材料和试剂
1.离心管 (Eppendorf) (1.5 mL) (CAS 0030125150)
2.乙醇 (CAS 64-17-5)、甲醇 (CAS 78-83-1)、乙腈 (CAS 75-05-8) ( http://www.merck-chemicals.com )
3.超纯水（Millipore，Bedford，MA）
4.标准：IAA，GA（ Olchemim Ltd） IAA（CAS 87-51-4）； ME-IAA（CAS 1912-33-0）； GA1 （CAS 545-97-1）； GA3 (CAS 77-06-5)； GA4（CAS 468-44-0）； GA7（CAS 510-75-8）； GA8 (CAS 7044-72-6)
5.醋酸（国药化学试剂，上海，中国）
6.液氮
7.流动相（见食谱）
8.有机相（见配方）
设备
1.剪刀
2.UPLC（超高效液相色谱），Shim-pack UFLC 岛津 CBM20A， http://www.shimadzu.com.cn
3.MS/MS（串联质谱），Applied Biosystems 4500 QTRAP， http://www.appliedbiosystems.com.cn
4.WatersACQUITY UPLC HSS T3 C18，1.8 µm，2.1 mm * 100 mm
软件
1.Analyst 1.6 软件（AB Sciex ）
程序
1.将 15 颗转基因植物的水稻种子种植在一个装有 2 × 2 厘米间距的土壤的容器中。植物加速器设置在 30 °C 和 70% 湿度下，光照 8 小时/黑暗光周期 16 小时。
2.收获新鲜的 15 天大的幼苗，称重，然后立即将它们在液氮中研磨成粉末。由于靠近土壤的组织可能被污染，请用剪刀去除土壤附近约 0.5 厘米的组织。
3.°C 下使用 1 mL 80% (v/v) 甲醇提取12 小时。
4.将提取物旋转 3 次并以 12,000 ×离心 g和 4 °C 15 分钟。
5.°C的氮气流下将其蒸发至干。在 100 mL 的 95% (v/v) 乙腈中重组干上清液。
6.×离心溶液 g和 4 °C 15 分钟，收集上清液进行液相色谱-质谱分析。
7.从样品提取物的混合物中制备质量控制 (QC) 样品，以便在相同的处理方法下分析样品。为了评估分析过程的可重复性，在仪器分析过程中，每十个测试样品插入一个 QC 样品。
8.使用 LC-ESI-MS/MS 系统分析样品提取物，使用以下分析条件： HPLC：色谱柱，Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 (1.8 μm ，2.1 mm*100 mm)；溶剂体系：水（0.1%乙酸）：乙腈（0.1%乙酸）；梯度程序： 0 min 时 100:0 V/V、11.0 min 时 5:95 V/V、12.0 min 时 5:95 V/V、12.1 min 时95:5 V/V 和 95:5 V/V 15.0 分钟；流速：0.40 mL/min；温度：40°C；进样量：5 μL 。流出物交替连接到 ESI-三重四极杆-线性离子阱 (Q TRAP)-MS。
9.在三重四极杆线性离子阱质谱仪 (Q TRAP)、API 4500 Q TRAP LC/MS/MS 系统上采集 LIT 和三重四极杆 (QQQ) 扫描，该系统配备 ESI Turbo 离子喷雾接口，在正离子条件下运行模式，并由 Analyst 1.6 软件 (AB Sciex ) 控制。 ESI源操作参数如下：离子源：涡轮喷雾；源温度：550°C；离子喷雾电压（IS）：5,500 V；离子源气体 I (GSI)、气体 II (GSII) 和帘式气体 (CUR) 分别设置为 55、60 和 25.0 psi；碰撞气体 (CAD) 高。仪器调谐和质量校准分别使用 10 和 100 μmol /L 聚丙二醇溶液在 QQQ 和 LIT 模式下进行。采集 QQQ 扫描作为 MRM 实验，碰撞气体（氮气）设置为 5 psi。单独 MRM 转换的 DP 和 CE 通过进一步的 DP 和 CE 优化完成。根据该时期内洗脱的植物激素，监测每个时期的一组特定 MRM 转换。
数据分析
1.三个生物学重复用于 IAA 和 GA 的量化。
2.基于自建数据库和代谢物信息公共数据库，对质谱检测的第一、第二谱图数据进行定性分析。
食谱
1.流动相
含有 0.1%甲酸的超纯水（ 99.9 mL超纯水和 0.1 mL甲酸）。
2.有机相
含 0.1%甲酸的乙腈（99.9 mL 乙腈和 0.1 mL甲酸）。
致谢
这项工作得到了国家重点研发计划（批准号 2016YFD0100903）、国家转基因研究发展计划（批准号 2016ZX08001004-001-002）和国家自然科学基金（批准号 31870322）的支持）。该协议是根据我们之前出版物 ( doi : https://doi.org/10.1104/pp.20.00302 ) 中的“方法”部分建立的，稍作修改。
利益争夺
作者声明没有财务或非财务竞争利益。
参考
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2.Chen, Y.、Dan, Z. 和 Li, S. (2020b)。水稻生长调节因子 7 通过调节独脚金内酯的合成来控制分蘖数。植物信号行为 15(11)：1804685 。
3.Luo, X.、Zheng, J.、Huang, R.、Huang, Y.、Wang, H.、Jiang, L. 和 Fang, X.（2016 年）。植物激素信号和串扰调节水稻叶角。植物细胞代表35（12）：2423-2433。
4.欧文，SJ 和艾布拉姆斯，SR（2009 年）。液相色谱-质谱法测定植物激素。方法 Mol Biol 495：39-51。
5.Prado, MJ, Largo, A., Dominguez, C., Gonzalez, MV, Rey, M. 和 Centeno, ML (2014)。使用新的液相色谱-ELISA分析方法测定葡萄胚性愈伤组织培养物中脱落酸及其葡糖酯与体细胞胚成熟的关系。 J 植物生理学杂志171（10）：852-859。