
  31. 阻断液 (见溶液配方)
  32. 醋酸铀染液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 天平
  2. 玻璃棒
  3. 量筒
  4. 烧杯
  5. 酒精灯
  6. 手术剪刀
  7. 眼科镊子
  8. 冰箱
  9. 紫外聚合仪 (Leica EM AFS2, Germany)
  10. 玻璃刀制刀机 (Leica KMR3, Germany)
  11. 钻石刀 (超薄级，DiTOME, Switzerland)
  12. 超薄切片机 (Leica UC6, Germany)
  13. 透射电子显微镜 (H-7650, Japan)
  14. 真空泵

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：曹剑波, 邵林, 袁猛. (2018). 水稻细胞中蛋白质的免疫金标亚细胞定位. Bio-101: e1010126. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010126.
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How to cite: Cao, J. B., Shao, L. and Yuan, M. (2018). Subcellular Localization of Proteins in Rice Cells Using Immunogold Labeling Technique. Bio-101: e1010126. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010126.
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分类

分子生物学 > 蛋白质 > 检测

细胞生物学 > 细胞成像 > 电子显微镜

植物科学 > 植物分子生物学 > 蛋白质

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