材料和试剂

1. 15 -毫升Falcon管š与盖（BD Biosciences公司，目录号：352096）

2.塑料（1.5 毫米）和有机玻璃（4 毫米）面板（Jumbo-Markt AG，瑞士）

3.砂纸（Jumbo-Markt AG，瑞士）

4. Teflon 胶带（Jumbo-Markt AG，瑞士）

5.木块（Jumbo-Markt AG，瑞士）

6.铁板（0.5 毫米）（Jumbo-Markt AG，瑞士）

7.钕d ISC磁铁S 0 2毫米，高度2毫米（巨型-Markt的AG，瑞士）

8.炼乳奶油（9% 乳脂，57% 糖，8% 乳蛋白）（Migros，苏黎世，瑞士）

9.毡尖笔（Sharpie Fine，亚特兰大，乔治亚州，美国）

10.摄像机（Ikegami ICD47E，41460 Neuss，德国）
11.中号onitor（三星，MOD EL：710 WP S）

设备

测试场
测试在一个由塑料板条箱制成的舞台上进行，例如一个 20- L EURO Rako 盒子 ( https://www.utzgroup.ch/stacking-container-rako-400-300-220-mm-161559/ ) . 内部尺寸为 3 7× 27 厘米，21.5 厘米高。盒子是通过插入一个0.4分为两半× 27厘米P lexiglas壁，在WH ICH 5 × 5厘米时隙已被切断。其中一半是在等待区，而另一个是奖励区。区域之间的开口可以通过不透明的聚丙烯滑动闸门关闭（图 1）。

图 1. 竞技场俯视图

在箱体的一个短边上切出两个52 × 2mm的槽，距短壁中线5mm，高出地面35mm。在每个插槽中，插入一个 15 × 5 厘米和1.5 毫米厚的塑料 L 形垫，用作滑动盖来盖住装有奖励的小瓶（图 2）。每个衬垫的长边的最后20毫米的向上折叠，以防止从槽它们的总提取和选择后轻轻推开鼠标公顷小号被制成。

图 2. 带滑动盖的奖励底座，顶视图

在带有滑动盖的插槽之间，有一个承载刺激物的基座（S+：奖励；S-：无奖励）。奖励被放置在两个15米升定位在基座Falcon管盖（见图3）。这个底座由一个小木块制成，10 × 4 厘米和15 毫米厚，由透明的P lexiglas 条分成两半，22 × 5 厘米和5 毫米厚。底座的每一半都衬有不同颜色和质地的图案，并在其中心，衬里下方，有一块薄铁板。衬里一个再在一侧和棕色砂纸在另一由白色聚四氟乙烯带。替代衬里，如粘扣带和PVC从地砖，都可以使用，但其显着性的等价应提前进行检查。
中号aterials相同的衬里被用于外部线路的用作奖励插座15毫升Falcon管中的两个盖子。一个 2 毫米的磁铁粘在每个带衬里的小瓶下，以将其固定在底座上。

图 3. 正面的奖励底座

在训练和测试期间，竞技场被放置在房间的桌子上，间接照明强度为30 - 50 勒克斯。实验者应避免在小鼠处于奖励区时弯腰在竞技场上。通过连接到摄像机的监视器观察小鼠。
摄像机和监视器
我们使用 Ikegami IR ICD47E 模拟摄像机通过 BMC 电缆连接到视频监视器。然而，为了在测试期间监控老鼠，几乎任何连接到个人电脑的摄像头都可以工作。

程序

习惯和程序学习
在开始训练课程之前，动物必须熟悉强化物、实验者和测试舞台。在学习任何奖励应急规则之前，老鼠必须学习如何控制竞技场中发生的事件。
习惯的奖励：在开始测试（天前三天-3）中，p花边200微升（15盖在小瓶炼乳-在每个笼壳体过夜这些小瓶毫升Falcon管，没有任何衬垫）和组的两个待测小鼠。未稀释的炼乳是粘稠的，空瓶见证了品尝的过程。
习惯设置：第二天（第-2天），将小鼠带到测试室并将它们释放在测试舞台的等待区，与它们被安置在同一组中。当介绍到一个新的环境，老鼠感到更安全了他们的笼子的存在-队友，因为陪伴提供了潜在的环境威胁保护（菊水等，2006）。在奖励区的地板上，撒上四个小瓶，用 100 μl炼乳按1:1加水稀释。让老鼠给漫游自由和切换的等待和奖励区，偶尔激活门和滑动盖，将覆盖测试瓶之间。通过摄像头监控老鼠的行为。会话持续至少 5 分钟，但会一直持续到所有的老鼠都尝到了奖励。重新收集小鼠并使用无毒毡尖笔在尾巴上标记它们来单独识别它们。把老鼠带回他们通常的笼子里，晚上，在每个笼子里用 200 μl炼乳重新设置两个小瓶。给老鼠称重，并将每只老鼠晚上的食物减少到 1克。
程序学习：第二天（第-1天），将小鼠单独释放到门关闭的等候区。基座应该已经是在奖赏区域的地方，覆盖有黑色胶带和携带两个中性小瓶（没有衬垫），都与15诱饵微升稀释炼乳。打开牛逼他门，限制了鼠标，以奖励的地带，直到它消耗的牛奶在两小瓶之一。通过摄像头监控鼠标行为，并在鼠标开始舔所选小瓶中的牛奶时用滑动盖关闭另一个小瓶。牛奶喝完后，盖上空瓶子，然后重新打开奖励区和等待区之间的门。如果鼠标没有自发地重新进入等待区，请使用与用作滑动盖的铲子相同的“铲子”轻轻将其推回：小鼠将很容易学会通过返回等待区来响应该物体的呈现. 关闭门，从竞技场中取出底座，并使用吉尔森移液器重新诱饵被访问的小瓶；然后，将基座重新放置在竞技场中并再次打开大门。小鼠必须学会在等待区和奖励区之间切换以寻求和消耗奖励。当鼠标检索到至少 4 个奖励时，至少经过 5 分钟后，使用纸板隧道（避免尾部处理）取出鼠标，刷新尾标，然后将鼠标移回主笼。如果5分钟后，鼠标尚未检索到4个奖励，允许它以停留更长的时间，直到4和报酬已恢复，但中止20分钟后，训练如果鼠标仍然没有消耗的奖励。当所有的老鼠在一个批次进行了培训，转移到动物饲养，每个重达鼠标，并给予食物随意。再次，如果该动物并没有失去的超过10％的其初始体重，限制食物至1g饲料/小鼠过夜。第二程序的训练天（天0）米AY是必要的，如果每组超过2只小鼠没有在20分钟内消耗4个诱饵。

