材料与试剂

1.无机13 C（Sigma-Aldrich，目录号：364592)
2.N 2气（氧气和氩气厂有限公司)
3.O 2气（氧气和氩气厂有限公司)
4.12 CO 2气体（氧气和氩气厂有限公司)
5.13 CO 2 （同位素纯度为 99 原子百分比）气体（Sigma-Aldrich，目录号：364592-10L-EU）
6.石灰苏打（Merck Millipore，目录号：1068395000）
7.莱茵衣藻菌株 CC-124（UTEX 藻类培养物保藏中心）
8.Chlorella sorokiniana UTEX 1663（UTEX 藻类培养物保藏中心）
9.小球藻
10.HEPES（Sigma-Aldrich，目录号：54457）
11.氢氧化钠（NaOH）（Sigma-Aldrich，目录号：655104）
12.氯化钙（CaCl 2 ）（Sigma-Aldrich，目录号：C4901）
13.氯化铵（NH 4 Cl）（Sigma-Aldrich，目录号：213330）
14.七水硫酸镁（MgSO 4 ·7H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：230391）
15.磷酸二钾（K 2 HPO 4 ）（Sigma-Aldrich，目录号：P3786）
16.磷酸二氢钾（ KH 2 PO 4 ）（Sigma-Aldrich，目录号：PX1562）
17.乙二胺四乙酸（EDTA）（Sigma-Aldrich，目录号：E9884）
18.硼酸（BO 3 H 3 ）（Sigma-Aldrich，目录号：B0394）
19.七水硫酸锌（ZnSO 4 ·7H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：221376）
20.四水合氯化锰(II) (MnCl 2 · 4H 2 O)（Sigma-Aldrich，目录号：221279）
21.七水硫酸铁(II) (FeSO 4 · 7H 2 O)（Sigma-Aldrich，目录号：215422）
22.六水合氯化钴(II) (CoCl 2 · 6H 2 O)（Sigma-Aldrich，目录号：255599）
23.五水硫酸铜（CuSO 4 · 5H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：209198）
24.四水钼酸铵 (Mn 7 O 24 (NH 4 ) 6 · 4H 2 ) （Sigma-Aldrich，目录号：09878）
25.甲醇（Sigma-Aldrich，目录号：34860）
26.氯仿（Sigma-Aldrich，目录号：650498）
27.叔丁基甲基醚（Sigma-Aldrich，目录号：650560）
28.液氮（N 2 ）
29.干冰
30.工业乙醇
31.HP（HEPES-磷酸盐）培养基（pH 7.2）（参见配方）
a.营养储备（参见食谱）
b.磷酸盐缓冲液 1,000 × （参见配方）
c.赫特纳的解决方案（参见食谱）
32.MTBE（甲基叔丁基醚）溶液（参见配方）

设备

1.2 、O 2和 CO 2进行校准的气体（质量流量）控制器（Brooks Instruments，型号：5850S）和智能控制软件（Brooks Instruments）
2.20毫升注射器
3.注射泵（KF科技，型号：NE-1600多通道注射泵）
4.透明管（Vici Jour，目录号： RT-4007-M10）
5.Luer 适配器（Upchurch Scientific、Union Polyproprane、UPP 系列）
a.无凸缘套圈（Upchurch Scientific，目录号： UPP-200N）
b.联盟大会（Upchurch Scientific，目录号： UPP-360）
c.Luer 适配器（Upchurch Scientific，目录号： UPP-658）
6.气体清洗瓶（Robu Glasfilter-Geräte，目录号： 41101）
7.平板玻璃光生物反应器（ PSI，型号：FMT-150）
8.冷白光 LED 阵列（PSI，型号：3500-D）
9.离心机（Eppendorf，型号：5418 R ）
10.LC-MS（Thermo Fisher Scientific，型号：TSQ Quantum Ultra，配有 Excalibur 2.07 SP1 和 TSQ Quantum 1.4 软件）
11.GC-MS（LECO Instruments GmbH ，型号： Pegasus III TOF-MS）
12.气相色谱仪（安捷伦科技，型号： 6890N24）
13.加湿器：
a.实验室瓶（DURAN，Sigma-Aldrich，目录号：Z305197）
b.用于 GL 45 的带过滤盘的头（ROBU Glasfilter-Geraete GmbH，目录号： ISO 4793-80）
14.50 mL 离心管（Sarstedt，目录号： 62.547.004）
15.冻干机（Martin Christ ，型号： Alpha 2-4 LSCbasic）
16.微流控混合器（根据 Sivashankar 等人的原创设计制造，2016）
17.照度计（LI-COR，型号：LI-250A）
18.气泵（ Sera precision，型号：air 275 R plus，目录号：08814）
19.高压灭菌器（Witeg，型号：WAC-60 230 V）
20.过滤器 0.22 μm（Sigma-Aldrich，目录号：SLMP025SS）
21.水浴锅（GFL，型号：1002）
22.氧传感器（梅特勒-托利多，型号：InPro 6800）
23.pH 传感器（梅特勒-托利多，型号：InPro 3250）
24.正置显微镜（尼康，型号：Eclipse E200）
25.SpeedVac 浓缩器（ Thermo Fisher Scientific，型号：SPD210）
26.气体分析仪（LI-COR，型号：LI850）

