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猪肠道食糜和血清中短链脂肪酸浓度的测定

The Determination of the Concentration of Short Chain Fatty Acids in the Intestinal Digesta and Serum of Pigs

张 张睿楠*
李 李华*
汤 汤加勇
吴 吴彩梅
罗 罗玉衡

*Contributed equally to this work 发表时间: 2021年06月11日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2003671 浏览次数: 3778

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微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
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摘要：短链脂肪酸 (SCFA) 是指6个碳以下的有机脂肪酸，猪等单胃动物肠道中的SCFA主要由微生物发酵碳水化合物产生，包括乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、异丁酸等及其盐类。其中，乙酸、丙酸、丁酸约占SCFA总量的85%。不同种类SCFA具有不同的代谢特征，其含量及组成变化与宿主肠道微生物群落结构的变化直接相关。肠道细菌产生的SCFA不仅是宿主肠上皮细胞的主要能源，也通过血液循环参与宿主的各项生理代谢过程。因此，测定食糜和血清中的SCFA含量，对以猪为代表的单胃动物肠道健康相关的研究有重要意义。本实验将食糜和血清样品经过偏磷酸预处理及色谱甲醇稀释后，用毛细管气相色谱法测定，并用内标法计算各SCFA的组成及含量。在实验色谱条件下，各组分有效分离，单个食糜和血清样品检测用时分别为5 min和7.5 min，结果稳定，线性良好，且样品重现性和加标回收率满足要求。该实验所需仪器条件容易实现，操作简便、易学易会、快速准确，推荐在猪等单胃动物食糜和血清的SCFA浓度测定中广泛使用。

Keywords: SCFA search 食糜 search 血清 search 气相色谱法 search

材料与试剂

  1. 2 ml一次性无菌注射器 (洪湖泰宁医疗器械有限公司)
  2. 0.22 μm有机尼龙针式过滤器 (成都思为科学仪器有限公司)
  3. 毛细管柱 (HP-FFAP，柱长30 m，柱内径0.53 mm，膜厚1 μm) (Agilent)
  4. 乙酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 71251)
  5. 丙酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 94425)
  6. 丁酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 19215)
  7. 异丁酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 46935-U)
  8. 戊酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 75054)
  9. 异戊酸 (分析标准品)，(Supelco, Sigma-aldrich, catalog number: 78651)
  10. 巴豆酸 (纯度98%)，(Sigma-aldrich, catalog number: 113018)
  11. 甲醇 (色谱纯)，(Fisher, catalog number: A452-4)
  12. 偏磷酸 (分析纯)，(天津科密欧化学试剂有限公司, catalog number: 00500)
  13. 210 mmol/L 巴豆酸 (见溶液配方)
  14. 25% (w/v) 偏磷酸 (见溶液配方)
  15. 标准储备液 (见溶液配方)
  16. 实验1标准工作液 (见溶液配方)
  17. 实验2标准工作液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 气相色谱仪 (Varian, GC CP3800)
  2. 高速冷冻离心机 (Thermo, Heraeus, Biofuge Primo R)
  3. 手动进样针 (Agilent, 10 μl)
  4. 旋涡混合器 (上海青浦沪西仪器厂，XW-80A)
  5. 移液器 (Eppendorf, 10 μl, 20 μl, 100 μl, 200 μl, 1,000 μl)
  6. 纯水仪 (Millipore, Milli-Q Integral 3)
  7. 电子天平 (Mettler Toledo, ME204E)     

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张睿楠, 李华, 汤加勇, 吴彩梅, 罗玉衡. (2021). 猪肠道食糜和血清中短链脂肪酸浓度的测定. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003671. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003671.
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How to cite: Zhang, R. N., Li, H., Tang, J. Y., Wu, C. M. and Luo, Y. H. (2021). The Determination of the Concentration of Short Chain Fatty Acids in the Intestinal Digesta and Serum of Pigs. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003671. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003671.
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分类

系统生物学 > 微生物组学

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