学习的第一条规则，奖励应急的：d着y 1的标准实现的一天

版权所有 © 20 21作者；独家被许可人 Bio-protocol LLC。1
说明： logonew

表1.实施例的日常电子表格

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说明： logonew
在开始训练前一小时将老鼠带到测试室。打开间接灯和相机。对于奖励的应急规则学习，含有诱饵和基座小瓶应该现在被一个白色吊带和其他与棕色砂纸：有图案衬里。平衡的小鼠之间的奖励偶然性，š UCH每受试组动物的相等数目与每个衬垫的奖励相关联。例如，为了比较学习组A B对比组的能力，所述奖励必须用白色或棕色衬垫在相同数目的小鼠在组A相关联的那组B.这是重要的，以补偿可能的偏差对两种模式之一的偏好。准备一份每日电子表格，如表 1所示，每只鼠标一行。实验者会在列中记录自变量和因变量，例如：列1：笼子ID ；第 2 列：处理（编码）；第 3 列：基因型（编码）；第 4 列：鼠标 ID；第五栏：奖励模式；第6 - 22列：正确/不正确的回答；第23 和 24列：开始和结束时间（表 1）。如表 2 中所述，奖励小瓶一侧的顺序每天通过前进一个步骤而改变。

开始训练：牛逼转让（BOT）的第一个鼠标的等候区，饵，与归属于动物图案的小瓶，打开门。鼠标应该很容易进入奖励区并访问小瓶之一。当鼠标位于奖励区时，无需靠在舞台上即可从监视器检查鼠标行为。当鼠标用它的鼻子或爪子接触小瓶时，就做出了选择。如果正确选择制成，允许鼠标到消耗奖励并覆盖其他小瓶与滑动盖。如果选择错误，请迅速用滑动盖盖住两个小瓶。如果鼠标没有跑回等待区，请用与滑动盖相同的塑料铲轻轻将其推回。通常，老鼠会在训练的第一天学会在区域之间切换。
一旦鼠标回到等待区，关上门，移开底座，如有必要，根据预定的边顺序重新诱饵并重新放置在竞技场中；然后，再-开门。一直进行到16个试验已经完成或30分钟已经过去了，以先到者为准。一般，将小鼠取15 - 20分钟，以完成16个试验期间第几个训练天，仅5分钟后4 - 6天。前两天训练后未完成 16 次试验的小鼠表明动力减弱或过度焦虑。如果未检测到故障源，则应将这些小鼠排除在进一步测试之外。
当所有的老鼠在一个批次已经完成了培训课程，把他们带回饲养室，权衡他们，给他们食物。仅当动物减掉的原始训练前体重不超过 10% 时，每只小鼠的隔夜食物限制为 1 克。经过三天的训练，不再需要限制食物，因为老鼠通常会为了快乐而继续工作；但是，如果动物未能在 30 分钟内完成 16 次试验，则可以重新引入。例如，根据我们的经验，限食可以停止对4天而性能随之减少的C57BL / 6J小鼠（霍恩伯格等，2020）。
在接下来的几天中遵循相同的程序，直到达到预定义的学习标准。一个可靠的标准包括在两天内连续获得 8 次正确响应，这通常发生在 5 天的训练之后。

规则逆转学习
达到第一个学习标准后的第二天，小鼠将开始应急逆转训练，即之前奖励的模式现在将与拒绝响应（滑动盖）相关联，而之前未奖励的模式现在被诱饵。
逆转部分的前 2 次试验是发现试验：允许小鼠探索两个小瓶并消耗新奖励的一个。发现试验旨在保持寻求奖励的行为，即使在现在空瓶上做出的第一选择导致拒绝。此外，发现试验为反向偶然性的学习做好了准备。这两次试验在第一次逆转训练期间不计算在内，该训练照常继续进行 16 次试验。和以前一样，学习标准是连续两天正确回答 8 次。
反转学习通常后7达到- 10天; ^ h H但是，直到全部达到标准，它是继续训练的所有动物有用的，以便于响应的一致性随着时间的推移进行比较。如果一些小鼠在 12 天后仍未学会，则可以停止试验。
整个p rocedure，以其时间线，以图形方式概括于图4 。

图4 。实验时间线示意图

数据分析

尽管有食物限制，但在第三个测试日仍未完成 16 次试验的小鼠被排除在进一步测试之外。Dependi纳克在实验的目标，几个变量进行评估。例如，测试的一个可能的主要衡量指标是每日连续正确响应，次要衡量指标包括正确响应的绝对数量和学习指数，计算为第一天和最后一天训练之间正确响应数量的差异。应使用单向重复来进行统计分析-测量ANOVA组内的效果进行比较时，小号，或双向重复测量ANOVA比较所述主测量组或处理之间的效果时，或非参数版本这些测试数据是否不是正态分布的。其他参数可以使用适合被检查的测量的测试来检查，并考虑到违反正态性、重复测量和多组之间的比较。转基因小鼠之间和治疗组之间的统计分析的一个例子可以在Hörnberg等人中找到。（2020 年），扩展数据图 6。

笔记

排除标准
因为在大多数的认知任务，食品增援中号AY有时不足以确保的行动，以奖励该课程的动物的承诺（Dolivo，2020年）; 我N以外的话，可能会发生一些老鼠“不工作”，以获得奖励。本协议通过提供延长习惯和塑造步骤的可能性来最大限度地减少这些事件，直到所有小鼠始终如一地寻求和消费奖励，因为训练步骤可以根据每只动物的个体需求量身定制。在COMPAR ISON与像水迷宫，其中动物的性能在一个预先建立的训练时间进行比较的任务，本协议评估试验的次数（即，以实现给定的性能所需要的时间）。因此，可能发生的所有小鼠在对照组均达到了100％熟练度学习标准，有时，WH ILE动物在实验组仍处于规则获取阶段。然而，由于实际原因，如程序部分所述，如果小鼠在习惯阶段不寻找或消耗诱饵，在训练两天后不愿意离开等待区，或者没有完成，则可以将小鼠排除在进一步的训练之外30分钟内16试验会议上他们的第三个训练日。
动物
该协议是由六个不同的实验者实施，并且被证明是有效的菌株的小鼠的几个批次小号C57BL / 6J和FVB.129P2-PDE6B + Tyrc-CH / AntJ （黑眼睛的FVB / N）。这里所描述的学习和反转学习达到标准所需的会话的范围在参考C57BL / 6J品系。根据我们的经验，FVB/N 小鼠需要更多的训练来学习规则，然后在第一次突发事件中以非常高的速率执行，而在反向学习步骤中执行得更差。对粉红眼睛小鼠的视力有一个小问题，特别是如果携带视网膜变性等位基因。所呈现的任务本质上是体感的；尽管如此，我们观察到，在训练的高级阶段，老鼠似乎会切换到视觉策略，因为它们在与胡须接触之前直接指向奖励坑。
虽然我们只测试了雄性小鼠，但该协议也适用于雌性；但是，这些不应在与男性相同的会话中进行测试，因为如果竞技场包含女性气味的痕迹，男性将无法获得奖励。
关于程序的附加说明
再引诱小瓶在步伐迅速而稳健提高了学习的进展，可能维持在米的OU E公司关注的任务。因此，原则上使用自动喂食器可以改进学习过程；ħ H但是，一个自动进给器，可以改变试验之间的视觉和/或somatesthetic方面的概念和结构是不平凡的。
使用不同的双衬垫的小瓶和基座（的例如，魔术贴和PVC或金属与塑料丝网）将允许的灵活性在帧内评估-维变化。为了促进辨别学习，我们使用了颜色和质地不同的衬垫。然而，最初使用仅颜色不同的线索（例如，白色和黑色的玻璃胶带），原则上将允许引入适合注意力转移的不同质地的线索（例如，白色和黑色魔术贴和砂纸）测试。在COMPAR与ISON基于气味，香味挖掘媒体的传统的环境，我们的范式公顷小号避免训练小鼠耗时的步骤，挖掘和检索了坚实的回报的优势。然而，当我们观察到中训练的小鼠清楚地辨认基于视觉线索，他们的选择，我们不能排除从somatesthetic组分中分离出来的视觉中号AY渲染任务开始比较困难，随着训练天数的延长随之而来。