程序

A.藻类培养

按照以下说明在平板玻璃生物反应器容器中培养藻类培养物。 Treves 等人描述了与该技术相关的更多细节。（2017）。
1.准备 HP 介质（参见配方）。
2.高压灭菌器 (121 °C ，饱和蒸汽，30 分钟）每个生物反应器比色皿（参见https://photo-bio-reactors.com/products/photobioreactors/#details ）配有 1 L HP 介质并连接氧气和 pH 传感器。
3.在无菌工作台上，将 0.22 μm 过滤器连接到系统的所有空气入口/出口，并将10 mL 的无菌接种物添加到生物反应器介质中，以达到OD 735nm = 0.02 的初始细胞密度。培养物的光密度由生物反应器激活后测量（参见https://photo-bio-reactors.com/products/photobioreactors/#details ）。
4.在为每个菌株定义的最佳或目标温度下启动生物反应器，并在光照条件下照射细胞（以μmol光子为单位） m -2 · s -1 ) 针对研究目标进行优化和设计。为了可靠地估计体内通量，用于标记的照明水平应设置为反映生物反应器内的穿透光水平，如使用生物反应器中运行的培养物内的积分球测量的。
5.使用空气泵以大约1 L / min 的速度提供鼓泡空气，并通过集成生物反应器传感器每 1 – 5 分钟监测 pH、溶解氧浓度和 680 和 735 nm 的光密度 (OD) ( https://photo -bio-reactors.com/products/photobioreactors/#details ）。
6.针对每种藻类或条件对三个独立的生物反应器运行进行独立的生物复制。
7.通过测量每种培养物每体积的无灰干重来确定样品中有机材料的重量，如 Klassen 等人之前所述。（2015）。
注意：使用光学显微镜和 Luria-Bertani 电镀/孵育评估和验证培养物的无菌性。

B.13 CO 2 - 标签和取样程序

两种装置用于向藻类液体培养物提供无机13 C（图 1）。

图 1. 简化的标记程序方案。流程图展示了快速（左）和慢速（右）标记程序的主要步骤。

1.极短脉冲（长达 40 秒）和快速标记（时间点 5、10、20 和 40 秒）：
a.在玻璃瓶中加入 400 mL 的新鲜 HP 介质（pH 7.2）。
b.将玻璃瓶放入控温水浴中，保持每种藻类培养物的生长温度，最好在单独的房间中以避免混合前生物反应器运行培养物中的13 CO 2污染。
c.用合成气体混合物（78% N 2 、21% O 2和 400 ppm 13 CO 2 ）鼓泡 30 分钟，以达到 < 1% 残留12 CO 2水平（参见图 2B）。通过气体洗涤瓶将废气流过石灰苏打颗粒，以避免运行培养物的13 CO 2交叉污染。

图 2.通过 (A) 通过藻类培养物鼓泡或 (B) HP 培养基或双蒸水 (DDW) 提供13 CO 2的动力学。使用气体分析仪对藻类培养物/培养基/DDW 的排气进行测量，监测脉冲时的12 CO 2水平。 (A) 不同的藻类培养物，生长到与每种藻类和条件的 T0 相对应的密度，并用自然空气鼓泡。此后，自然空气迅速变为（红色箭头）为基于13 C 的合成标记空气混合物（参见程序）。相反，在第一次更换后大约 20 分钟，鼓泡再次快速替换为自然空气（绿色箭头）。

d.将 20 mL 注射器清洗 3 次，并用鼓泡溶液填充（尽量减少与空气的接触）。
e.将注射器装入注射泵。
f.将鲁尔接头拧到注射器的螺旋尖端，将注射器与透明管连接。
g.打开注射泵和生物反应器上方的光源，并调整至步骤 A4 中测量的照明水平。
h.在混合器和冷却的 50 mL 管之间连接透明管（长度根据脉冲时间调整，参见注释）（参见图 3A）。

