材料和试剂

1. 纸巾

2. BD 1ml注射器滑动与BD尖端PrecisionGuide TM 针，26G X 5/8（0.45毫米×16毫米;费舍尔施恩IFIC，目录号的：BD一百三个和九个千五个一百和九十-七）

3. 手套（研究人员与小鼠接触时应始终佩戴的手套）

4. 处理套（Ansell，目录号：19-120-3177）

5. 床上用品：剃须（PJ墨菲林产品）

6. 雪松床上用品（PetsPick ）

7. 进行行为测试之前，我们先将一个性别的小鼠（8-15周大）单独收容。

可以免费使用小鼠食物和水在他们的居住笼。环境富集这样的作为筑巢的材料（例如，Nestlets）一退特点是每个居住笼。他们的居住笼区进行温度控制（23°C）对于12:12 ^ h 亮/暗循环。在循环的亮部分进行行为测试。

注意：此方案已使用C57BL / 6J小鼠进行了优化，但也可用于其他菌株。

8. 70 Pasento（V / V）乙醇稀释从库存使用水（费舍尔小号系统求解，目录号：A4094）

9. 无菌盐水（Growcells ，目录号：msdw-1000，保质期：3年，在室温下保存）

10. 盐酸可卡因（Sigma-Aldrich，CAS编号：53-21-4）

配套设备

重型手推车（Rubbermade TM ，目录号：11-926-75）
CPP腔室（定制；图1）
在CPP腔上方安装了四个数码相机（例如，单色IR GigE相机；Noldus 信息技术）
高架摄像机安装支架
高架灯
静音模式秒表
照度计（Fisher Scientific，目录号：0666264）
Dell Precision台式机（例如，处理单元Precision T5810）

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902986--1358安德烈·怀特856412 \图jpg \图1.JPG

图1. 两个有条件的位置偏爱设备。外部隔间（地板：12.5厘米x 17 厘米；高度：32.5厘米）被较小的内部隔间（地板：12.5厘米x 11.5厘米；高度：32.5厘米）隔开。带有方格纸的隔层在下面带有雪松木屑的网格地板;带有白色纸面的隔间在下面带有松木屑的条形地板;中间的隔层为纯灰色地板，两个灰色壁和两个带有方格或白色触点的壁断头台将分隔开的隔层与中间的隔层分隔开来，以匹配相邻的隔层。

软体类

EthoVision XT跟踪系统（Noldus 信息技术有限公司，弗吉尼亚州里斯堡）
Microsoft Excel（Microsoft）
统计软件（即SPSS，GraphPad Prism，R）

程序

实验设置
将CPP仪器放置在专门用于行为研究的房间中。该房间应没有异味或声音。在整个实验过程中，应关闭房间的室内照明灯，因为过高的照明灯将在测试过程中用于跟踪小鼠（图2）。在每个腔室的中间放置一个照度计（即，在图1所示的网格或条形地板的顶部），以确保来自所有腔室的头顶灯的光强度（100 lux）相似CPP设备的
注意：用于外科手术或畜牧业的房间不适合使用，同样，在开始实验之前，应先更换有香味和其他强烈气味的衣服。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902986--1358安德烈·怀特856412 \图jpg \图2.JPG

图2. 有八个设备的有条件的场所优先房间设置。每个CPP腔室都分配了一个盒子ID（例如，盒子1）。每个盒子的方向与相邻盒子呈反平行（旋转180°）。每个盒子的位置为永久固定，顶灯的位置应避免在车厢地板上形成阴影，每个摄像机的位置应从两个盒子中进行记录。

在Microsoft Excel中创建一个表，其中包括鼠标ID，组分配，框号和在格子和白色隔室中花费的时间。
将每只鼠标分配到专用的行为盒，该行为盒带有可卡因配对和生理盐水配对的隔室。
注意：在此步骤中，确保在每个试验中对照组和实验组的代表均相同。对于每组，将白色隔室分配为一半小鼠的可卡因配对隔室，对于另一半，将白色隔室分配为以这种方式平衡注射室分配可防止室偏倚混淆CPP分数。盐水配对室。最好确保在整个实验中，每个研究小组代表每个小组。