致谢

使用该协议的原始出版物获得了 EU-AIMS 和 AIMS-2-TRIALS 的资助，这些资金得到了欧盟委员会创新药物计划和创新药物计划 2 联合承诺的支持。777394.这项工作是由一个津贴资助从该NCCR - Synapsy本杰明Boury-Jamot。该检测由 BBJ 和 FM 在洛桑大学医院精神病学系精神病神经科学中心开发，并首次发表在“自闭症小鼠模型中催产素反应和社会行为的拯救” （Hörnberg等人， 2020）。我们感谢P. Scheiffele对他的支持在发布此协议。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

伦理

在洛桑大学在遵守有关动物实验的瑞士国家机构准则进行所有动物的程序，并授权ñ批准由瑞士的洛桑州兽医局委员会的动物实验Ø 。3024 。

参考

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版权所有 © 20 21作者；独家被许可人 Bio-protocol LLC。1

001
药品
一种
2
CEC-58
d方舟

001
车辆
乙
3
CEC-59
白色的

002
药品
乙
1
CEC-60
d方舟

002
车辆
一种
2
CEC-61
白色的

002
药品
一种
3
CEC-62
d方舟

003
车辆
乙
1
CEC-63
白色的

003
药品
乙
2
CEC-64
d方舟

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说明： logonew
在开始训练前一小时将老鼠带到测试室。打开间接灯和相机。对于奖励的应急规则学习，含有诱饵和基座小瓶应该现在被一个白色吊带和其他与棕色砂纸：有图案衬里。平衡的小鼠之间的奖励偶然性，š UCH每受试组动物的相等数目与每个衬垫的奖励相关联。例如，为了比较学习组A B对比组的能力，所述奖励必须用白色或棕色衬垫在相同数目的小鼠在组A相关联的那组B.这是重要的，以补偿可能的偏差对两种模式之一的偏好。准备一份每日电子表格，如表 1所示，每只鼠标一行。实验者会在列中记录自变量和因变量，例如：列1：笼子ID ；第 2 列：处理（编码）；第 3 列：基因型（编码）；第 4 列：鼠标 ID；第五栏：奖励模式；第6 - 22列：正确/不正确的回答；第23 和 24列：开始和结束时间（表 1）。如表 2 中所述，奖励小瓶一侧的顺序每天通过前进一个步骤而改变。

表2序列的实施例用于奖励呈现

Ť雨天

小号S +演示的IDE

1
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…

R1
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……

开始训练：牛逼转让（BOT）的第一个鼠标的等候区，饵，与归属于动物图案的小瓶，打开门。鼠标应该很容易进入奖励区并访问小瓶之一。当鼠标位于奖励区时，无需靠在舞台上即可从监视器检查鼠标行为。当鼠标用它的鼻子或爪子接触小瓶时，就做出了选择。如果正确选择制成，允许鼠标到消耗奖励并覆盖其他小瓶与滑动盖。如果选择错误，请迅速用滑动盖盖住两个小瓶。如果鼠标没有跑回等待区，请用与滑动盖相同的塑料铲轻轻将其推回。通常，老鼠会在训练的第一天学会在区域之间切换。
一旦鼠标回到等待区，关上门，移开底座，如有必要，根据预定的边顺序重新诱饵并重新放置在竞技场中；然后，再-开门。一直进行到16个试验已经完成或30分钟已经过去了，以先到者为准。一般，将小鼠取15 - 20分钟，以完成16个试验期间第几个训练天，仅5分钟后4 - 6天。前两天训练后未完成 16 次试验的小鼠表明动力减弱或过度焦虑。如果未检测到故障源，则应将这些小鼠排除在进一步测试之外。
当所有的老鼠在一个批次已经完成了培训课程，把他们带回饲养室，权衡他们，给他们食物。仅当动物减掉的原始训练前体重不超过 10% 时，每只小鼠的隔夜食物限制为 1 克。经过三天的训练，不再需要限制食物，因为老鼠通常会为了快乐而继续工作；但是，如果动物未能在 30 分钟内完成 16 次试验，则可以重新引入。例如，根据我们的经验，限食可以停止对4天而性能随之减少的C57BL / 6J小鼠（霍恩伯格等，2020）。
在接下来的几天中遵循相同的程序，直到达到预定义的学习标准。一个可靠的标准包括在两天内连续获得 8 次正确响应，这通常发生在 5 天的训练之后。

规则逆转学习
达到第一个学习标准后的第二天，小鼠将开始应急逆转训练，即之前奖励的模式现在将与拒绝响应（滑动盖）相关联，而之前未奖励的模式现在被诱饵。
逆转部分的前 2 次试验是发现试验：允许小鼠探索两个小瓶并消耗新奖励的一个。发现试验旨在保持寻求奖励的行为，即使在现在空的小瓶上做出第一选择而导致拒绝。此外，发现试验为反向偶然性的学习做好了准备。这两次试验在第一次逆转训练期间不计算在内，该训练照常继续进行 16 次试验。和以前一样，学习标准是连续两天正确回答 8 次。
反转学习通常后7达到- 10天; ^ h H但是，直到全部达到标准，它是继续训练的所有动物有用的，以便于响应的一致性随着时间的推移进行比较。如果一些小鼠在 12 天后仍未学会，则可以停止试验。
整个p rocedure，以其时间线，以图形方式概括于图4 。

图4 。实验时间线示意图

数据分析

尽管有食物限制，但在第三个测试日仍未完成 16 次试验的小鼠被排除在进一步测试之外。Dependi纳克在实验的目标，几个变量进行评估。例如，测试的一个可能的主要衡量指标是每天连续正确响应，次要衡量指标包括正确响应的绝对数量和学习指数，计算为第一天和最后一天训练之间正确响应数量的差异。应使用单向重复来进行统计分析-测量ANOVA组内的效果进行比较时，小号，或双向重复测量ANOVA比较所述主测量组或处理之间的效果时，或非参数版本这些测试数据是否不是正态分布的。其他参数可以使用适合被检查的测量的测试来检查，并考虑到违反正态性、重复测量和多组之间的比较。转基因小鼠之间和治疗组之间的统计分析的一个例子可以在Hörnberg等人中找到。（2020 年），扩展数据图 6。

