材料和试剂
1. 50毫升猎鹰管
2. 35毫米荧光粉（世界精密仪器公司，目录号：FD35-100）
3. 4毫升巴斯德吸管（Sigma-Aldrich，目录号：BR747770）
4.克隆人肾近端肾小管（HK-2）上皮细胞系（美国典型培养物保藏中心，目录号：CRL-2190）
5. Dulbecco的改良版Eagle Medium / Ham的F-12（Fisher Scientific，目录号：31331093）
6. Dulbecco的改良版Eagle培养基（Fisher Scientific，目录号：11966025）
7. Ham's F-12（Fisher Scientific，目录号：31-765-035）
8.青霉素（100 IU / ml ）-链霉素（100 µg / ml ）（Sigma-Aldrich，目录号：P4458-100mL）
9.表皮生长因子（5 ng / ml）（Sigma-Aldrich，目录号：E9644-.5mg）
10.转化生长因子-beta1（TGF-β1），储存在-20 °C （Sigma-Aldrich，目录号：T1654）
11.佛Ë TAL小牛血清（Fisher Scientific公司，目录号：10500064）
12.氯化钠（NaCl的）（Fisher Scientific公司，目录号：S /65分之3160）
13.氯化钾（KCl ）（Sigma-Aldrich，目录号：P3911）
14.镁硫酸盐七水合物（硫酸镁4 · 7H 2 O）（Sigma-Aldrich公司，目录号：230391）
15.磷酸氢二钠二水合物（Na 2 HPO 4 · 2H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：71643）
16.钾二氢磷酸盐（KH 2 PO 4 ）（Sigma-Aldrich公司，目录号：1.04873）
17.碳酸氢钠（NaHCO 3 ）（Sigma-Aldrich，目录号：S5761）
18. HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸）（Sigma-Aldrich，目录号：H3375）
19.氯化钙二水合物（氯化钙2 · 2H 2 O）（Sigma-Aldrich公司，目录号：223506）
20. D-葡萄糖（C 6 H 12 O 6 ）（Sigma-Aldrich，目录号：G8270）
21.氢氧化钠（NaOH ）（Sigma-Aldrich，目录号：S8045）
22.盐酸（HCl ）（Sigma-Aldrich，目录号：320331）
23. EGTA（乙二醇-双（β-氨基乙基醚） - N，N，N 'N' -四乙酸）（Sigma-Aldrich公司，目录号：E3889）
24.细胞培养
生长培养基，保存在4 °C（请参阅食谱）
低（5 mM ）葡萄糖培养基，在4 °C下储存（请参阅食谱）
低（5 mM ）无葡萄糖血清培养基，在4 °C下储存（请参阅食谱）
25. 5（6）-羧基荧光素，在室温下保存（Sigma-Aldrich，目录号：21879）（请参见食谱）
26. 1 ×含钙的平衡盐溶液，在4 °C下储存（请参阅食谱）
27. 1 ×无钙平衡盐溶液，在4 °C下储存（请参阅食谱）

设备

小型无搅拌加热水浴（37 °C ）（Grant Instruments Ltd，目录号：600142003）
Clifton 14 L，热水浴（37 °C ）（Nickel-electro Ltd，目录号：NE1-14）
加湿培养箱：37 °C ，pH 7.4，5 ％CO 2 （CO 2培养箱，Panasonic ，目录号：MCO-170AICD）
莱纳斯光电子metafluor成像工作台（技术中号anufacturing Ç orporation，目录号：63-530）
光曲线CoolSNAP HQ CCD照相机的单色用电源（Roper的小号系统求解，目录号：A01C881022）
蔡司Axiovert 200研究型带有加热台的倒置荧光显微镜（卡尔·蔡司有限公司，目录号：B40-080）
带有EBX 75隔离电源的Zeiss XBO 75显微镜灯罩（卡尔·蔡司有限公司，目录号：B40-065）
拉姆达10-2光学滤波器变换器（萨特我nstrument，目录号：LB10-2）
Tempcontrol 37（卡尔·蔡司有限公司，目录号：37-2）
Dell Precision PC（戴尔，目录号：T3500）
大号iyama PROLITE PC监视器（饭，目录号：E2472HD）
声波超声仪（Jencon Scientific Ltd，目录号：E0375）

