材料与试剂

1.两室风琴浴【由墨尔本大学物理系（Swaminathan）制造 et al., 2016) ] 或同等物，例如玻璃培养皿，直径 14 厘米（例如， Sterilin 140 毫米培养皿， Thermo Scientific，目录号：501V）
2.器官浴管
a.克雷布斯溶液流入管
我。聚乙烯管 3.00 mm × 2.00 mm（Microtube Extrusions，North Rocks NSW，目录号：PE300200）
二. 1 厘米Masterflex铂金固化硅胶管（John Morris Group，目录号：96410-14；L/S 14, 25 英尺）
三.硅橡胶管 0.078 " ID × 0.125 " OD × 50 ft Sil-Med Corporation
四.管连接器（200 μL移液器吸头）（ Axygen ，目录号：AX-T-200-Y）
b.真空管和卡波金管
实验室管 1.02 mm ID × 2.16 mm OD（硅橡胶，目录号：508-005）
c.前压和背压插管流入管
我。单腔聚乙烯管 OD 2.00 mm × ID 1.00 mm 用作插管（目录号：112074）
二. 0.2 厘米实验室管 1.02 毫米内径× 2.16 毫米外径，用于在插管末端形成抓力（硅橡胶，目录号： 508-005）
三. Masterflex L/S ®精密泵管，铂固化硅胶（John Morris Group，目录号：L/S 16 96410-16），用于连接至三通旋塞阀和硅胶管连接器
四. Masterflex L/S ®精密泵管，铂固化硅胶（John Morris Group，目录号：L/S 14 96410-14），用于连接插管和管连接器
v. 管连接器（200 μL移液器吸头）（ Axygen ，目录号：AX-T-200-Y）
d.循环水浴管
我。铂固化硅胶Masterflex L/S ®精密泵管（John Morris Group，目录号：L/S 15 96410-15）
3.鲁尔锁尖端注射器，60 mL（Livingstone，目录号：DSL050MLLCL）
4.Luer Slip 尖端结核菌素注射器，1 mL（Livingstone，目录号：DSL001MLSC）
5.Luer Slip 尖端注射器，10 mL（Livingstone，目录号：DS100MTL）
6.橡胶塞（Mad About Science，10 件装，SKU：MAS-03121-1）
7.玻璃毛细管，直径 8 mm，壁厚 1.5 mm
8.多用途密封剂 [732 Dow Corning（透明）或同等产品]
9.缝合线（白色棉线，Woolworths超市，Woolworths集团，澳大利亚）
10.N ω -硝基-L-精氨酸（NOLA）（ Sigma-Aldrich，目录号：N5501-5G）
11.希尔加德
a.184 有机硅弹性体底座 (DOWSIL)
b.184有机硅弹性体固化剂（DOWSIL）
12.三通旋塞阀（B Braun Discofix ，目录号：16494C）
13.玻璃培养基瓶，透明，500 mL，底部带有软管连接
14.活性炭（White Glo）
15.过滤烧瓶 2 L（ Kimax Kimble，目录号：27060）
16.氯化钠（NaCl）（ Chem-Supply，目录号： SA046-5KG）
17.氯化钾（ KCl ）（Ajax Finechem ，目录号：AJA383-500G）
18.二水合正磷酸二氢钠（NaH 2 PO 4 · 2H 2 O）（Chem-Supply，目录号：SA328-500G）
19.七水硫酸镁 (MgSO 4 · H 2 O)（Chem-Supply，目录号：MA048-500G）
20.二水氯化钙（CaCl 2 · 2H 2 O）（Ajax Finechem ，目录号：127-500G）
21.D-无水葡萄糖（Chem-Supply，目录号：GA018-500G）
22.碳酸氢钠（NaHCO 3 ）（Chem-Supply，目录号：SA001-5KG）
23.盐酸 (HCl)（默克密理博，SKU：100313）
24.蒸馏水(dH 2 O )
25.Krebs 10× 储备液，2 L (4 °C)（参见配方）
26.1× Krebs 溶液，2 L (4 °C)（参见配方）
27.NOLA 溶液 100 mM (4 °C) 5 mL（参见配方）
28.100 μM NOLA-Krebs 溶液（参见配方）

