材料和试剂

设备

程序

M。卡那霉素菌株接种在脑心浸液（BHI）平板（当合适时补充有抗生素）中，并在37℃下在含有5％CO 2的气氛中生长过夜。
从板中收获细菌并重悬于补充有0.15％明胶（PBS-G）的PBS中。将该悬浮液用于接种BHI肉汤至〜550nm的OD 620nm，并在37℃下以200-250rpm生长，直到OD 620nm为1.0至1.2中日志）。使用不同的生长培养基是可能的，但可能影响外膜蛋白质谱。当比较不同菌株的外膜蛋白谱时，始终使用相同的生长培养基。
随后，通过以3,200×g离心10分钟收获细菌。
使用ReadyPrep Membrane I试剂盒根据制造商的说明书分离外膜。
在裂解程序期间，加入50mg酸洗玻璃珠（150-212μm）以与TissueLyser LT均化。 TissueLyser在50Hz下操作5次1分钟。
将悬浮液在冰上在每个TissueLyser步骤之间冷冻1分钟
使用2D-Quant试剂盒根据制造商的说明书进行蛋白质定量。
在4-15％TGX凝胶上分离5微克外膜制剂，并通过胶体考马斯染色（Pink等人，2010）进行分析。

致谢

该协议发表于：de Vries et al。（2013）。本研究得到了维也纳卓越奖（VSOE）资助（ID337956）的资助。

参考文献

de Vries，S.P.，Burghout，P.，Langereis，J.D.，Zomer，A.，Hermans，P.W.和Bootsma，H.J。（2013）。在铁限制条件下对粘膜炎莫拉氏菌生长的遗传学要求。 Mol Microbiol 87（1）：14-29。
Pink，M.，Verma，N.，Rettenmeier，A.W.and Schmitz-Spanke，S。（2010）。 CBB染色方案，具有更高的灵敏度和质谱兼容性。 em> 31（4）：593-598。