软件

Metamorph v7.7.5.0软件（可从https://www.moleculardevices.com/products/cellular-imaging-systems/acquisition-and-analysis-software/metamorph-microscopy#gref获得）（Meta Imaging系列，由Molecular Devices Inc.提供））
斐济（I mageJ ）v2.1.0软件（可从https://fiji.sc/获得）（ImageJ studio Ltd）

程序

组织培养
在含有DMEM / F-12的FCS，EGF和青霉素-链霉素生长培养基中维持HK-2细胞（第18-30代），该培养基具有较高的基础葡萄糖浓度（17.5 mM ）以促进细胞生长。
种子HK-2细胞在无菌35毫米fluorodishes以1:1的接种密度× 10 4在2米升-含F 12-DMEM / FCS，EGF和青霉素-链霉素的生长培养基的生长培养基（见注1）。
在处理之前，将HK-2细胞在含低（5 mM ）葡萄糖DMEM / F-12的FCS，EGF和青霉素-链霉素培养基中培养48小时，然后在无血清的低（5 mM）中孵育过夜。）含有DMEM / F-12的EGF和青霉素-链霉素培养基，以抵消高（17.5 mM ）葡萄糖引起的任何促刺激作用。
在不含血清的低（5 mM ）葡萄糖DMEM / F-12的EGF和青霉素-链霉素培养基中孵育过夜后，用所需的刺激物（例如TGF-β1，10 ng / ml ）对HK-2细胞进行对照处理不含血清的低（5 mM ）葡萄糖DMEM / F-12的EGF和青霉素-链霉素培养基中的HK-2细胞培养48小时，最终融合度为80％。

平衡盐溶液和5（6）-羧基荧光素制剂
准备1 L 1 ×含钙和1 L 1 ×无钙的平衡盐溶液（请参阅食谱），并在小型水浴中保持37 °C的温度。
制备两种足够羧基溶液（200在50μM）米升Falcon管（见注2 ）。一个在50米升1 ×平衡盐溶液和一种在50含钙米升1 ×无钙平衡盐溶液（见注3 ）。在44 kHz下将两种溶液超声处理10-20分钟（37 °C ），直到羧基荧光素粉末完全溶解。将溶液在37 °C的水浴中放置，并根据需要使用。

初始钻机准备
如图1所示，按此顺序：

打开EBX 75隔离灯。
打开温度控制器37，将设定点调整为37 °C （实际）。等待20-30分钟，使加热台达到所需温度。
打开CoolSNAP HQ CCD黑白相机。
开启Lambda 10-2光学滤镜更换，确保在Axiovert 200倒置显微镜上在510 nm处发出离子（请参阅注4 ）。
取下盖子并打开显微镜。
打开PC，加载Metamorph ，然后从屏幕顶部的获取选项卡中按“获取”。

图1. Axiovert倒置荧光显微镜装置。用于羧基荧光素染料吸收评估的倒置荧光显微镜设置示意图。倒置荧光显微镜安装在抗振动Metafluor成像工作台上，具有XBO 75显微镜灯和Lambda 10-2光学滤镜转换器，该XBO 75显微镜灯连接到EBX 75隔离的外壳单元。加热台也由温度控制器37单元安装和控制。将CoolSNAP HQ CCD单色相机安装在显微镜的前部，将其链接到电源，然后再连接到PC以进行图像可视化。

羧基荧光素吸收
1.从加湿的培养箱中取出一种荧光粉，然后使用巴斯德吸管将培养基吸出到废液罐中。
2.为了允许吸收半通道染料，将细胞在37 °C的湿润培养箱中于2 ml l 1 ×无钙羧基荧光素溶液中培养10分钟（请参阅注5）。
3.要关闭半通道，使用巴斯德吸管，取出1 ×无钙羧基溶液中，用2代替米升1 ×含钙羧基溶液在37 ℃下在湿润的培养箱中5分钟。
4.为了除去任何残余的羧基荧光素的染料其可以干扰成像，洗小心使用20个细胞米升预热1 ×平衡盐溶液离开1-2含钙米升的1 ×在平衡盐溶液含钙FluoroDish中（请参阅注释6 ）。