食谱

1.Krebs 10 ×储备液，2 L (4 °C)
试剂最终浓度数量
氯化钠（NaCl）1.18M138克
氯化钾 ( KCl )47.6毫米7.1克
二水正磷酸二氢钠（ NaH2PO4 · 2H2O ）10毫米3.1克
水硫酸镁 ( MgSO4 · H2O )12毫米5.9克
二水氯化钙（ CaCl2 · 2H2O ）32.99毫米9.7克
水分子_不适用2升

2.1 × Krebs 溶液，2 L (4 °C)
试剂最终浓度数量
Krebs 10 ×原液10%200毫升
水分子_不适用2升
D-无水葡萄糖11.1毫米4.0克
碳酸氢钠 (NaHCO 3 )25毫米4.2克

3.NOLA 溶液 100 mM (4 °C) 5 mL
试剂最终浓度数量
N ω -硝基-L-精氨酸 (NOLA)100毫米109.6毫克
盐酸（HCl）1M400微升
水分子_不适用4.6毫升

4.100μM _ NOLA-Krebs溶液 500 mL
试剂最终浓度数量
诺拉解决方案100微米_500微升
1 ×克雷布斯 l 解不适用500毫升_

设备

1.网络摄像头（Logitech Carl Zeiss Tessar HD 1080p 或同等产品）
2.干式加热器（Ratek，型号 PB）
3.循环水浴8.5 L (ELMI TW-2.03)
4.卡博金中国银行有限公司
5.真空（例如实验室真空系统）
6.带夹子的脱水支架（例如，Australian Scientific，目录号：SKU：91055006、91055028、120015）
7.杜蒙镊子，1 型（精细科学工具，目录号： T01-111）
8.杜蒙钳，5 型（精细科学工具，目录号： 11252-30）
9.弯钳（Fisher Scientific，目录号： 17-467-201）
10.精细解剖剪刀（Fine Science Tools，目录号： 14060-09）
11.Vannas 弹簧剪刀（精细科学工具，目录号： 15000-08）
12.用于光敏 NOLA 溶液 100 mM 的琥珀色闪烁 250 μL玻璃瓶（安捷伦，目录号：5183-2085）
13.昆虫别针（澳大利亚昆虫学用品公司，目录号 E-157）
14.温度计（ Westlab ，目录号：072002-0131）

软件

1.VirtualDub版本 1.10.4 64 位
2.GutMap （必须下载到 MATLAB 程序文件文件夹中）
3.MATLAB 2021b（或与 Mac 或 Windows 设备兼容的任何 MATLAB 版本）：
a.曲线拟合工具箱
b.图像处理工具箱
4.罗技 HD Pro 网络摄像头 C920 驱动程序

程序

A.解剖和组织收集

1.通过颈椎脱位剔除小鼠。应避免接触氯胺酮/甲苯噻嗪等药物，以减少对肠道蠕动的潜在影响。
2.称重并记录小鼠体重。
3.用 70% 乙醇喷洒腹部，对切口部位进行消毒。
4.使用弯曲解剖钳和小剪刀，将皮肤固定在中下腹部区域并做一个切口。从最初的切口开始，切一条直线到胸骨。
5.进行横向切口以打开腹腔并暴露肠道。如果需要，打开腹部后立即将 1 × Krebs 溶液倒在组织上，以防止组织在解剖过程中干燥。
6.提起肝脏以暴露胃并剪断食道将其与胃分开。接下来，将精细解剖剪刀平行于组织定向，并沿着胃肠道小心地切割肠系膜，同时继续通过胃抓住胃肠道（使用弯钳），注意避免刺穿组织准备。
7.使用精细解剖剪刀切割骨盆骨，并用弹簧剪刀小心地去除肠系膜以暴露结肠。
8.× Krebs 溶液的培养皿中，小心地解开胃肠道并切割所需的运动段。小心处理，避免拉伸肠道，因为这可能会影响结果。
a.通过切割胃远端胃肠道 5 厘米长来识别十二指肠段。从该点开始，切掉 6 厘米的近端空肠组织。
b.测量回盲肠交界处近端 2 厘米和盲肠-结肠交界处远端 2 厘米，以切除盲肠。
c.从小肠远端测量并切下 5 厘米的回肠组织。
9.立即将解剖的片段放入装有约 30 mL 的 1× Krebs 溶液的 100 mL 烧杯中，置于冰上，并用卡波根气体（95% O 2 ，5% CO 2 ）鼓泡，直到设置准备好进行插管步骤。为了获得最佳的蠕动效果，建议对胃肠段进行插管，并在解剖后 1 小时内开始录像。