笔记

排除标准
因为在大多数的认知任务，食品增援中号AY有时不足以确保的行动，以奖励该课程的动物的承诺（Dolivo，2020年）; 我N以外的话，可能会发生一些老鼠“不工作”，以获得奖励。本协议通过提供延长习惯和塑造步骤的可能性来最大限度地减少这些事件，直到所有小鼠始终如一地寻求和消费奖励，因为训练步骤可以根据每只动物的个体需求量身定制。在COMPAR ISON与像水迷宫，其中动物的性能在一个预先建立的训练时间进行比较的任务，本协议评估试验的次数（即，以实现给定的性能所需要的时间）。因此，可能发生的所有小鼠在对照组均达到了100％熟练度学习标准，有时，WH ILE动物在实验组仍处于规则获取阶段。然而，由于实际原因，如程序部分所述，如果小鼠在习惯阶段不寻找或消耗诱饵，在训练两天后不愿意离开等待区，或者没有完成，则可以将小鼠排除在进一步的训练之外30分钟内16试验会议上他们的第三个训练日。
动物
该协议是由六个不同的实验者实施，并且被证明是有效的菌株的小鼠的几个批次小号C57BL / 6J和FVB.129P2-PDE6B + Tyrc-CH / AntJ （黑眼睛的FVB / N）。这里所描述的学习和反转学习达到标准所需的会话的范围在参考C57BL / 6J品系。根据我们的经验，FVB/N 小鼠需要更多的训练来学习规则，然后在第一次突发事件中以非常高的速率执行，而在反向学习步骤中执行得更差。对粉红眼睛小鼠的视力有一个小问题，特别是如果携带视网膜变性等位基因。所呈现的任务本质上是体感的；尽管如此，我们观察到，在训练的高级阶段，老鼠似乎会切换到视觉策略，因为它们在与胡须接触之前直接指向奖励坑。
虽然我们只测试了雄性小鼠，但该协议也适用于雌性；但是，这些不应在与男性相同的会话中进行测试，因为如果竞技场包含女性气味的痕迹，男性将无法获得奖励。
关于程序的附加说明
再引诱小瓶在步伐迅速而稳健提高了学习的进展，可能维持在米的OU E公司关注的任务。因此，原则上使用自动喂食器可以改进学习过程；ħ H但是，一个自动进给器，可以改变试验之间的视觉和/或somatesthetic方面的概念和结构是不平凡的。
使用不同的双衬垫的小瓶和基座（的例如，魔术贴和PVC或金属与塑料丝网）将允许的灵活性在帧内评估-维变化。为了促进辨别学习，我们使用了颜色和质地不同的衬垫。然而，最初使用仅颜色不同的线索（例如，白色和黑色的玻璃胶带），原则上将允许引入适合注意力转移的不同质地的线索（例如，白色和黑色魔术贴和砂纸）测试。在COMPAR与ISON基于气味，香味挖掘媒体的传统的环境，我们的范式公顷小号避免训练小鼠耗时的步骤，挖掘和检索了坚实的回报的优势。然而，当我们观察到中训练的小鼠清楚地辨认基于视觉线索，他们的选择，我们不能排除从somatesthetic组分中分离出来的视觉中号AY渲染任务开始比较困难，随着训练天数的延长随之而来。

致谢

使用该协议的原始出版物获得了 EU-AIMS 和 AIMS-2-TRIALS 的资助，这些资金得到了欧盟委员会创新药物计划和创新药物计划 2 联合承诺的支持。777394.这项工作是由一个津贴资助从该NCCR - Synapsy本杰明Boury-Jamot。该检测由 BBJ 和 FM 在洛桑大学医院精神病学系精神病神经科学中心开发，并首次发表在“自闭症小鼠模型中催产素反应和社会行为的拯救” （Hörnberg等人， 2020）。我们感谢P. Scheiffele对他的支持在发布此协议。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

伦理

在洛桑大学在遵守有关动物实验的瑞士国家机构准则进行所有动物的程序，并授权ñ批准由瑞士的洛桑州兽医局委员会的动物实验Ø 。3024 。

参考

Bissonette, GB 和 Powell, EM (2012)。小鼠的逆转学习和注意力转移。神经药理学62（3）：1168-1174。 Chang, Q. 和 Gold, PE (2003)。海马内利多卡因注射会损害位置任务的获得并促进大鼠获得反应任务。行为大脑研究144（1-2）：19-24。 Colacicco, G.、Welzl, H.、Lipp, HP 和 Wurbel, H. (2002)。小鼠的注意力转移：大鼠范式的修改，以及应变依赖性变异的证据。行为大脑研究132(1): 95-102。 Crusio，我们（2001 年）。小鼠探索行为的遗传解剖。行为大脑研究125（1-2）：127-132。执事，RM 和罗林斯，JN（2006 年）。啮齿动物中的 T 迷宫交替。国家协议1(1): 7-12。 Devan, BD 和 White, NM (1999)。背侧纹状体的并行信息处理：与海马功能的关系。J Neurosci 19（7）：2789-2798。 Dolivo, V. (2020)。米老鼠面对错误的负面影响。学习行为48(1): 5-6。
Goltstein, PM、Reinert, S.、Glas, A.、Bonhoeffer, T. 和 Hubener, M.（2018 年）。食物和水的限制导致小鼠头部固定的两项选择视觉辨别任务中的差异学习行为。PLoS 一13(9): e0204066。 Hebert, M.、Bulla, J.、Vivien, D. 和 Agin, V.（2017 年）。在小鼠空间学习过程中，远端和近端视觉线索是否同样重要？空间域中遮蔽的试点研究。前行为神经科学11：109。 Hörnberg , H., Perez-Garci, E., Schreiner, D., Hatstatt-Burkle, L., Magara, F., Baudouin, S., Matter, A., Nacro, K., Pecho-Vrieseling, E.和 Scheiffele, P. (2020)。在自闭症小鼠模型中拯救催产素反应和社会行为。自然584(7820)：252-256。
Izquierdo, A., Brigman, JL, Radke, AK, Rudebeck, PH 和 Holmes, A. (2017)。逆向学习的神经基础：更新的观点。神经科学345：12-26。
Jager, A., Dam, SA, Van Der Mierden, S., Oomen, CA, Arias-Vasquez, A., Buitelaar, JK, Kozicz, T. 和 Glennon, JC (2020)。通过奖励和惩罚在 BALB/cJ 和 BALB/cByJ 小鼠中调节认知灵活性。行为大脑研究378：112294。
Kikusui, T.、Winslow, JT 和 Mori, Y. (2006)。社交缓冲：缓解压力和焦虑。Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361(1476)：2215-2228。
Krackow, S., Vannoni, E., Codita, A., Mohammed, AH, Cirulli, F., Branchi, I., Alleva, E., Reichelt, A., Willuweit, A., Voikar, V., Colacicco , G., Wolfer, DP, Buschmann, JU, Safi, K. 和 Lipp, HP (2010)。IntelliCage 中近交小鼠品系之间一致的行为表型差异。基因大脑行为9（7）：722-731。
Lalonde, R. (2002)。自发交替的神经生物学基础。Neurosci Biobehav Rev 26(1): 91-104。 Luo, J.、Tan, JM 和 Nithianantharajah, J.（2020 年）。突触蛋白neuroligin-1对联想学习和动机的可分离调节的分子洞察。BMC 生物学18（1）：118。 Mechan, AO、Wyss, A.、Rieger, H. 和 Mohajeri, MH (2009)。IntelliCage 中青年和中年野生型小鼠学习记忆特征的比较。J Neurosci 方法180（1）：43-51。
Packard, MG 和 McGaugh, JL (1992)。在获得两个水迷宫任务时穹窿和尾状核病变的双重分离：多重记忆系统的进一步证据。行为神经科学106（3）：439-446。 Packard, MG 和 McGaugh, JL (1996)。用利多卡因灭活海马或尾状核对位置和反应学习的表达有不同的影响。Neurobiol 学习记忆65(1): 65-72。 Sánchez-Moreno, J.、Rodrigo, T.、Chamizo, VD和Mackintosh, NJ (1999)。空间域中的遮蔽。动物学习与行为，27 （4），391-398。
Sanderson, DJ 和 Bannerman, DM (2012)。习惯在依赖海马体的空间工作记忆任务中的作用：来自 GluA1 AMPA 受体亚基敲除小鼠的证据。海马22(5): 981-994。 Sanderson, DJ, Rawlins, JN, Deacon, RM, Cunningham, C., Barkus, C. 和 Bannerman, DM (2012)。尽管对偶然信息的干扰具有正常敏感性，但海马病变可以增强辨别学习。海马22（7）：1553-1566。
Tait、DS、Bowman、EM、Neuwirth、LS 和 Brown，VJ（2018 年）。大鼠维度内/维度外注意力转移的评估。Neurosci Biobehav Rev 89：72-84。 Walker, EL, Dember, WN, Earl, RW 和 Karoly, AJ (1955)。选择交替。I. 刺激 vs. 地点 vs. 响应。J Comp Physiol Psychol 48（1）：19-23。