影像撷取
1.确保在黑暗环境中完成图像捕获。为了使图像捕获标准化，首先测量产生最亮信号的细胞（经TGF-β1处理的细胞），并固定曝光开放时间以进行处理之间的比较。
2.为固定曝光时间，首先将细胞放在显微镜加热台上，打开荧光（在510 nm处捕获的发射光），然后将滑动开关设置到显微镜上的透镜（眼睛符号）（请参见注释7 ）。。
3.找到产生明亮图像的细胞群，将显微镜滑块切换至相机（相机符号），然后使用Metamorph中的获取窗口，按“ F2：Show Live”以在PC屏幕上可视化细胞。调整图像的焦点，然后按“自动曝光”（图2）（请参见注释8 ）。
4.设置好曝光时间后，要减少光漂白，请将滑块开关重新设置到镜头上，然后有效地移动荧光粉以定位另一个隔离的细胞群以进行图像捕获。此后，将滑块开关设置到相机，然后在Metamorph中，按“ F2：实时显示”，调整图像的焦点，最后按“获取”按钮以捕获图像（图2）（请参阅注释9 ）。

图2. Metamorph V.7.7.5.0中“ Acquire”选项卡的表示。显示了“获取”窗口的屏幕快照，以了解不同的功能。为了在PC屏幕上可视化单元格图像，应按下'F2：Show Live'/'F2：Stop Live'，然后按下' AutoExpose '按钮或'Acquire'按钮以捕获实时图像。

5.重复该过程，直到捕获10-15张图像（请参阅注释10 ）。
6.要将图像保存在Metamorph中，请转到：
文件（位于屏幕的左上方）。
设置顺序文件名…
设置“基本名称”作为条件（即，TGF-β1）。
从1开始设置图像编号。
将数字宽度设置为1 。
将“另存为类型”设置为“变形TIFF” 。
将“如果图像已经存在”设置为“跳至序列末尾” 。
“选择目录”将文件保存到指定的文件夹。
在PC键盘上，使用“ Control + U ”快捷方式为每个图像完成此操作。
7.关闭荧光，弃去FluoroDish中从和重复小号挠度d（不改变的曝光时间为实验的其余部分）。

数据分析

使用Fiji（基于ImageJ的成像处理软件）分析图像。首先，将图像批量转换为JPG文件并进行增强。然后分别处理每个图像，以获取细胞强度值，将其平均并进行统计测试。

影像准备
1.使用称为宏的一组指令对图像进行批处理，这些指令可实现以下目的：
TIFF文件是无损（或未压缩）图像，通常很难处理，因此我们将其批量转换为JPG。
斐济默认为灰度颜色查找表，因此将其更改为绿色。
图像通常需要增强（对比度等）。
2.在工具栏中，单击“处理”，“批处理”，然后单击“宏”。将出现一个框（图3 ）
3.单击“输入”，然后选择输入图像的文件夹。
4.为处理后的图像创建一个新文件夹，单击“输出”，然后选择此新文件夹。
5.在“输出格式”列表下，选择“ JPEG”。
6。在窗口中心的大文本框中，输入以下内容（请参见注释11 ）：

运行（“绿色”）；

运行（“增强局部对比度（CLAHE）”，“块大小= 127直方图= 256最大= 3遮罩= *无*”）；

7.单击“处理”以开始批量转换。

图3 。批处理窗口。“批处理”窗口允许使用宏将更改应用于输入文件夹中的所有图像，将其转换为JPEG，然后保存在输出文件夹中。在这里，颜色查找表更改为“绿色”，并且使用默认设置增强了局部对比度。