B.设置风琴浴

1.用于分析空肠、回肠和结肠运动性的器官浴（图 1A）由澳大利亚维多利亚州墨尔本大学物理系定制（规格如 Swaminathan 等人，2016 年所述）。器官浴的底部衬有黑色硅基弹性体（ Sylgard ），室壁的顶面用一层硅酮密封（多用途密封剂732；道康宁）。硅胶的存在确保了浴缸的防水性，并提供了一个底座，可以将管道牢固地固定在装置上。
a.使用嵌入浴硅胶中的销钉连接入口管和出口管来设置器官浴。所需的管道包括一根前压 (FP) 和一根背压 (BP) 插管、一根卡波金流入管和一根真空吸引管。 Krebs 溶液流入管预先插入双室器官浴内，每个入口均涂有硅胶以避免漏水。确保 Krebs 溶液流入管的长度至少为 45 厘米，以连接到流入水库。
b.将外径为 15 mm 的 Masterflex L/S ® 精密泵管（或等效橡胶软管）连接到器官浴的入口和出口管，并将管的另一端连接到外部水浴以允许加热蒸馏水在双室内流动。

图 1. 器官浴评估 (A) 小肠 (SI) 和结肠制剂以及 (B) 盲肠的运动性。 (A) 结肠/小肠器官浴有两个室，可以同时测定两种组织制剂。 (B) 盲肠器官浴是一个培养皿，允许对盲肠制剂进行三向插管。设置 (A) 的温度由外部水浴调节。将盲肠装置 (B) 放置在加热块上，以确保在整个视频录制过程中温度保持恒定。白色箭头表示克雷布斯溶液的流动，因此表示对肠道制剂施加的压力。

2.使用直径14厘米的玻璃培养皿（底部涂有黑色Sylgard ）作为器官浴；培养皿的边缘也衬有硅胶。
通过用钢制昆虫别针连接管子来设置器官浴。所需管包括一根 FP 插管、两根 BP 插管、一根卡波金流入管、一根真空吸引管和一根克雷布斯溶液流入管。所有 FP 和 BP 插管的插管尖端都需要一个短（2-3 毫米长）橡胶套管。插管尖端应以一定角度（约 45°）切割，以便于插管。
3.使用缝合线，在 FP 和 BP 插管周围打松结。
注意：在器官浴充满 1 × Krebs 溶液之前执行此步骤，因为干线更容易处理。
4.如果使用预制器官水浴，请打开外部水浴。为了确保器官浴中1 × Krebs 溶液的温度保持在 33 至 36 °C 之间，外部水浴的温度应在 50 至 60 °C 之间。
5.如果使用定制盲肠器官浴，请将Sylgard内衬培养皿放在加热块顶部，并设置到所需温度（即 70 至 90 °C 之间，具体取决于环境温度），以确保 1 × Krebs溶液温度保持在 33 至 36 °C 之间。
6.将克雷布斯溶液流入瓶固定到脱水支架上，以设置该瓶。将连接到器官浴的流入管连接到克雷布斯溶液瓶，并扭转 3 路旋塞阀，使克雷布斯溶液流动。通过观察瓶塞毛细管中的气泡，确保克雷布斯溶液流入器官浴（流速为 8 mL/min 或 500 mL/h）。
7.确保器官浴中的克雷布斯溶液不断充满卡波根气体。
8.打开真空泵并确保真空管的位置使器官浴不会溢出或泄漏。
9.使用 10 mL 注射器，将 1 × Krebs 溶液冲洗到 FP 和 BP 流入阀中，以清除可能堵塞 FP 和 BP 管的任何碎片。这些管的堵塞会影响管腔内的压力。
10.将 2 厘米尺子的层压打印输出钉在肠道或盲肠器官浴的Sylgard衬里底座上，并确保它在视频帧中可见。这将确保当用户生成时空热图时可以计算肠道长度和宽度。

