×
Please leave your comments or questions
 
4%多聚甲醛溶液(PFA)配置指南
Authors: Yun Shi and Miao He, updated date: , view: 26, Q&A: 0
Tags: 多聚甲醛, 溶液配置 and PFA

Materials and Reagents

试剂分子式分子量品牌货号
二水合磷酸二氢钠NaH2PO4.2H2O156.01沪试20040718
十二水合磷酸氢二钠Na2HPO4.12H2O358.14沪试10020318
ParaformaldehydeCH2O30.03Sigma158127
氢氧化钠(片状)NaOH40.00沪试10019718
盐酸HCl


miniQ水
////


Equipment

烧杯(PFA专用)

温度计(PFA专用)

磁力搅拌器(PFA专用)

量筒(PFA专用)

分析天平

微型台式真空泵

0.22um过滤器


Procedure

4%多聚甲醛溶液(PFA)配置指南

 以配制4L PFA为例

1. miniQ水清洗量筒、烧杯等。(3次)

2.  使用一次性称量船,分别用分析天平称取12.4808g NaH2PO4.2H2O114.6048 g Na2HPO4.12H2O将磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于2LminiQ水中。使用磁力搅拌器充分溶解(无任何固体)。也可先溶解在1L中,后加miniQ水置2L(即终体积的一半)。

3.将溶液放置于微波炉中最高火加热,每隔3-5分钟取出用PFA专用温度计测量温度,直至溶液温度到达60℃。

4.  使用一次性称量船,用分析天平称取PFA干粉160g(此时应已佩戴好防护器具),倒入PFA专用烧杯中(在底部倾倒,以防粉末飞溅)。

5. PFA专用烧杯放于通风橱内的磁力搅拌器上。

6. 60℃的磷酸缓冲液倒入PFA专用烧杯,打开磁力搅拌器,加入5-10 5-10N NaOH,令溶液变成碱性助溶。
10N NaOH的配置:在50ml管中称量约2gNaOH,加入5-10ml水,轻柔摇晃。NaOH溶解大量产热,故不能盖盖,也不能剧烈摇晃,以防管子爆炸或溶液飞溅。

由于是调整pH用,浓度不需要很准确。加NaOH可用1ml移液枪,也可用一次性滴管。

7. 打开加热板,设置在31℃左右,不必放入测温杆;测温杆在烧杯附近,能感受到31℃左右的温度,将间歇加热保持烧杯内溶液温度在50-60间。

8. 搅拌20-40min,充分溶解(从乳白悬浊液变清澈,无任何固体)。

9. 补充1.9LminiQ水。

10. 加入盐酸(HCl)调整PH溶液至7-7.4.

    a. 待充分混合后再测pH

    b. 使用pH试纸测试,可利用miniQ水作为对照

    c. 由于起始PB溶液的pH7.4,加入的HCl约与NaOH等摩尔量。例如若第6步加入0.5ml 10Mol/L NaOH,此步使用2Mol/L盐酸,则约需加入0.5*10/2=2.5ml盐酸。

    d. 实际加入的量依照pH测量值确认。

11. miniQ水定容至4L

12. 将大烧杯中的PFA转入1L小烧杯,便于倾倒。

13. 将滤器与微型台式真空泵相连,打开微型台式真空泵后,将PFA分批倒入滤器进行过滤,并分装入干净的50ml管(液体体积约40ml,以防止冰冻后体积增加溢出)

14. 存储在-20℃,使用前在室温融化,并颠倒多次,充分混匀。

Recipes

 

药品化学式

分子量

工作浓度 (mol/L )

配制1L所需质量(g)

配制2L所需质量(g)

配制4L所需质量(g)

配制5L所需质量(g)

NaH2PO4.2H2O

156.01

0.020

3.1202

6.2404

12.4808

15.601

Na2HPO4.12H2O

358.14

0.080

28.6512

57.3024

114.6048

143.256

甲醛干粉

30.03

4%

40

80

160

200

磷酸钠缓冲液pH=7.4;最终pH=7.0-7.4。注:由于甲醛干粉易飞,溶液挥发也会刺激眼睛和呼吸道粘膜,称量和分装需佩戴防毒口罩、护目镜等护具。


Comment
Please login to post your questions/comments. Your questions will be directed to the authors of the protocol. The authors will be requested to answer your questions at their earliest convenience. Once your questions are answered, you will be informed using the email address that you register with bio-protocol.
You are highly recommended to post your data including images for the troubleshooting.
You are highly recommended to post your data (images or even videos) for the troubleshooting. For uploading videos, you may need a Google account because Bio-protocol uses YouTube to host videos.