11.中号onitor（三星，MOD EL：710 WP S）

设备

测试场
测试在一个由塑料板条箱制成的舞台上进行，例如一个 20- L EURO Rako 盒子 ( https://www.utzgroup.ch/stacking-container-rako-400-300-220-mm-161559/ ) . 内部尺寸为 3 7× 27 厘米，21.5 厘米高。盒子是通过插入一个0.4分为两半× 27厘米P lexiglas壁，在WH ICH 5 × 5厘米时隙已被切断。其中一半是在等待区，而另一个是奖励区。区域之间的开口可以通过不透明的聚丙烯滑动闸门关闭（图 1）。

图 1. 竞技场俯视图

在箱体的一个短边上切出两个52 × 2mm的槽，距短壁中线5mm，高出地面35mm。在每个插槽中，插入一个 15 × 5 厘米和1.5 毫米厚的塑料 L 形垫，用作滑动盖来盖住装有奖励的小瓶（图 2）。每个衬垫的长边的最后20毫米的向上折叠，以防止从槽它们的总提取和选择后轻轻推开鼠标公顷小号被制成。

图 2. 带滑动盖的奖励底座，顶视图

在带有滑动盖的插槽之间，有一个承载刺激物的基座（S+：奖励；S-：无奖励）。奖励被放置在两个15米升定位在基座Falcon管盖（见图3）。这个底座由一个小木块制成，10 × 4 厘米和15 毫米厚，由透明的P lexiglas 条分成两半，22 × 5 厘米和5 毫米厚。底座的每一半都衬有不同颜色和质地的图案，并在其中心，衬里下方，有一块薄铁板。衬里一个再在一侧和棕色砂纸在另一由白色聚四氟乙烯带。替代衬里，如粘扣带和PVC从地砖，都可以使用，但其显着性的等价应提前进行检查。
中号aterials相同的衬里被用于外部线路的用作奖励插座15毫升Falcon管中的两个盖子。一个 2 毫米的磁铁粘在每个带衬里的小瓶下，以将其固定在底座上。

图 3. 正面的奖励底座

在训练和测试期间，竞技场被放置在房间的桌子上，间接照明强度为30 - 50 勒克斯。实验者应避免在小鼠处于奖励区时弯腰在竞技场上。通过连接到摄像机的监视器观察小鼠。
摄像机和监视器
我们使用 Ikegami IR ICD47E 模拟摄像机通过 BMC 电缆连接到视频监视器。然而，为了在测试期间监控老鼠，几乎任何连接到个人电脑的摄像头都可以工作。

程序

习惯和程序学习
在开始训练课程之前，动物必须熟悉强化物、实验者和测试舞台。在学习任何奖励应急规则之前，老鼠必须学习如何控制竞技场中发生的事件。
习惯的奖励：在开始测试（天前三天-3）中，p花边200微升（15盖在小瓶炼乳-在每个笼壳体过夜这些小瓶毫升Falcon管，没有任何衬垫）和组的两个待测小鼠。未稀释的炼乳是粘稠的，空瓶见证了品尝的过程。
习惯设置：第二天（第-2天），将小鼠带到测试室并将它们释放在测试舞台的等待区，与它们被安置在同一组中。当介绍到一个新的环境，老鼠感到更安全了他们的笼子的存在-队友，因为陪伴提供了潜在的环境威胁保护（菊水等，2006）。在奖励区的地板上，撒上四个小瓶，用 100 μl炼乳按1:1加水稀释。让老鼠给漫游自由和切换的等待和奖励区，偶尔激活门和滑动盖，将覆盖测试瓶之间。通过摄像头监控老鼠的行为。会话持续至少 5 分钟，但会一直持续到所有的老鼠都尝到了奖励。重新收集小鼠并使用无毒毡尖笔在尾巴上标记它们来单独识别它们。把老鼠带回他们通常的笼子里，晚上，在每个笼子里用 200 μl炼乳重新设置两个小瓶。给老鼠称重，并将每只老鼠晚上的食物减少到 1克。
程序学习：第二天（第-1天），将小鼠单独释放到门关闭的等候区。基座应该已经是在奖赏区域的地方，覆盖有黑色胶带和携带两个中性小瓶（没有衬垫），都与15诱饵微升稀释炼乳。打开牛逼他门，限制了鼠标，以奖励的地带，直到它消耗的牛奶在两小瓶之一。通过摄像头监控鼠标行为，并在鼠标开始舔所选小瓶中的牛奶时用滑动盖关闭另一个小瓶。牛奶喝完后，盖上空瓶子，然后重新打开奖励区和等待区之间的门。如果鼠标没有自发地重新进入等待区，请使用与用作滑动盖的铲子相同的“铲子”轻轻将其推回：小鼠将很容易学会通过返回等待区来响应该物体的呈现. 关闭门，从竞技场中取出底座，并使用吉尔森移液器重新诱饵被访问的小瓶；然后，将基座重新放置在竞技场中并再次打开大门。小鼠必须学会在等待区和奖励区之间切换以寻求和消耗奖励。当鼠标检索到至少 4 个奖励时，至少经过 5 分钟后，使用纸板隧道（避免尾部处理）取出鼠标，刷新尾标，然后将鼠标移回主笼。如果5分钟后，鼠标尚未检索到4个奖励，允许它以停留更长的时间，直到4和报酬已恢复，但中止20分钟后，训练如果鼠标仍然没有消耗的奖励。当所有的老鼠在一个批次进行了培训，转移到动物饲养，每个重达鼠标，并给予食物随意。再次，如果该动物并没有失去的超过10％的其初始体重，限制食物至1g饲料/小鼠过夜。第二程序的训练天（天0）米AY是必要的，如果每组超过2只小鼠没有在20分钟内消耗4个诱饵。

