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酵母双杂交技术检测蛋白互作

Yeast Two-hybrid Assay for Detecting Protein Interaction

毛 毛文文
魏 魏灵芝
李 李冰冰
贾 贾文锁

发表时间: 2018年11月29日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010223 浏览次数: 8912

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摘要：酵母双杂交系统可进行两个蛋白的互作分析。真核生物的位点特异性转录激活因子通常含有两个不同的结构域：DNA结合结构域 (DNA-binding domain) 和转录激活结构域 (transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游，转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用， 启动它所调节基因的转录。两个结构域可在适当部位打开且具有各自的功能，当两结构域通过适当的途径在空间上接近时其激活转录的能力可被恢复。将两待检测的蛋白分别与BD和AD融合并导入酵母菌株中，通过营养缺陷筛选可验证两个蛋白之间是否存在相互作用。

Keywords: 蛋白互作 search 酵母双杂交 search

材料与试剂

  1. 枪头
  2. 离心管
  3. 冰
  4. ssDNA (10 mg/ml)
  5. 质粒DNA
  6. AH109菌液
  7. 酵母感受态
  8. DMSO
  9. PEG4000 (50%)
  10. 10x LiAc (1 M)
  11. Tris-HCl
  12. EDTA (pH7.5)
  13. YPD
  14. 0.2% Ade
  15. 琼脂粉
  16. SD-base
  17. SD/-leu/-trp
  18. SD/-ade/-leu/-trp/-his
  19. 10x TE (见溶液配方)
  20. 1x TE/LiAc (见溶液配方)
  21. PEG/LiAc (见溶液配方)
  22. 液体和固体YPDA培养基 (1 L) (见溶液配方)
  23. 营养缺陷型培养板 (1 L) (见溶液配方)
    1)
    二缺培养板
    2)
    四缺培养板

仪器设备

  1. 三角瓶
  2. 移液枪
  3. 涡旋振荡器
  4. 水浴锅
  5. 分光光度计
  6. 离心机
  7. 摇床
  8. 培养箱
  9. 高压灭菌锅

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：毛文文 , 魏灵芝 , 李冰冰 , 贾文锁 . (2018). 酵母双杂交技术检测蛋白互作. Bio-101: e1010223. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010223.
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How to cite: Mao, W. W., Wei, L. Z., Li, B. B. and Jia, W. S. (2018). Yeast Two-hybrid Assay for Detecting Protein Interaction. Bio-101: e1010223. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010223.
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分类

分子生物学 > 蛋白质

植物科学 > 植物分子生物学

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