在实验开始前一周将家鼠放在单独的笼子中，此时可以为小鼠分配唯一的标识。
注意：实验者应该对每只小鼠的治疗组视而不见。

在实验开始前称重小鼠。
准备实验所需的可卡因剂量。
设置录制软件以录制视频以及实时跟踪（如果可能）。

处理老鼠
打开行为室的头顶灯，戴上丁腈或乳胶手套。
注意：在整个实验过程中，必须戴相同类型的手套。

从它们的动物架子上取下装有老鼠的笼子，然后将它们放在多功能车上。
使用工具车将小鼠转移到行为室。
注意：避免在传输过程中产生过多的噪音和嘎嘎声非常重要，这些声音和动作可能会给小鼠带来压力。

使用70％的乙醇清洁手套和处理套筒，但要等到乙醇蒸发后再处理小鼠。
通过快速抓住鼠标尾巴的底部并将其放在处理套中，将鼠标从笼子中取出。
让鼠标自由滑动处理套筒3分钟，然后再将其放回笼中（图3 ）。
处理每只鼠标后，请清洁手套和处理套。
重复处理和手套清洁步骤，直到所有老鼠都被处理完为止。
使用工具车将老鼠送回其饲养室和动物架子。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902986--1358安德烈·怀特856412 \图jpg \图3.jpg

图3.条件位置偏好示意图。说明了同一组中两只小鼠的代表性日序列。小鼠连续三天接受处理3分钟。在预测试中，允许小鼠自由探索三室设备15分钟在第5天和第7天，在将小鼠限制在其中一个较大的车厢内之前，先给予可卡因，然后允许他们探索该车厢30分钟，然后进行平衡实验，以确保有一半的老鼠与可卡因配对。在第6天和第8天，在将小鼠限制在没有可卡因的大隔间之前，先给予生理盐水，然后允许他们探索该隔间以30分钟，第9天休息一天，将小鼠关在笼子里。在测试后，让小鼠自由地探索三厢设备进行预测试的方式（持续15分钟）。

预测
通过打开头顶的灯准备行为室。
使用70％乙醇清洁每个CPP腔室。
打开断头台的门，以便小鼠可以在每个隔间之间自由移动。
打开计算机和录音软件。
使用工具车仅将要一起奔跑的小鼠转移到行为室。
设置记录软件以开始跟踪小鼠何时进入每个隔室，并在经过15分钟后停止。
抓住每只老鼠尾巴的根部，然后将它们移到您的手掌上。
将每只鼠标放在其预定CPP框的中央隔室中。
注意：确保每只鼠标放到CPP设备中时，它们都面对中间隔室的灰色壁之一，这将减少特定隔室的任何偏斜。

让小鼠探索CPP仪器15分钟（图3 ）。
将老鼠从设备中取出并转移到笼子中。首先，通过关闭断头台门将老鼠限制在中央隔室中，然后抓住其尾巴的底部，然后立即将其放在手掌然后放在笼子中。
使用工具车将所有老鼠送回其容纳室。
打开断头台的门，并用70％的乙醇彻底清洁CPP设备，特别注意可能积聚尿液或排便的区域。
注：床上用品（即，松树和雪松）可以留在地方，全部实验的，除非有一个积累的尿液或排便。

设置计算机以记录下一组小鼠。
在取出下一组小鼠之前，使用70％的乙醇清洁手套。
重复步骤C5-C14，直到所有小鼠都经过测试。

调理
准备盐水和可卡因溶液。
注意：建议在初步实验中使用适量的可卡因剂量（例如10 mg / kg）– 可能会观察到记忆力减退或增强。

出牛逼测量他量盐水或可卡因要给予每只小鼠从该股的使用注射器。
将每个已填充的注射器放在CPP腔室的前面，将在其中添加注入的鼠标。
使用70％乙醇清洁每个CPP腔室。
关闭断头台的门，以便将老鼠限制在外部隔间中。
使用工具车仅将要一起奔跑的小鼠转移到行为室。
在将鼠标放入指定的外部隔室之前，通过腹膜内注射施用盐水或可卡因。
设置一个30分钟的计时器，让小鼠探索指定的隔室（图3 ）。
注意：在调节过程中无需记录小鼠，但是，如果需要调节过程中的活动，则可以激活记录软件。