C.插管肠道制剂

1.将解剖的肠道段转移到器官浴中。器官浴现在应充满加热的 1 × Krebs 溶液。处理组织时，小心握住剩余的肠系膜，避免接触肠道组织，因为这会影响蠕动。
2.小肠和结肠：
a.使用细镊子，将近端插入 FP 流入管，并在橡胶套管上方打结。这将确保制剂不会滑落。打第二个结以固定准备工作。
b.扭转 FP 旋塞阀，使 Krebs 溶液流过管腔，并轻轻推动内容物以清理管腔。
c.将远端插入 BP 出口管并在橡胶套上方打一个结。这将确保制剂不会滑落。打第二个结以固定准备工作。
d.使用精细解剖剪刀小心地去除剩余的肠系膜，以确保在视频录制期间肠段的边缘清晰可见。
e.将 FP 储液器中毛细管杆的塞子推入以形成压力密封。调整高度，使毛细管杆中的弯液面高度为 6 厘米。
f.通过从器官浴的高度中减去 FP 或 BP 半月板的高度来确定 FP 和 BP 管中的半月板高度。
3.盲肠插管：
a.使用细镊子，将回肠插到连接到 FP 的左侧插管上。拧紧橡胶套上方的结，以确保制剂不会滑落。打第二个结以固定准备工作。
b.使用细镊子，小心地抓住盲肠尖端，并使用细弹簧剪刀将尖端剪断（1-2 毫米）。
c.缓慢拧开 FP 旋塞，让 Krebs 溶液流过插管。 FP 将激活盲肠收缩，将盲肠内容物通过盲肠尖端或结肠的孔推出。为了获得更清洁的制剂（可以使下游视频更清晰），请使用附有 20 μL移液器吸头（以 45° 角切割）的小型 5 mL 注射器轻轻施加更高的 FP 。尽量清理盲肠；然而，避免对组织施加太大的压力，因为这会影响活动性。
d.一旦盲肠体被清理干净，通过拧紧 BP（盲肠尖端）插管上的结，将制剂插入盲肠尖端。打第二个结以固定准备工作。使用别针将插管固定在器官浴的Sylgard涂层表面上的适当位置。
e.如果近端结肠中仍有内容物，请从 FP 轻轻施加压力，以通过结肠冲洗内容物。
f.清洁近端结肠后，通过 BP（结肠）插管对结肠进行插管。拉紧结并打第二个结以固定准备工作。使用销钉固定插管的位置。
g.通过 FP 插管轻轻施加压力并观察 BP 管中上升的半月板，确保每个插管或盲肠制剂中不存在堵塞。
h.消除外部 FP 作用，使 FP 和 BP 溶液稳定至 4 厘米高度。 FP 毛细管和 BP 管中的半月板可能会随着盲肠收缩而上下摆动，但在收缩复合体之间的静止期间将稳定在 4 cm。
i.如果盲肠在收缩时漂浮或摆动，请使用小昆虫针将其轻轻地固定在肠系膜旁的Sylgard涂层器官浴表面上。确保整个盲肠制剂浸没在器官浴中的1 × Krebs 溶液下。
4.在开始视频录制之前检查器官浴温度、FP 和 BP 读数、冒泡卡波和真空抽吸位置。