图 3.快速藻类标记系统方案。 (A)用13 CO 2基合成空气混合物鼓泡的新鲜培养基（参见程序）与在受控LED照明下从生物反应器中取出的新鲜藻类样品混合。 (B) 将溶液在特制的透明芯片中快速（< 1 s）混合，并通过透明管注入保持在-70°C 的 70% 甲醇溶液中。脉冲长度（5 – 40 秒）通过管道长度控制。

i.在灯光下使用透明管将新鲜的藻类样品抽取到 20 mL 注射器中。将注射器装入泵，同时避免整个过程中出现任何阴影。
j.将鲁尔接头拧到注射器的螺丝尖端，将注射器连接到透明管（图 3A）。
k.手动操作泵将液体推入两个注射器中，并将残留空气从管中去除至微流体混合器。将注射泵编程为四个管长度中每个管长度所需的体积（参见上面 B 部分，步骤 1h）。将培养物和新鲜培养基推入透明混合器和管道，并将 1:1 混合物收集到 50 mL 管中，冷却至 70% 甲醇溶液
-70°C。将管子在用干冰预冷的乙醇浴中冷却（参见图 3A 中的方案）。将混合样品注入冷却的70%甲醇中以达到1:2的比例（例如，将15mL样品注入30mL 70%甲醇中）（参见注释）。
l.将冷却的 50 mL 管保持在 -70 °C 直至离心（3,200 × g ， 3 分钟，-9°C）。
m.弃去上清液（见注释）并立即将沉淀冷冻在液氮中。
n.通过将相同的藻类培养物与在与 B 部分步骤 1b 相同的温度下用环境空气预先鼓泡的新鲜 HP 培养基混合，对每个脉冲时间序列复制品的非标记样品重复相同的程序。
o.快速冷冻后，样品可储存在 -80 °C 冰箱中直至提取。
p.将冷冻沉淀重悬于冰冷的甲醇/氯仿（5:1，v/v）中。
q.对重悬细胞进行四次冻融循环（参见注释），并按照甲醇/氯仿程序进行代谢物提取（参见 Mettler 等人，2014）。

笔记：
1.如前所述，使用质量流量控制器混合合成气体混合物（Szecowka 等人，2013）。
2.从生物反应器采样到猝灭管的整个路径，由位于上部的冷白 LED 阵列提供光，其强度与每种培养物的穿透光相对应，并避免遮光。
3.通过将下游透明管的长度安装到混合器以在期望的时间将培养物/ 13 CO 2溶液混合物喷射到猝灭管中来实现脉冲持续时间。
4.上清液中的代谢物水平（参见 B 部分，步骤 1m）应通过 LC-MS/MS 进行评估，理想情况下应高达同等颗粒的约 1%。
5.根据藻类菌株的细胞壁刚性，冻融循环的次数应调整至所有叶绿素迁移到氯仿相的点。
6.根据 Sivashankar 等人，2016 年提供的详细设计，微流体混合器（图 3B）可以通过 3D 打印来生产。
2.长13 C 孵育时间（15 – 300 分钟）和缓慢标记：
通过用用于快速标记的气体混合物直接鼓泡培养物来引入无机13 C。
a.13 CO 2气体混合物（约 1 L/min）对藻类进行气泡培养，以进行快速标记。将气体混合物从自然空气切换为相同的合成13 C 标记空气混合物 (T0)。（在脉冲的几分钟内，培养物中的残留12 CO 2应低于 2%。参见图 2A）。通过气体清洗瓶将标记培养物的废气流穿过石灰苏打颗粒，以避免其他运行培养物的13 CO 2交叉污染。
b.13 C 合成气体混合物鼓泡 15、30、60、120、180 和 300 分钟时将样品收集到 50 mL Falcon 管中。
c.立即离心（3,200 × g ，3 分钟，-9 °C），除去上清液，并将沉淀冷冻在液氮中。
d.将冷冻颗粒重新悬浮在预冷（-20°C）MTBE 溶液中。
e.对重悬沉淀进行四次冻融循环，然后进行两相 MTBE 提取以分析代谢物、蛋白质和淀粉，如 Jüppner 等人所述。（2017）。
我。在 SpeedVac 浓缩器中干燥含有脂质的上层 MTBE 相，并储存在 -80°C 下以分析脂质含量和13 C 标记。
二.在 SpeedVac 浓缩器中干燥包含极性和半极性代谢物的下层相，并储存在 -80 °C 下以进行代谢物分析。
三.将含有沉淀蛋白质和淀粉的固体颗粒储存在-20°C，以便进一步分析淀粉和蛋白质的标记，如先前所述（Bradford，1976；Arrivault 等人，2009；Ishihara 等人，2015；Fernandez 等人。，2017）。
笔记：
1.需要缓慢标记，因为较长的孵育时间会导致封闭微流体系统中的 Ci 耗尽。
2.测量到的培养物中残余 12CO2 在脉冲几分钟内达到 2% 以下（图 2A），并且 H12CO3- 被细胞迅速平衡，如先前报道的低 CO2 适应藻类（Tchernov 等人，2003 年），并在此证明培养物中不存在缓慢的 12CO2 衰变阶段（图 2A 和 3B）。
3.在步骤 2c 中，离心是必要的，因为一些代谢物会随着时间的推移在培养基中积累，从而导致完整悬浮液中的标记模式无法反映细胞中的标记模式。