学习的第一条规则，奖励应急的：d着y 1的标准实现的一天

版权所有 © 20 21作者；独家被许可人 Bio-protocol LLC。1
说明： logonew

表1.实施例的日常电子表格

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说明： logonew
在开始训练前一小时将老鼠带到测试室。打开间接灯和相机。对于奖励的应急规则学习，含有诱饵和基座小瓶应该现在被一个白色吊带和其他与棕色砂纸：有图案衬里。平衡的小鼠之间的奖励偶然性，š UCH每受试组动物的相等数目与每个衬垫的奖励相关联。例如，为了比较学习组A B对比组的能力，所述奖励必须用白色或棕色衬垫在相同数目的小鼠在组A相关联的那组B.这是重要的，以补偿可能的偏差对两种模式之一的偏好。准备一份每日电子表格，如表 1所示，每只鼠标一行。实验者会在列中记录自变量和因变量，例如：列1：笼子ID ；第 2 列：处理（编码）；第 3 列：基因型（编码）；第 4 列：鼠标 ID；第五栏：奖励模式；第6 - 22列：正确/不正确的回答；第23 和 24列：开始和结束时间（表 1）。如表 2 中所述，奖励小瓶一侧的顺序每天通过前进一个步骤而改变。

开始训练：牛逼转让（BOT）的第一个鼠标的等候区，饵，与归属于动物图案的小瓶，打开门。鼠标应该很容易进入奖励区并访问小瓶之一。当鼠标位于奖励区时，无需靠在舞台上即可从监视器检查鼠标行为。当鼠标用它的鼻子或爪子接触小瓶时，就做出了选择。如果正确选择制成，允许鼠标到消耗奖励并覆盖其他小瓶与滑动盖。如果选择错误，请迅速用滑动盖盖住两个小瓶。如果鼠标没有跑回等待区，请用与滑动盖相同的塑料铲轻轻将其推回。通常，老鼠会在训练的第一天学会在区域之间切换。
一旦鼠标回到等待区，关上门，移开底座，如有必要，根据预定的边顺序重新诱饵并重新放置在竞技场中；然后，再-开门。一直进行到16个试验已经完成或30分钟已经过去了，以先到者为准。一般，将小鼠取15 - 20分钟，以完成16个试验期间第几个训练天，仅5分钟后4 - 6天。前两天训练后未完成 16 次试验的小鼠表明动力减弱或过度焦虑。如果未检测到故障源，则应将这些小鼠排除在进一步测试之外。
当所有的老鼠在一个批次已经完成了培训课程，把他们带回饲养室，权衡他们，给他们食物。仅当动物减掉的原始训练前体重不超过 10% 时，每只小鼠的隔夜食物限制为 1 克。经过三天的训练，不再需要限制食物，因为老鼠通常会为了快乐而继续工作；但是，如果动物未能在 30 分钟内完成 16 次试验，则可以重新引入。例如，根据我们的经验，限食可以停止对4天而性能随之减少的C57BL / 6J小鼠（霍恩伯格等，2020）。
在接下来的几天中遵循相同的程序，直到达到预定义的学习标准。一个可靠的标准包括在两天内连续获得 8 次正确响应，这通常发生在 5 天的训练之后。

规则逆转学习
达到第一个学习标准后的第二天，小鼠将开始应急逆转训练，即之前奖励的模式现在将与拒绝响应（滑动盖）相关联，而之前未奖励的模式现在被诱饵。
逆转部分的前 2 次试验是发现试验：允许小鼠探索两个小瓶并消耗新奖励的一个。发现试验旨在保持寻求奖励的行为，即使在现在空瓶上做出的第一选择导致拒绝。此外，发现试验为反向偶然性的学习做好了准备。这两次试验在第一次逆转训练期间不计算在内，该训练照常继续进行 16 次试验。和以前一样，学习标准是连续两天正确回答 8 次。
反转学习通常后7达到- 10天; ^ h H但是，直到全部达到标准，它是继续训练的所有动物有用的，以便于响应的一致性随着时间的推移进行比较。如果一些小鼠在 12 天后仍未学会，则可以停止试验。
整个p rocedure，以其时间线，以图形方式概括于图4 。

图4 。实验时间线示意图

数据分析

尽管有食物限制，但在第三个测试日仍未完成 16 次试验的小鼠被排除在进一步测试之外。Dependi纳克在实验的目标，几个变量进行评估。例如，测试的一个可能的主要衡量指标是每日连续正确响应，次要衡量指标包括正确响应的绝对数量和学习指数，计算为第一天和最后一天训练之间正确响应数量的差异。应使用单向重复来进行统计分析-测量ANOVA组内的效果进行比较时，小号，或双向重复测量ANOVA比较所述主测量组或处理之间的效果时，或非参数版本这些测试数据是否不是正态分布的。其他参数可以使用适合被检查的测量的测试来检查，并考虑到违反正态性、重复测量和多组之间的比较。转基因小鼠之间和治疗组之间的统计分析的一个例子可以在Hörnberg等人中找到。（2020 年），扩展数据图 6。