30分钟过后，将每只鼠标从各自的CPP盒中取出，并将其转移到其笼子中。
使用工具车将所有老鼠送回其容纳室。
在取出下一组小鼠之前，使用70％的乙醇清洁手套。
重复步骤D1-D10，直到测试所有小鼠。

后测
重复预测试中概述的步骤。

资料分析

使用您的录音软件来计算在预测试期间每个隔间中花费的时间。
计算预测试中每只小鼠的CPP得分.CPP得分是在可卡因配对隔室中花费的时间减去在盐水配对隔室中花费的时间（表1）。
注意：由于各组的排列方式使得每个组在每个框中都有代表，并且有相等数量的可卡因与方格和白色隔室配对的小鼠，因此需要保持警惕，以准确计算相邻小鼠的CPP评分。例如，在表1中，以下计算鼠标1（CPP分数=白色格仔）和鼠标2（CPP分数=白色格仔）的CPP分数是不同的。

通过自变量（例如，基因型，治疗或性别）对小鼠进行组织。表2所示为两组实验的代表表。
计算后测中每只小鼠的CPP得分（表3）。
比较前测和测后几天的总距离也可以作为行为控制，观察各组之间相似的距离，则表明实验组相对于对照组的CPP评分的任何潜在差异都不能归因于运动。
通过自变量以与预测试类似的方式组织小鼠（表4）。