数据分析

Arrivault 等人详细描述了数据分析、峰注释和质量控制 (QC) 程序。 (2009) 和 Ma 等人。（2014）。简而言之，数据分析包括代谢物峰注释和校正，然后使用 Corrector 软件工具（https://www.mpimp-golm.mpg.de/19405/Corrector_package_V1_91.zip）对原始数据进行稳定同位素丰度校正，分析每种代谢物的校准曲线，并使用定期注射标准混合溶液来校正每次运行的信号衰减；每种代谢物的相对同位素异构体丰度 (m + n) 的计算方法如Szecowka 等人所述。（2013）。

食谱

有关 HP 培养基和相关原液制备的所有配方均可在 Harris (1989) 中找到。

1.HP 培养基，pH 7.2（1 L）
HEPES 1.19 克
营养液 25 mL
磷酸盐缓冲液 1,000 × 1 毫升
赫特纳溶液 1 mL
用 DDW 补足 1 L，使用 NaOH 将 pH 值设置为 7.2，然后高压灭菌。
在室温下储存在玻璃瓶中（溶液对光不敏感）。
注意：高压灭菌后，添加 25 mL 的 CaCl 2 18 mM。

2.营养液（1升）
NH 4 Cl 8.57 克
MgSO 4 ·7H 2 O 4克
用 DDW 和高压灭菌器补足 1 L。
在室温下储存在玻璃瓶中（溶液对光不敏感）。

3.磷酸盐缓冲液 1,000 × (pH = 7)（1 升）
K 2 HPO 4 106 克
KH 2 PO 4 53 克
用 DDW 和高压灭菌器补足 1 L。
在室温下储存在玻璃瓶中（溶液对光不敏感）。

4.哈特纳溶液，pH = 6.5 – 6.8（1 L）
乙二胺四乙酸 50 克
博3 H 3 11.4 克
ZnSO 4 ·7H 2 O 22 克
MnCl 2 ·4H 2 O 5.06克
FeSO 4 ·7H 2 O 4.99 克
CoCl 2 ·6H 2 O 1.61克
CuSO 4 ·5H 2 O 1.57 克
Mn 7 O 24 (NH 4 )·4H 2 O 1.1g
°C的玻璃瓶中，并用铝箔包裹玻璃瓶（溶液对光敏感）。

5.甲基叔丁基醚溶液
甲醇/甲基叔丁基醚(1/3) 。
°C下储存在玻璃瓶中（溶液对光不敏感）。

致谢

我们感谢 MPI-MP 的 Stephanie Arrvault 博士通过迭代 LC-MS/MS 测量为优化藻类收获和提取程序提供支持。我们感谢马克·斯蒂特教授博士关于实验设置和控制设计的建设性讨论。我们感谢 Hirofumi Ishihara 博士支持将标签混合器与现有13 C 标签气体混合器设置集成。这项工作得到了以色列科学基金会 1697/22 号拨款和以色列高等教育委员会 Alon 基金的支持。该协议改编自 Treves 等人。（2022）。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

