Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

牧草种子内生真菌的分离、鉴定与保存方法

Isolation, Identification and Preservation of Endophytic Fungi from Forage Seeds

强 强晓晶
李 李玉中

发表时间: 2021年04月12日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2003847 浏览次数: 3456

返回专辑目录

微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：植物内生真菌是指生命周期的全部阶段或部分阶段生活于健康植物组织或细胞内且不引起植物任何病症的真菌。自然界中几乎所有的植物都有内生菌的存在，本方法采用微生物学中常规的组织分离法分离牧草种子内生真菌。内生真菌的鉴定采用形态鉴定和分子生物学鉴定相结合的方法，不同微生物在特定的培养基上生长形成的菌落一般具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。此外，利用PCR技术，可以快速检测和鉴定微生物种类，内生真菌的PCR鉴定是通过扩增其内部转录间隔区 (ITS) 区域并对该区域序列进行测序，这种鉴定方法是基于ITS区域是真菌种类的主要条码标记。已分离、鉴定的内生真菌低温保存用于后续菌株研究实验。

Keywords: 牧草种子 search 内生真菌 search 分离 search 鉴定 search 保存 search

材料与试剂

  1. 培养皿
  2. 封口膜
  3. 滤纸
  4. 披碱草种子
  5. 无水乙醇 (国药集团，catalog number: 64-17-5)
  6. 次氯酸钠 (国药集团，catalog number: 7681-82-9)
  7. 硫酸链霉素 (沃凯，catalog number: 3810-74-0)
  8. 甘油 (国药集团，catalog number: 56-81-5)
  9. 真菌基因组DNA提取试剂盒 (北京索莱宝科技有限公司D2300)
  10. PDA培养基 (美国BD DIFCO，BD 213400)

仪器设备

  1. 手术刀
  2. 镊子
  3. 接种针
  4. 分析天平 (METTLER TOLEDO，PG5001-S)
  5. 高压蒸汽灭菌器 (TOMY，SX-700)
  6. 超净工作台 (HITACHI，PCV clean bench)
  7. 恒温培养箱 (宁波江南仪器厂，DNP-9082)
  8. 光学显微镜 (OLYMPUS，BX51)

软件和数据库

NCBI中的Nucleotide BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROG-RAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：强晓晶, 李玉中. (2021). 牧草种子内生真菌的分离、鉴定与保存方法. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003847. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003847.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Qiang, X. J., and Li, Y. Z.  (2021). Isolation, Identification and Preservation of Endophytic Fungi from Forage Seeds. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003847. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003847.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

系统生物学 > 微生物组学

您对这篇实验方法有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A