笔记

排除标准
因为在大多数的认知任务，食品增援中号AY有时不足以确保的行动，以奖励该课程的动物的承诺（Dolivo，2020年）; 我N以外的话，可能会发生一些老鼠“不工作”，以获得奖励。本协议通过提供延长习惯和塑造步骤的可能性来最大限度地减少这些事件，直到所有小鼠始终如一地寻求和消费奖励，因为训练步骤可以根据每只动物的个体需求量身定制。在COMPAR ISON与像水迷宫，其中动物的性能在一个预先建立的训练时间进行比较的任务，本协议评估试验的次数（即，以实现给定的性能所需要的时间）。因此，可能发生的所有小鼠在对照组均达到了100％熟练度学习标准，有时，WH ILE动物在实验组仍处于规则获取阶段。然而，由于实际原因，如程序部分所述，如果小鼠在习惯阶段不寻找或消耗诱饵，在训练两天后不愿意离开等待区，或者没有完成，则可以将小鼠排除在进一步的训练之外30分钟内16试验会议上他们的第三个训练日。
动物
该协议是由六个不同的实验者实施，并且被证明是有效的菌株的小鼠的几个批次小号C57BL / 6J和FVB.129P2-PDE6B + Tyrc-CH / AntJ （黑眼睛的FVB / N）。这里所描述的学习和反转学习达到标准所需的会话的范围在参考C57BL / 6J品系。根据我们的经验，FVB/N 小鼠需要更多的训练来学习规则，然后在第一次突发事件中以非常高的速率执行，而在反向学习步骤中执行得更差。对粉红眼睛小鼠的视力有一个小问题，特别是如果携带视网膜变性等位基因。所呈现的任务本质上是体感的；尽管如此，我们观察到，在训练的高级阶段，老鼠似乎会切换到视觉策略，因为它们在与胡须接触之前直接指向奖励坑。
虽然我们只测试了雄性小鼠，但该协议也适用于雌性；但是，这些不应在与男性相同的会话中进行测试，因为如果竞技场包含女性气味的痕迹，男性将无法获得奖励。
关于程序的附加说明
再引诱小瓶在步伐迅速而稳健提高了学习的进展，可能维持在米的OU E公司关注的任务。因此，原则上使用自动喂食器可以改进学习过程；ħ H但是，一个自动进给器，可以改变试验之间的视觉和/或somatesthetic方面的概念和结构是不平凡的。
使用不同的双衬垫的小瓶和基座（的例如，魔术贴和PVC或金属与塑料丝网）将允许的灵活性在帧内评估-维变化。为了促进辨别学习，我们使用了颜色和质地不同的衬垫。然而，最初使用仅颜色不同的线索（例如，白色和黑色的玻璃胶带），原则上将允许引入适合注意力转移的不同质地的线索（例如，白色和黑色魔术贴和砂纸）测试。在COMPAR与ISON基于气味，香味挖掘媒体的传统的环境，我们的范式公顷小号避免训练小鼠耗时的步骤，挖掘和检索了坚实的回报的优势。然而，当我们观察到中训练的小鼠清楚地辨认基于视觉线索，他们的选择，我们不能排除从somatesthetic组分中分离出来的视觉中号AY渲染任务开始比较困难，随着训练天数的延长随之而来。

致谢

使用该协议的原始出版物获得了 EU-AIMS 和 AIMS-2-TRIALS 的资助，这些资金得到了欧盟委员会创新药物计划和创新药物计划 2 联合承诺的支持。777394.这项工作是由一个津贴资助从该NCCR - Synapsy本杰明Boury-Jamot。该检测由 BBJ 和 FM 在洛桑大学医院精神病学系精神病神经科学中心开发，并首次发表在“自闭症小鼠模型中催产素反应和社会行为的拯救” （Hörnberg等人， 2020）。我们感谢P. Scheiffele对他的支持在发布此协议。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

伦理

在洛桑大学在遵守有关动物实验的瑞士国家机构准则进行所有动物的程序，并授权ñ批准由瑞士的洛桑州兽医局委员会的动物实验Ø 。3024 。

参考

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Goltstein, PM、Reinert, S.、Glas, A.、Bonhoeffer, T. 和 Hubener, M.（2018 年）。食物和水的限制导致小鼠头部固定的两项选择视觉辨别任务中的差异学习行为。PLoS 一13(9): e0204066。 Hebert, M.、Bulla, J.、Vivien, D. 和 Agin, V.（2017 年）。在小鼠空间学习过程中，远端和近端视觉线索是否同样重要？空间域中遮蔽的试点研究。前行为神经科学11：109。 Hörnberg , H., Perez-Garci, E., Schreiner, D., Hatstatt-Burkle, L., Magara, F., Baudouin, S., Matter, A., Nacro, K., Pecho-Vrieseling, E.和 Scheiffele, P. (2020)。在自闭症小鼠模型中拯救催产素反应和社会行为。自然584(7820)：252-256。
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Packard, MG 和 McGaugh, JL (1992)。在获得两个水迷宫任务时穹窿和尾状核病变的双重分离：多重记忆系统的进一步证据。行为神经科学106（3）：439-446。 Packard, MG 和 McGaugh, JL (1996)。用利多卡因灭活海马或尾状核对位置和反应学习的表达有不同的影响。Neurobiol 学习记忆65(1): 65-72。 Sánchez-Moreno, J.、Rodrigo, T.、Chamizo, VD和Mackintosh, NJ (1999)。空间域中的遮蔽。动物学习行为27 (4) ：391 - 398。
Sanderson, DJ 和 Bannerman, DM (2012)。习惯在依赖海马体的空间工作记忆任务中的作用：来自 GluA1 AMPA 受体亚基敲除小鼠的证据。海马22(5): 981-994。 Sanderson, DJ, Rawlins, JN, Deacon, RM, Cunningham, C., Barkus, C. 和 Bannerman, DM (2012)。尽管对偶然信息的干扰具有正常敏感性，但海马病变可以增强辨别学习。海马22（7）：1553-1566。
Tait、DS、Bowman、EM、Neuwirth、LS 和 Brown，VJ（2018 年）。大鼠维度内/维度外注意力转移的评估。Neurosci Biobehav Rev 89：72-84。 Walker, EL, Dember, WN, Earl, RW 和 Karoly, AJ (1955)。选择交替。I. 刺激 vs. 地点 vs. 响应。J Comp Physiol Psychol 48（1）：19-23。
版权所有 © 20 21作者；独家被许可人 Bio-protocol LLC。1

001
药品
一种
2
CEC-58
d方舟

001
车辆
乙
3
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白色的

002
药品
乙
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车辆
一种
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一种
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d方舟

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车辆
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白色的

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药品
乙
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d方舟

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说明： logonew
在开始训练前一小时将老鼠带到测试室。打开间接灯和相机。对于奖励的应急规则学习，含有诱饵和基座小瓶应该现在被一个白色吊带和其他与棕色砂纸：有图案衬里。平衡的小鼠之间的奖励偶然性，š UCH每受试组动物的相等数目与每个衬垫的奖励相关联。例如，为了比较学习组A B对比组的能力，所述奖励必须用白色或棕色衬垫在相同数目的小鼠在组A相关联的那组B.这是重要的，以补偿可能的偏差对两种模式之一的偏好。准备一份每日电子表格，如表 1所示，每只鼠标一行。实验者会在列中记录自变量和因变量，例如：列1：笼子ID ；第 2 列：处理（编码）；第 3 列：基因型（编码）；第 4 列：鼠标 ID；第五栏：奖励模式；第6 - 22列：正确/不正确的回答；第23 和 24列：开始和结束时间（表 1）。如表 2 中所述，奖励小瓶一侧的顺序每天通过前进一个步骤而改变。