D.视频录制

1.打开VirtualDub视频捕捉软件。选择“文件” ，然后选择“捕获 AVI...” ，然后在“文件”下输入文件名，然后选择“设置捕获文件” 。
2.为确保视频不会占用大量存储空间，请通过选择“视频”选项卡下的“压缩” ，然后选择“Xvid MPEG-4 编解码器”来压缩视频文件。
3.取消选中“音频”选项卡下的“启用音频捕获”以禁用音频录制。
4.“捕获”选项卡下的设置来设置所需的停止条件。
5.在器官浴上放置覆盖物（即纸板箱），以减少视频录制期间发生的浴液反射引起的眩光和闪烁。
6.使用网络摄像头驱动程序软件（例如 Logitech 驱动程序）调整视频的亮度、对比度、曝光和增益设置，以进一步减少可能干扰录制的眩光或噪声信号。
7.在VirtualDub中，通过选择“捕获”选项卡下的“捕获视频”来开始视频录制。
8.根据实验协议记录 15 分钟视频（例如，组织平衡期间的 2 × 15 分钟视频记录和用于控制、药物和冲洗的 4 × 15 分钟视频记录，即每个实验总共生成 14 个视频文件）。建议拍摄 15 分钟的视频，以便在记录间隔期间定期评估组织和实验设置；但是，可以根据需要延长特定实验方案的记录持续时间。展示胃肠蠕动的视频文件可以在这些发表的文章中查看： Swaminathan 等人。（2016）；霍西等人。（2019）；李等人。（2023）。
9.在每个视频的开头，使用温度计探头记录器官浴的温度并测量 FP 和 BP 半月板的高度。将信息记录在表中。

E.在各种条件下重复视频录制

1.在本例中，一氧化氮合酶 (NOS) 抑制剂 NOLA 100 mM，用 1 × Krebs 溶液按 1:9 稀释，并灌注到器官浴系统中，以研究肠道蠕动的变化。 NOS 是一氧化氮 (NO) 生成的限速酶。 NO 的主要作用是通过抑制收缩来放松胃肠道（Toda 和 Herman，2005）。因此，当应用 NOLA 时，抑制张力的降低预计会导致肠道收缩和收缩频率增加。
2.将 Krebs 溶液流入瓶替换为在 Krebs 溶液中含有 100 μM NOLA的第二个流入瓶，并重复步骤 D5–D7，以可视化存在 NOLA 的运动模式。
3.在 NOLA 存在下完成记录后，更换为常规克雷布斯溶液，并重复步骤 D5-D7，以可视化从器官浴系统冲洗药物 (NOLA) 期间的运动模式。

F.打扫干净

1.用解剖剪刀剪断缝合线，取出肠道制剂。适当丢弃纸巾。请注意：虽然不建议使用运动实验后的组织样本进行组织学分析，但有可能使用实验后的组织样本通过免疫荧光技术评估神经元群体。
2.使用 50 mL 注射器，将蒸馏水通过所有插管和克雷布斯溶液流入管；每管重复此操作三次。
3.使用真空吸管除去器官浴中的蒸馏水。
4.最后，使用 50 mL 注射器将管中残留的水推出。

G.获取时空热图

1.打开 MATLAB 并选择“设置路径” 。将GutMap文件夹添加到 MATLAB 路径并保存。
2.要生成时空地图，请在 MATLAB 命令提示符下键入GutMap ，然后从弹出窗口中选择边缘检测（对于视频文件）。
3.加载 .AVI 格式的视频录制并选择校准来定义视频分辨率和肠道准备的长度。此操作将打开一个新窗口，包括组织准备的图像以及放置在器官浴内的物理尺子。在此窗口中，使用放大符号进行放大。使用光标选择窗口中可见的标尺上相距 1 厘米的两个点。根据这些点， GutMap将计算特定于当前视频文件的像素/毫米校准指标，确保时空热图具有准确的尺寸（图 2A）。

