用于全基因组测序的真菌基因组DNA的提取
步骤
65℃预热beffer B。准备裂解液：500mg菌体使用17.5ml。
利用液氮充分研磨菌体，转移进入50ml液氮遇冷的离心管中，加入17.5ml裂解液，快速涡旋充分混匀。
65℃水浴30min，每5-10分钟轻轻颠倒一次。
加入5.75ml（0.33vol）KAc（5M），轻轻颠倒混匀，冰浴30min。
4℃，5000g，离心20min。
吸取上清到新的50ml离心管内，加入1 vol氯仿:异戊醇:苯酚（25:24:1）萃取，10min。4℃，4000g，离心10min。
吸取上清到新的50ml离心管内，加入1 vol氯仿:异戊醇（24:1）萃取，10min。4℃，4000g，离心10min。
吸取上清到新的50ml离心管内，加入130 ul RNase A（10mg/ml），37℃水浴2h。
加入1/10 vol KAc（5M）和1 vol异丙醇，轻轻混匀，室温静止5min。4℃，10000g，离心30min。
去上清，用70%乙醇清洗，4℃，10000g离心10min。
去上清，室温下风干15min左右。
加250ul TE，轻弹助融，65℃金属浴2-5min，保存于-80℃。
试剂配制
Buffer A: 0.35M sorbitol （山梨醇）
0.1M Tris-HCl，PH9
5mM EDTA，PH8
Buffer B： 0.2M Tris-HCl，PH9
50mM EDTA，PH9
2M NaCl
2% CTAB
Buffer C： 5% Sarkosyl（N-lauroylsarcosine sodium salt） 十二烷基季胺酸钠
Potassium Acetate 5M （KAc precipitate polysaccharides） PH7.5
RNase A （10mg/ml）
Proteinase K （20mg/ml）
PVP 1% 聚乙烯吡咯烷酮
Chloroforme：Isoamylalcool（24:1）
Sodium Acetate（KAc） 3M
Isopropanol 100% 异丙醇
Ethanol 70%
Lysis Buffer For 17.5ml
2,5 vol of buffer A 6.5ml
2,5 vol of buffer B 6.5ml
1 vol of Buffer C 2.6ml
PVP 1% 1.75ml
Proteinase K 125ul