材料和试剂
移液器吸头（Thermo Fisher Scientific，不同尺寸和类型）
离心管中，5 -毫升园-底部ED （生工生物，目录号：F610888）
低温微管小号，1.5 -毫升深帽，圆锥形-底部ED ，无菌（生工生物，目录号：F600154）
凝胶印迹婷纸（生工生物，目录号：F513323）
酵母提取物（OXCID，目录号：LP0021）
蛋白胨（BD，目录号：211677）
D-克lucose（生工生物，目录号：A501991）
的酵母氮基质无氨基酸和硫酸铵（生工生物，BBI，目录号：A600505）
氯仿（常规- - [R eagent，目录号：G75915B）
甲醇（常规- - [R eagent，目录号：G75851B）
考马斯乙rilliant乙略R-250（生工生物，目录号：CB0037）
己烷（常规- - [R eagent，目录号：G14153D）
乙醚（HUSHI，目录号：10009318）
乙酸（常规- - [R eagent，目录号：G73562B）
大号IPID标准：18：1 DG（1,2-二油酰基-sn-甘油）2毫克/毫升Ç hloroform（阿凡提，目录号：800811C）
大号IPID标准：蛋PC（L-α- p hosphatidylcholine）10毫克/毫升Ç hloroform（阿凡提，目录号：840051C）
TLC硅胶60（25个铝片20 × 20cm ; Merk Millipore，目录号：105553）
玻璃薄层色谱 (TLC) 显影室（100 × 100，通用）
玻璃b EADS（40或50目，通用）

设备

移液器（Thermo Fisher Scientific，不同类型）
SHAK荷兰国际集团培养箱（CRYSTAL，米Odel等：IS-RDH1）
分光光度计（上海景华，米奥德尔：722S）
离心机（热，米Odel等：SORVALL ST16R）
冷冻-干燥机/冻干机（LABCONCO ，米Odel等：自由区6加）
一个nalytical规模（上海恒平，米奥德尔：FA2104）
干燥炉（博讯，米Odel等：GZX-9146MBE）
珠磨机（上海荆-X中，米Odel等：组织lyser-96）
Thermomixer中（ALLSHENG，米Odel等：MSC-100）
带盖TLC显影室（通用）
凝胶成像系统（Bio-Rad公司，米Odel等：Gel Doc凝胶721BR05189）

软件

ImageJ ( https://imagej.net/Downloads )

程序

细胞生长和收获
生长酵母在10 ST细胞0毫升YPD培养基（1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖）中过夜以3 0 ℃下SHAK荷兰国际集团培养箱（250rpm下）直到光密度（OD 600 ）的培养物是大约 0.7 - 1.0。
通过离心收获细胞，10 ，000 ×克，在室温下5分钟。完全去除上清液并丢弃。
冷冻干燥的细胞在一个冷冻-博士揭掉并储存在-80℃。

总脂质提取
对于每一个冷冻干燥的样品，转移0.25毫克到1.5 -毫升低温微管中。
向每个样品管中加入200 μl洗涤过的玻璃珠。
向每个样品管中加入 500 μl氯仿-甲醇 (2:1, v/v) 。螺钉上的特氟隆密封帽紧紧。
放置在样品管中一个珠密耳升和在最大速度下5分钟进行机械剪切在室温下。重复机械裂解两次冰；重新排列中间的试管位置以避免细胞裂解不均匀（图 1 中的步骤1）。
离心的细胞溶胞产物在室温下，万×克5分钟。离心后，细胞碎片将被夹在之间的上清液和玻璃珠（步骤2在图1中）。转移的上清液到新桶Ë小号收集（步骤3在图1中）。
重复氯仿-甲醇萃取程序（步骤小号2 - 6图1中）的五倍。
合并上清液集合的ë ACH样品中的5 -毫升管和上紧凑恒温在60过夜蒸发℃下与所述盖关闭。此步骤需要在通风橱中进行。甲压脚提升蒸发，膜样物质将留在该管的底部。

C:\Users\Madandan\Desktop\2003753--1802 谢志平\Figs tif\图1.tif

图1.小号化学ATIC的升的描绘IPID提取过程

TLC 脂质分析
将脂质提取物溶解在100 - 500 μl氯仿中。
准备溶剂混合物：
为了分离磷脂，制备氯仿-甲醇-H 2 O（65:25:4，v/v/v）混合物（Knittelfelder和Ko hlwein ，2017a和2017b ）。
为了分离中性脂质，制备己烷-乙醚-乙酸 (70:30:1 v/v/v) 混合物（Fuchs等人，2015 年）。
将流动相添加到玻璃 TLC 显影室中。小号aturate所述室气氛与折叠印迹廷纸超过30分钟。
将硅胶 60 板在 100°C的烘箱中激活30 分钟。用铅笔在距 TLC 板底部 2 cm 处画一条细线。
点5 - 20个微升上样溶解在活化硅胶板小心地用10 -微升移液管尖端。保持这些点之间的间距大于 0.5 厘米。另外，发现0.2 - 1微克脂质标准（DAG或PC）来区分每个样品的复杂带和到监控显影和染色小号TEP秒。
在溶剂室中展开每个板，直到溶剂前沿到达板的顶部。为了保持在室中的溶剂的饱和气氛中，而不用打开盖板被显影。
干燥该板在通风橱中对20分钟在室温下。
染色的干燥板用0.03％考马斯亮含有20％甲醇15蓝R-250溶液分钟，和随后的去污渍在20％甲醇，10分钟（中村和半田，1984）。
干燥室温下将板1个小时并拍照通过凝胶成像小号ystem（图URE 2 ）。
分析灰度每种脂质频带的使用的ImageJ （š依照步骤：ø笔一个N个图像文件中的ImageJ -去分析-凝胶-选择第一行-选择下一行-棒（跟踪）Ť OOL -剧情泳道）。

C:\Users\Madandan\Desktop\2003753--1802 谢志平\Figs tif\图2.tif

˚F igure 2.为例进制ħ PTLC分离酵母脂质。一个。中性脂质：溶剂系统是己烷-二乙醚-乙酸(70:30:1 v/v/v) 。DAG，甘油二酯；TAG，三酰甘油；SE，甾醇酯。乙。极性脂质：溶剂系统是氯仿-甲醇-H 2 O (65:25:4, v/v/v) 。FA，脂肪酸；NL，中性脂质；PE，磷脂酰乙醇胺；CL，心磷脂；PC，磷脂酰胆碱；PS，磷脂酰丝氨酸。X，身份不明。大号ipids染色用考马斯马斯亮蓝R-250 。

致谢

作者要感谢周鹏博士和苗晓玲教授（上海交通大学生命科学与生物技术学院）对实验程序的友好建议。这项工作得到了中国国家自然科学基金 (grant s 91957104、31671431 和 91754 110) 的支持。该协议改编自Li 等人。, BMC Biol 18, 107 (2020)和其中引用的著作。

利益争夺

作者声明没有竞争性经济利益

参考

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