图 2.GutMap边缘检测控制面板。 (A) 要校准当前视频文件的分辨率，请选择“校准” 。这将打开校准图，用户将被引导使用放大工具放大并单击橙色条。用户在标尺上选择相距 1 厘米的两个点。然后校准图将关闭，校准后的分辨率值将出现在边缘检测控制面板中。 (B) 小肠和 (C) 盲肠的边缘检测轮廓。选定的感兴趣区域包含肠段的上边缘和下边缘。红色轮廓描绘了肠道的上边缘，绿色轮廓描绘了肠道的下边缘。所选区域的规格出现在视频信息区域中，可用于匹配视频之间的感兴趣区域尺寸。当肠道组织的轮廓足够时，用户选择生成热图。然后提示用户输入输出文件名 (D)，然后提示用户将文件添加到边缘检测队列以开始边缘检测。对于多个文件的批处理，请参阅文本中的说明。将出现“等待”对话框，并向用户指示热图生成的状态。一旦此过程完成，用户必须退出。

4.使用鼠标在肠道组织的感兴趣区域周围绘制一个矩形。红色轮廓线将定义图像中肠道制剂的上边缘，绿色轮廓线将描绘下边缘（图 2B、2C）。
5.使用时间滑块功能查看所选帧，并确保在进行热图生成步骤之前肠道组织的轮廓已足够。如果存在问题，请调整亮度、对比度和边缘平滑度以提高边缘检测精度。
6.单击生成热图。这将提示用户命名输出文件。选择保存文件的目录，然后单击“添加到队列”以处理视频。
7.重复步骤 G3–G6 以边缘检测其他视频。如果需要，设置框尺寸以在视频之间匹配。选择开始检测以边缘检测队列中列出的视频（图 2D）。

数据分析

A.热图分析

1.单击边缘检测控制面板上的热图分析可访问热图分析控制面板。
2.设置最小和最大颜色显示值。这将分别以暖色调和冷色调显示收缩和扩张。单击“锁定颜色范围”以设置颜色范围。在整个数据集中保持颜色范围恒定非常重要，以便能够在样本和实验之间进行比较。

B.横截面热图分析

1.要分析时空热图的横截面，请选择“获取横截面”按钮（图 3A）。

图 3.GutMap横截面分析。 (A) 在热图分析窗口中，锁定颜色范围并选择“获取横截面”按钮。这将打开一个新窗口 (B)，用户可以在其中将横截面线添加到时空热图上的特定位置。这些横截面线提供输出，包括肠道宽度、功率谱和收缩活动的直方图。 (C) 通过选择弹出图，可以对这些时间横截面进行注释以供进一步分析。

2.单击添加并在热图上的特定位置放置一条线。时空热图下方将出现三个时间图，显示随时间变化的肠道宽度数据、频率功率谱和收缩频率直方图（图 3B）。
a.肠道宽度时间图显示了一系列峰值；最大峰代表静息肠道直径，最小峰代表收缩肠道直径。
b.频率时间图显示频率功率；较低频率的峰值代表神经源性输入，较高频率的峰值代表肌源性输入。
c.直方图显示收缩频率。
3.从热图注释窗口中选择弹出图来注释时间图，以创建时间图的单独图形窗口。使用放大工具放大或缩小时间图，并将鼠标悬停在峰上以放置xy坐标（图 3C）。

