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流式细胞术检测早期细胞凋亡之JC-1法

Flow Assay of Early Apoptosis by JC-1

王 王雪冬
丁 丁宇波
葛 葛灵
边 边玮

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010335 浏览次数: 18820

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流式细胞术实验手册
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摘要：线粒体膜电位 (mitochondrial membrane potential，△Ψm) 是指由线粒体内膜两侧质子分布不均一而形成的电化学梯度。线粒体膜电位的下降被认为是细胞早期凋亡的一个标志性事件。JC-1作为亲脂阳离子荧光染料，被广泛用于线粒体膜电位的检测：当线粒体膜电位较高时，JC-1可以在线粒体的基质中聚集，形成聚合物，从而产生红色荧光；当线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1以单体形式存在，产生绿色荧光。因此，JC-1荧光颜色的转变可用来指示线粒体膜电位的变化情况。在本实验中，我们用JC-1荧光染料分别标记经H2O2诱导和未诱导的HeLa细胞，通过流式细胞仪检测JC-1荧光颜色的转变及变化比例，从而判断线粒体跨膜电位的变化情况，进而评估HeLa细胞的早期凋亡 (Wlodkowic等, 2011；Sivandzade等，2019)。

Keywords: 早期细胞凋亡 search 线粒体膜电位 search JC-1 search 流式细胞术 search

材料与试剂

  1. 5 ml流式管 (Falcon, catalog number: 352008)
  2. 15 ml离心管 (BD Falcon, catalog number: 352097)
  3. 70 μm细胞过滤筛 (Falcon, catalog number: 352350)
  4. HeLa细胞 (中国科学院细胞库，SCSP-504)
  5. 胰酶 (Gibco™, catalog number: 27250018)
  6. DMSO (Sigma-Aldrich, catalog number: D2650)
  7. JC-1染色试剂盒 (BD™, catalog number: 551302)
  8. NaCl
  9. Na2HPO4 
  10. KCl 
  11. KH2PO4
  12. H2O2
  13. 1× PBS缓冲液 (见溶液配方)
  14. 20 mM H2O2 (见溶液配方)
  15. 染色缓冲液 (见溶液配方)
  16. JC-1染色液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. CO2培养箱 (Heraeus, model: HERAcell 150)
  2. 水平离心机 (BeckmanCoulter, model: Allegra X-12R)
  3. 旋涡混匀器 (Scientific Industries, model: Vortex-Genie 2)
  4. 流式细胞分析仪 (BD LSRFortessa，配有355 nm/405 nm/488 nm/561 nm/638 nm五根激光器)
  5. 倒置显微镜 (Olympus, model: IX73)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王雪冬, 丁宇波, 葛灵, 边玮. (2019). 流式细胞术检测早期细胞凋亡之JC-1法. Bio-101: e1010335. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010335.
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How to cite: Wang, X. D., Ding, Y. B., Ge, L. and Bian, W. (2019). Flow Assay of Early Apoptosis by JC-1. Bio-101: e1010335. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010335.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

细胞生物学 > 细胞活力 > 细胞死亡

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