表1.来自预测试的代表性CPP数据实验前，每只小鼠被分配了一个CPP盒，可卡因配对和盐水配对隔室。

第一场

鼠标ID

组别

包装盒

方格的

白色

CPP分数

1个

一

1个

313.780

275.542

38.238

2

一

2

326.393

240.107

-86.286

3

乙

3

336.336

204.004

132.332

4

乙

4

257.591

196.463

-61.128

5

一

5

329.596

284.785

44.811

6

一

6

229.696

296.230

66.534

7

乙

7

374.708

240.040

134.668

8

乙

8

351.552

225.959

-125.593

会议2

9

乙

1个

277.678

341.208

-63.53

10

乙

2

272.206

261.261

-10.945

11

一

3

365.432

286.520

78.912

12

一

4

360.627

206.139

154.488

13

乙

5

363.096

251.318

111.778

14

乙

6

357.558

252.319

105.239

15

一

7

352.386

335.135

17.251

16

一

8

252.119

216.950

35.169

表2.预先测试的代表性组数据。每组小鼠的平均CPP得分按组进行重组，以消除异常值并进行未来分析

A组

B组

滑鼠

CPP分数

滑鼠

CPP分数

1个

38.238

3

132.332

2

-86.286

4

-61.128

5

44.811

7

134.668

6

66.534

8

-125.593

11

78.912

9

-63.530

12

54.488

10

-10.945

15

17.251

13

111.778

16

35.169

14

105.239

均值

31.139625

均值

27.852625

表3.来自后测的代表性CPP数据。获得偏好的小鼠在后测中将显示正CPP分数。CPP分数的大小说明了可卡因学会的强度。

第三场

鼠标ID

组别

包装盒

方格的

白色

CPP分数

1个

一

1个

433.233

225.359

207.874

2

一

2

214.414

401.802

187.388

3

乙

3

406.273

302.069

104.204

4

乙

4

232.499

369.57

137.071

5

一

5

448.048

136.003

312.045

6

一

6

269.069

331.131

62.062

7

乙

7

431.565

383.05

48.515

8

乙

8

227.895

315.249

87.354

会议4

9

乙

1个

275.909

210.21

65.699

10

乙

2

272.606

346.213

73.607

11

一

3

408.475

182.916

225.559

12

一

4

251.585

43.877

207.708

13

乙

5

334.268

200.067

134.201

14

乙

6

250.717

341.875

-91.158

15

一

7

465.532

180.914

284.618

16

一

8

485.752

287.888

197.864

表4.来自Posttest的代表性组数据。每组小鼠的平均CPP得分按组进行重组，以进行将来的分析。

A组

B组

鼠标ID

CPP分数

鼠标ID

CPP分数

1个

207.874

3

104.204

2

187.388

4

137.071

5

312.045

7

48.515

6

62.062

8

87.354

11

225.559

9

65.699

12

-92.292

10

73.607

15

284.618

13

134.201

16

202.136

14

-91.158

均值

173.674

均值

69.937

使用您喜欢的统计软件（即，SPSS，的GraphPad Prism，R）来分析CPP成绩为检测前后采用双因素重复测量分析的遗传变异。如果数据是正态分布的，邦费罗尼事后测试可以进行比较两组均值的差异。此外，如果结果不是正态分布的，则可以使用非参数检验，例如曼恩·惠特尼检验（Mann-Whitney test），这些统计检验将表明在每个组内是否显着可卡因调理后在可卡因分配室中花费了更多时间。统计测试的结果还将表明各组之间可卡因配对室中的时间量是否有任何显着变化。这些特定的比较可以使用Student's α水平保持在0.05的t 检验。图4说明了代表性数据。
注意：如果您的小组中包括男女，则应首先检查性别差异或将其作为一个单独的因素。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902986--1358安德烈·怀特856412 \图jpg \图4.jpg

图4.比较A组和B 组的示例图。A 组代表对照组（例如，野生型）B组代表实验组（例如，突变体）。条形图表示平均CPP评分（可卡因配对减去盐水配对） ± 小号.E 。中号。对于每个组在检测前后。前测数据表明，无论是集团具有很强的偏好无论是车厢前调理。后测的数据显示，A组小鼠开发出一个强大的CPP得分，而CPP得分中B组衰减了。通过两次方差重复测量分析（ANOVA），揭示了组（F 1,14 = 15.31，P = 0.0016）和调节（F 1,14 = 25.61，P = 0.0002）的主要影响，以及相互作用（F 1,14 = 8.566 ，P = 0.0110）。

注意事项

该协议已使用C57BL / 6J小鼠进行了优化，通常在预测试时产生的CPP得分在-150到150 s之间。但是，此范围可能因劳损或治疗等而异。气味强度获得类似结果使用各种菌株。标准排除应确定在实验之前，的CPP设置的功能（即，气味，长城图案和光强）被选中是因为他们不会导致CPP比分在预测试属于西格Nificantly不同于零。此外，小鼠随着甲CPP评分之外±250秒。在预测试被排除在外。

致谢

该方案改编自White 等人，2016。先前的工作得到了美国国立卫生研究院（DA025922，DA036984和MH101491 ），国立卫生研究院的国立普通医学科学研究所（GM055246 ）的资助，教育部GAANN（P200A120165），美国国立药物滥用研究所（F31DA038505）和国立衰老研究所T32补助金（AG000096-31）。最近的工作得到了Mount Holyoke学院的支持。

竞争利益

作者没有利益冲突。

道德规范

从2011 年至2020年，所有实验程序均获得了加州大学欧文分校（IACUC＃：2006-2620 ）和霍利奥克学院（IACUC＃：BR-56-1117 ）的机构动物护理和使用委员会的批准。

参考文献

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Everitt ，BJ，Parkinson，JA，Olmstead，MC，Arroyo，M.，Robledo，P。和Robbins，TW（1999年），成瘾和奖励中的联想过程，杏仁核-腹侧纹状体子系统的作用，纽约州Acad Sci 877 ：412-438。
谢克特，MD和Calcagnetti ，DJ（1993）。趋势位置偏爱调理用交索引参考书目; 1957年至1991年。神经科学Biobehav 版本17（1）：21-41。
Tzschentke ，TM（1998）。测量报酬与位置偏爱范式:.综述药物影响，新进展，新问题 PROG 神经生物学56（6）：613-672。
White，AO，Kramár ，EA，Lopez，AJ，Kwapis ，JL，Doan，J.，Saldana，D.，Davatolhagh ，MF，Alaghband ，Y.，Blurton -Jones，M.，Matheos ，DP和Wood，MA（ 2016）。神经元特异性核小体重构在可卡因相关记忆中的作用。Nat Commun 7：11725。