表2序列的实施例用于奖励呈现

Ť雨天

小号S +演示的IDE

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开始训练：牛逼转让（BOT）的第一个鼠标的等候区，饵，与归属于动物图案的小瓶，打开门。鼠标应该很容易进入奖励区并访问小瓶之一。当鼠标位于奖励区时，无需靠在舞台上即可从监视器检查鼠标行为。当鼠标用它的鼻子或爪子接触小瓶时，就做出了选择。如果正确选择制成，允许鼠标到消耗奖励并覆盖其他小瓶与滑动盖。如果选择错误，请迅速用滑动盖盖住两个小瓶。如果鼠标没有跑回等待区，请用与滑动盖相同的塑料铲轻轻将其推回。通常，老鼠会在训练的第一天学会在区域之间切换。
一旦鼠标回到等待区，关上门，移开底座，如有必要，根据预定的边顺序重新诱饵并重新放置在竞技场中；然后，再-开门。一直进行到16个试验已经完成或30分钟已经过去了，以先到者为准。一般，将小鼠取15 - 20分钟，以完成16个试验期间第几个训练天，仅5分钟后4 - 6天。前两天训练后未完成 16 次试验的小鼠表明动力减弱或过度焦虑。如果未检测到故障源，则应将这些小鼠排除在进一步测试之外。
当所有的老鼠在一个批次已经完成了培训课程，把他们带回饲养室，权衡他们，给他们食物。仅当动物减掉的原始训练前体重不超过 10% 时，每只小鼠的隔夜食物限制为 1 克。经过三天的训练，不再需要限制食物，因为老鼠通常会为了快乐而继续工作；但是，如果动物未能在 30 分钟内完成 16 次试验，则可以重新引入。例如，根据我们的经验，限食可以停止对4天而性能随之减少的C57BL / 6J小鼠（霍恩伯格等，2020）。
在接下来的几天中遵循相同的程序，直到达到预定义的学习标准。一个可靠的标准包括在两天内连续获得 8 次正确响应，这通常发生在 5 天的训练之后。

规则逆转学习
达到第一个学习标准后的第二天，小鼠将开始应急逆转训练，即之前奖励的模式现在将与拒绝响应（滑动盖）相关联，而之前未奖励的模式现在被诱饵。
逆转部分的前 2 次试验是发现试验：允许小鼠探索两个小瓶并消耗新奖励的一个。发现试验旨在保持寻求奖励的行为，即使在现在空的小瓶上做出第一选择而导致拒绝。此外，发现试验为反向偶然性的学习做好了准备。这两次试验在第一次逆转训练期间不计算在内，该训练照常继续进行 16 次试验。和以前一样，学习标准是连续两天正确回答 8 次。
反转学习通常后7达到- 10天; ^ h H但是，直到全部达到标准，它是继续训练的所有动物有用的，以便于响应的一致性随着时间的推移进行比较。如果一些小鼠在 12 天后仍未学会，则可以停止试验。
整个p rocedure，以其时间线，以图形方式概括于图4 。

图4 。实验时间线示意图

数据分析

尽管有食物限制，但在第三个测试日仍未完成 16 次试验的小鼠被排除在进一步测试之外。Dependi纳克在实验的目标，几个变量进行评估。例如，测试的一个可能的主要衡量指标是每天连续正确响应，次要衡量指标包括正确响应的绝对数量和学习指数，计算为第一天和最后一天训练之间正确响应数量的差异。应使用单向重复来进行统计分析-测量ANOVA组内的效果进行比较时，小号，或双向重复测量ANOVA比较所述主测量组或处理之间的效果时，或非参数版本这些测试数据是否不是正态分布的。其他参数可以使用适合被检查的测量的测试来检查，并考虑到违反正态性、重复测量和多组之间的比较。转基因小鼠之间和治疗组之间的统计分析的一个例子可以在Hörnberg等人中找到。（2020 年），扩展数据图 6。

笔记

排除标准
因为在大多数的认知任务，食品增援中号AY有时不足以确保的行动，以奖励该课程的动物的承诺（Dolivo，2020年）; 我N以外的话，可能会发生一些老鼠“不工作”，以获得奖励。本协议通过提供延长习惯和塑造步骤的可能性来最大限度地减少这些事件，直到所有小鼠始终如一地寻求和消费奖励，因为训练步骤可以根据每只动物的个体需求量身定制。在COMPAR ISON与像水迷宫，其中动物的性能在一个预先建立的训练时间进行比较的任务，本协议评估试验的次数（即，以实现给定的性能所需要的时间）。因此，可能发生的所有小鼠在对照组均达到了100％熟练度学习标准，有时，WH ILE动物在实验组仍处于规则获取阶段。然而，由于实际原因，如程序部分所述，如果小鼠在习惯阶段不寻找或消耗诱饵，在训练两天后不愿意离开等待区，或者没有完成，则可以将小鼠排除在进一步的训练之外30分钟内16试验会议上他们的第三个训练日。
动物
该协议是由六个不同的实验者实施，并且被证明是有效的菌株的小鼠的几个批次小号C57BL / 6J和FVB.129P2-PDE6B + Tyrc-CH / AntJ （黑眼睛的FVB / N）。这里所描述的学习和反转学习达到标准所需的会话的范围在参考C57BL / 6J品系。根据我们的经验，FVB/N 小鼠需要更多的训练来学习规则，然后在第一次突发事件中以非常高的速率执行，而在反向学习步骤中执行得更差。对粉红眼睛小鼠的视力有一个小问题，特别是如果携带视网膜变性等位基因。所呈现的任务本质上是体感的；尽管如此，我们观察到，在训练的高级阶段，老鼠似乎会切换到视觉策略，因为它们在与胡须接触之前直接指向奖励坑。
虽然我们只测试了雄性小鼠，但该协议也适用于雌性；但是，这些不应在与男性相同的会话中进行测试，因为如果竞技场包含女性气味的痕迹，男性将无法获得奖励。
关于程序的附加说明
再引诱小瓶在步伐迅速而稳健提高了学习的进展，可能维持在米的OU E公司关注的任务。因此，原则上使用自动喂食器可以改进学习过程；ħ H但是，一个自动进给器，可以改变试验之间的视觉和/或somatesthetic方面的概念和结构是不平凡的。
使用不同的双衬垫的小瓶和基座（的例如，魔术贴和PVC或金属与塑料丝网）将允许的灵活性在帧内评估-维变化。为了促进辨别学习，我们使用了颜色和质地不同的衬垫。然而，最初使用仅颜色不同的线索（例如，白色和黑色的玻璃胶带），原则上将允许引入适合注意力转移的不同质地的线索（例如，白色和黑色魔术贴和砂纸）测试。在COMPAR与ISON基于气味，香味挖掘媒体的传统的环境，我们的范式公顷小号避免训练小鼠耗时的步骤，挖掘和检索了坚实的回报的优势。然而，当我们观察到中训练的小鼠清楚地辨认基于视觉线索，他们的选择，我们不能排除从somatesthetic组分中分离出来的视觉中号AY渲染任务开始比较困难，随着训练天数的延长随之而来。

致谢

使用该协议的原始出版物获得了 EU-AIMS 和 AIMS-2-TRIALS 的资助，这些资金得到了欧盟委员会创新药物计划和创新药物计划 2 联合承诺的支持。777394.这项工作是由一个津贴资助从该NCCR - Synapsy本杰明Boury-Jamot。该检测由 BBJ 和 FM 在洛桑大学医院精神病学系精神病神经科学中心开发，并首次发表在“自闭症小鼠模型中催产素反应和社会行为的拯救” （Hörnberg等人， 2020）。我们感谢P. Scheiffele对他的支持在发布此协议。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

伦理

在洛桑大学在遵守有关动物实验的瑞士国家机构准则进行所有动物的程序，并授权ñ批准由瑞士的洛桑州兽医局委员会的动物实验Ø 。3024 。

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