果蝇卵巢细胞培养即时影像分析系统

王珏文; 吴榛惟; 张玉泉; 张纯纯

doi:10.21769/BioProtoc.1010297

Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

果蝇卵巢细胞培养即时影像分析系统

Live Imaging of Collective Cell Migration in the Drosophila Ovary

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010297 浏览次数: 7108

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摘要：本实验流程叙述如何由雌性果蝇腹腔取出完整的卵巢，并进一步解剖出其卵管(ovarioles)，再经由体外培养 (ex vivo) 的方式使卵室 (egg chambers) 维持基本功能，并透过光学显微镜进行即时影像分析。此流程着重于分析第九至十期的卵室发育，此阶段的卵室，前端的卵泡细胞 (follicle cells) 会有4~8颗细胞组成一群组 (cluster)，且开始往卵母细胞 (oocyte) 的边境 (border) 方向迁移，因此我们亦称这群会移动的细胞为边境细胞 (border cells)。此流程能维持卵室在体外培养时间长达8小时，以即时观察边境细胞迁移的状态。亦可观察不同基因型卵室的即时发育过程，并通过生物感应器 (biosensors) 同步观察讯号传递分子的变化，此流程建立亦有助于测试药物对正常或癌化细胞迁移的影响。

Keywords: 即时影像

边境细胞

体外培养

卵巢发育

材料与试剂

µ-Dish 35 mm, low (ibidi GmbH, catalog number: 80136)
ADVANTEC NO.20 pH试纸 (Advantec^®, catalog number: 07010110)
凹陷载玻片
培养管
干酵母菌颗粒
处女果蝇 (雌果蝇)
雄果蝇
无菌双蒸水 (ddH₂O)
Insulin (Beef), United States Pharmacopeia (USP) (Sigma-Aldrich, catalog number: 1342208)
Schneider's Drosophila Medium (S2培养液) (Thermo Fisher Scientific, Gibco, catalog number: 80136)
Fetal Bovine Serum (Thermo Fisher Scientific, Gibco, catalog number: 10082147)
体外培养液 (见溶液配方)
果蝇萃取液 (见溶液配方)

仪器设备

Dumostar精密手术镊子 (Dumont, catalog number: 0209-5-PO)
离心机 (Eppendorf, model: Centrifuge 5424)
Leica EZ4体视显微镜 (Leica, model: EZ4)
Zeiss Observer D1 microscopy (Zeiss, model: Observer D1)

软件

AxioVision SE64Rel.4.8.2 software

实验步骤

引用格式：王珏文, 吴榛惟, 张玉泉, 张纯纯. (2019). 果蝇卵巢细胞培养即时影像分析系统. Bio-101: e1010297. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010297.

下载引用格式

How to cite: Wang, C. W., Wu, J. W., Chang, Y. C. and Jang, A. C. (2019). Live Imaging of Collective Cell Migration in the Drosophila Ovary. Bio-101: e1010297. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010297.

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