参考

Abernathy, MH、Yu, J.、Ma, F.、Liberton, M.、Ungerer, J.、Hollinshead, WD、Gopalakrishnan, S.、He, L.、Maranas, CD、Pakrasi, HB 等。（2017）。通过同位素非平稳代谢通量分析破译蓝藻表型以实现快速光合自养生长。生物技术。生物燃料10(1)：e1186/s13068-017-0958-y。
Adebiyi, AO、Jazmin, LJ 和 Young, JD (2015)。蓝藻代谢的13 C通量分析。光合作用。资源。 126（1）：19-32。
艾伦，DK 和杨，JD (2020)。通过同位素标记实验追踪时间和空间的代谢通量。电流。意见。生物技术。 64：92-100。
Arrivault, S.、Guenther, M.、Fry, SC、Fuenfgeld, MMFF、Veyel, D.、Mettler-Altmann, T.、Stitt, M. 和 Lunn, JE (2015)。通过 LC-MS/MS 定量磷酸化代谢物的稳定同位素标记内标的合成和使用。肛门。化学。 87（13）：6896-6904。
Arrivault, S.、Guenther, M.、Ivakov, A.、Feil, R.、Vosloh, D.、van Dongen, JT、Sulpice, R. 和 Stitt, M. (2009)。使用反相液相色谱与串联质谱联用，分析不同二氧化碳浓度下拟南芥莲座丛中的卡尔文循环和其他代谢中间体。植物杂志59(5)：826–839。
Arrivault, S.、Obata, T.、Szecówka, M.、Mengin, V.、Guenther, M.、Hoehne, M.、Fernie, AR 和 Stitt, M. (2017)。玉米C 4光合作用过程中的代谢物库和碳流： 13 CO 2 标记动力学和细胞类型分级。 J.Exp。机器人。 68（2）：283-298。
Blank, LM 和 Sauer, U. (2004)。酿酒酵母中的 TCA 循环活性是环境决定的比生长和葡萄糖摄取率的函数。微生物学150(4)：1085–1093。
布拉德福德，MM (1976)。一种利用蛋白质-染料结合原理定量微克量蛋白质的快速、灵敏的方法。肛门。生物化学。 72：248-254。
Cheah, YE 和 Young, JD (2018)。同位素非平稳代谢通量分析 (INST-MFA)：将理论付诸实践。电流。意见。生物技术。 54：80-87。
Chu, KL、Koley, S.、Jenkins, LM、Bailey, SR、Kambhampati, S.、Foley, K.、Arp, JJ、Morley, SA、Czymmek, KJ、Bates, PD 等。（2022）。成熟烟叶中脂质生产的非暂时性淀粉权衡的代谢通量分析。代谢物。工程师。 69：231-248。
Fernandez, O.、Ishihara, H.、George, GM、Mengin, V.、Flis, A.、Sumner, D.、Arrivault, S.、Feil, R.、Lunn, JE、Zeeman, SC 等。（2017）。叶子淀粉周转发生在漫长的白天和一天结束时光线下降的情况下。植物生理学。 174（4）：2199-2212。
哈里斯，E.（1989）。衣藻来源书。生物学和实验室使用综合指南。学术出版社。
Heise, R.、Arrivault, S.、Szecowka, M.、Tohge, T.、Nunes-Nesi, A.、Stitt, M.、Nikoloski, Z. 和 Fernie, AR (2014)。完整植物光合碳代谢的通量分析。纳特。协议。 9（8）：1803-1824。
Heise, R.、Fernie, AR、Stitt, M. 和 Nikoloski, Z. (2015)。池大小测量有助于确定非平稳代谢通量分析中分支点的通量：以拟南芥为例。正面。植物科学。 6：e00386。
Ishihara, H.、Obata, T.、Sulpice, R.、Fernie, AR 和 Stitt, M. (2015)。通过动态定量拟南芥中的蛋白质合成和降解 13二氧化碳2 游离池和蛋白质中单个氨基酸富集的标记和分析。植物生理学。 168（1）：74-93。
Jazmin, LJ 和 Young, JD (2013)。同位素非稳态13 C 代谢通量分析。方法分子。生物。：367–390。