C.横截面热图分析：肠道宽度随时间变化的时间图

xy坐标放置在肠道宽度与时间时间图上，以获得最大静息肠道直径、最大收缩肠道直径、收缩复合体的持续时间以及收缩复合体之间的静止期。

D.横截面热图分析：功率谱频率时间图

将数据提示放在峰上以获得肌源性和神经源性输入测量。

E.横截面热图分析：直方图时间图

1.直方图绘制了所选横截面线的收缩活动。
2.单击导出线以文本文件格式导出横截面线的数据值。

F.收缩波的注释

1.要分析收缩，请从热图分析控制面板中选择注释收缩波（图 4A）。

图 4.GutMap收缩波注释窗口。 (A) 在热图分析窗口中，锁定颜色范围并选择注释收缩波。将打开一个新窗口，允许用户手动注释收缩或收缩组。显示了 (B) 结肠、(C) 空肠和 (D) 盲肠热图的带注释的示例 [带注释的区域描绘了从结肠-盲肠交界处（图的上部红色区域）向盲肠尖端传播的盲肠收缩]。收缩波注释工具可用于测量收缩的速度、持续时间和长度，方法是选择手动注释并沿着收缩或收缩簇的斜率绘制一条线。通过在热图分析窗口中选择导出数据，可以导出结果表中获得的数据。

2.注释收缩波窗口中的放大工具放大要分析的收缩。
3.选择手动注释以从收缩的开始到结束绘制一条线（有关示例，请参见图 4B-4D）。
4.带注释的线的指标（速度、收缩持续时间和带注释的收缩长度）将显示在热图下方的表格中。注意：收缩名称可以修改。
5.选择“更新标签”按钮以更改带注释的缩写。结果表将相应更新。
6.要删除注释，请选中结果表中的单个复选框。这将使所选注释在热图上显示为红线。然后，单击删除选定的注释。
7.要导出结果，请返回热图分析控制面板并选择导出数据（图 4A）。

协议验证

为了比较对照和实验条件（即，NOLA 存在下的运动模式）数据，对每个热图（四个对照和四个 NOLA 热图）的数据提示进行平均。然后可以将平均值输入 GraphPad Prism 版本 9.5.0（或替代统计软件），其中执行不配对t检验以比较各种参数（频率、直径、速度和持续时间）。该分析过程可应用于各种胃肠道组织片段（即小肠、盲肠和结肠）。例如，在这里我们显示了在基线和 NOLA 条件下从 n = 3 只雌性小鼠获得的结肠运动数据（图 5）。我们观察到 NOLA 治疗后静息时结肠直径（收缩）减少；然而，结肠迁移运动复合体的频率、速度或持续时间没有变化。

图 5. n = 3 只雌性小鼠的结肠迁移运动复合体 (CMMC) 分析。 (A) 对照和 (B) NOLA 条件下的代表性结肠热图显示暖色调的收缩活动和冷色调的松弛。 (C) 对增殖超过结肠长度 50% 的 CMMC 进行计数，并在对照组和 NOLA 组之间进行比较。 (D) 对放置在时间横截面图峰值处的数据尖端进行平均，以获得对照组和 NOLA 组之间的最大静息直径。 (E) 和 (F)手动注释工具用于注释传播超过结肠长度 50% 的 CMMC 的斜率。自动输出速度和持续时间结果，然后使用不配对学生t检验进行平均并在对照组和 NOLA 组之间进行比较。

致谢

所有作者都批准了稿件的提交。 ELH-Y 得到了 ARC 未来奖学金 (FT160100126) 和 RMIT 副校长高级研究奖学金的支持。 TAS 和 CYQL 获得了皇家墨尔本理工大学研究津贴奖学金 (RRSS)。该协议描述了基于我们之前发布的方法协议的显着增强的方法： Swaminathan 等人。（2016）。

利益争夺

作者宣称没有利益冲突。

道德考虑

所有动物处理和安乐死程序均按照 RMIT 动物伦理委员会批准的严格指南进行（AEC#：21268）

参考

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Costa, M.、Dodds, KN、Wiklendt, L.、Spencer, NJ、Brookes, SJH 和 Dinning, PG (2013)。豚鼠、小鼠、兔和大鼠结肠中的神经源性和肌源性运动活动。是。 J.生理学。胃肠测试。肝脏生理学。 305(10)：G749–G759。
Costa, M.、Wiklendt, L.、Simpson, P.、Spencer, NJ、Brookes, SJ 和 Dinning, PG (2015)。参与豚鼠结肠粪便颗粒形成和推进的神经机械因素。神经胃肠病。莫提尔。 27（10）：1466-1477。
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