Jüppner, J.、Mubeen, U.、Leisse, A.、Caldana, C.、Brust, H.、Steup, M.、Herrmann, M.、Steinhauser, D. 和 Giavalisco, P. (2017)。莱茵衣藻细胞周期中脂质和代谢物的动态。植物杂志92(2): 331–343。
Klassen, V.、Blifenez-Klassen, O.、Hoekzema, Y.、Mussgnug, JH 和 Kruse, O. (2015)。一种新颖的单阶段培养/发酵策略，用于利用微藻生物质提高沼气产量。 J.生物技术。 215：44-51。
Ma, F.、Jazmin, LJ、Young, JD 和 Allen, DK (2014)。同位素非平稳 13 C通量变化分析拟南芥由于高光适应而导致叶片代谢。过程。国家。阿卡德。科学。美国111(47)：16967–16972。
Mettler, T.、Mühlhaus, T.、Hemme, D.、Schöttler, MA、Rupprecht, J.、Idoine, A.、Veyel, D.、Pal, SK、Yaneva-Roder, L.、Winck, FV 等等人。（2014）。光合作用模型生物的光合作用、代谢和生长对辐照度增加的响应的系统分析莱茵衣藻。植物细胞26(6)：2310–2350。
Niedenführ, S.、Wiechert, W. 和 Nöh, K. (2015)。如何测量代谢通量：13 C通量组学的分类指南。电流。意见。生物技术。 34：82-90。
Sivashankar, S.、Agambayev, S.、Mashraei, Y.、Li, EQ、Thoroddsen, ST 和 Salama, KN (2016)。适用于各种流速应用的“扭曲”微流体混合器。生物微流体学10(3): 034120。
Szecowka, M.、Heise, R.、Tohge, T.、Nunes-Nesi, A.、Vosloh, D.、Huege, J.、Feil, R.、Lunn, J.、Nikoloski, Z.、Stitt, M .，等人。（2013）。光照下的代谢通量拟南芥玫瑰花结。植物细胞25(2)：694–714。
Tchernov, D.、Silverman, J.、Luz, B.、Reinhold, L. 和 Kaplan, A. (2003)。含氧光合微生物与其周围环境之间无机碳的大量光依赖性循环。光合作用。资源。 77：95-103。
Treves, H.、Küken, A.、Arrivault, S.、Ishihara, H.、Hoppe, I.、Erban, A.、Höhne, M.、Moraes, TA、Kopka, J.、Szymanski, J. 等等人。（2022）。通过光合作用和中心碳代谢的碳通量在藻类、C 3和C 4植物之间显示出不同的模式。纳特。植物8(1)：78–91。
Treves, H.、Murik, O.、Kedem, I.、Eisenstadt, D.、Meir, S.、Rogachev, I.、Szymanski, J.、Keren, N.、Orf, I.、Tiburcio, AF 等等人。（2017）。代谢灵活性支撑着生长最快的藻类的生长能力。电流。生物。 27（16）：2559–2567.e3。
维洛赫，T.（2021）。 13 C 同位素非稳态代谢通量分析开发的下一阶段。 J.Exp。机器人。 72（18）：6087-6090。
吴成、熊文、戴杰、吴Q. (2015)。基于基因组的代谢图谱和13 C 通量分析揭示了产油微藻的系统特性原壳小球藻。植物生理学。 167（2）：586-599。
熊文、刘立、吴成、杨成、吴Q. (2010)。 13 C-示踪剂和气相色谱-质谱分析揭示产油微藻的代谢通量分布原壳小球藻。植物生理学。 154（2）：1001-1011。
Xu, Y.、Fu, X.、Sharkey, TD、Shachar-Hill, Y. 和 Walker, a。北京（2021）。光合作用过程中非光呼吸CO 2释放的代谢起源：代谢通量分析。植物生理学。 186（1）：297-314。
Xu, Y.、Wieloch, T.、Kaste, JAM、Shachar-Hill, Y. 和 Sharkey, TD (2022)。将碳从细胞质和液泡糖库重新输入卡尔文-本森循环解释了光合作用标记异常。过程。国家。阿卡德。科学。美国119(11)：e2121531119。