图像分析
1.通过单击“文件”，“打开”打开图像（从上面选择的输出文件夹中）。可以同时打开多个图像。
2.在工具栏中，单击“分析”，“工具”和“ ROI管理器”。将出现一个框（图4 A）。
3.从斐济主程序中，选择一个椭圆形选择工具（图4 B）。
4.在图像中的每个单元格周围绘制感兴趣的区域（ROI）。每次绘制ROI时，在ROI Manager上单击“添加[t]”（或在键盘上按“ t” ）。勾选“显示全部”有助于识别已选择的单元格。
5.选择完所有细胞后（图4 C），在不存在细胞的背景区域绘制最终的ROI。将此ROI添加到ROI Manager。
6.在工具栏中，单击“分析”和“设置度量”。将出现一个框（图4 D）。取消勾选“集成密度”以外的所有功能。
7.在ROI管理器中，单击“测量”。将出现一个结果框，其中包含每个ROI的强度值（图4 E）。将此复制到Excel并减去最后一个值（背景ROI）。

图4 。添加感兴趣区域可以测量荧光强度。一。的利息（ROI）经理的区域，它记录添加到图像的所有ROI的。在图像上绘制选择后，单击“添加[t]”将ROI添加到管理器。乙。选择了一个椭圆形选择工具。Ç 。已绘制每个单元周围的ROI，并将其添加到ROI Manager。还添加了背景的ROI（右侧），将从每个单元格中减去该ROI。d 。从测量列表中选择“积分密度”。Ë 。单击图4A中的“测量”后，将出现一盒原始强度以供进一步分析。

8.取平均值，忽略任何明显的异常强度，并对所有图像和处理重复此部分。在每个图像之间，在ROI Manager中选择所有ROI，然后单击“删除”。
9.分析完所有图像后，可以使用ANOVA / t -Test确定统计显着性，典型结果如图5所示。

图5.使用相差显微镜和对照vsTGFβ1处理的HK-2细胞的荧光图像得到的示例结果。在相差（放大倍数× 20）和荧光（放大倍数× 63）显微镜下，与对照相比，用TGF-β1处理的HK-2细胞的代表性图像。一。TGF-β1（10 ng / ml ）刺激HK-2细胞形态从经典的鹅卵石外观（上图）转变为更细长的成纤维细胞样表型（下图）。乙。在荧光显微镜下，与对照相比，暴露于TGF-β1的HK-2细胞表现出增加的染料吸收。Ç 。经TGF-β1（10 ng / ml ）处理的细胞与对照细胞相比，染料摄取增加了300％。数据表示为平均值±SEM，强度表示为与低葡萄糖对照相比的百分比变化，并代表来自3个独立实验的多个细胞记录。（*** ，P ＜0.001）。

笔记

对于48小时处理，该接种密度针对HK-2细胞进行了优化，对于其他细胞系/处理时间可能有所不同。
羧基荧光素浓度（200 µM），孵育时间和洗涤液已针对HK-2细胞进行了优化。对于其他细胞系，这些参数可能会有所不同，必须进行优化。
等分试样50米升-之前将5（6）各平衡盐溶液的羧基。仔细称量3.95毫克5（6）-羧基荧光素，并在巴斯德移液器的帮助下轻轻将其倒入平衡盐溶液中，以确保所有5（6）-羧基荧光素均已混合。
如果荧光灯未从显微镜发出，请尝试按Lambda 10-2光学滤镜更换器上的“本地”按钮。如果这样做不起作用，请按“重置”，并确保Lambda装置上显示“快门A-开”和“快门B-开”。
少数半通道可能会打开，而不会去除[Ca 2+ ] e 。
离开1米升1 ×在溶液中含钙FluoroDish中会鼓励永久半通道闭合，同时防止细胞收缩和最终细胞死亡。
为确保捕获的光在510 nm处发射，请在倒置显微镜上，确保打开“ Fs 09”。
经TGF-β1处理的HK-2细胞的暴露时间约为200-400毫秒。
在图像捕获过程中，请在数据分析之前防止任何不必要的噪声/振动以保持图像质量。
在细胞群体的定位过程中，可能会出现高背景。通过用20 ml l 1 ×含钙平衡盐溶液进一步洗涤细胞，可以提高图像质量/减少背景噪音。
有关其他可用命令，请参考在线文档。使用“插件”，“宏”，“录音机”功能小号也可以是映射到的图像作出宏等同变化是有用的。

菜谱

生长培养基
5亿升Dulbecco改良的Eagle Medium / Ham F-12营养混合物+谷氨酰胺（2 mM ）（DMEM / F-12）

50米升胎儿小牛血清（10％重量/体积）

10 m l青霉素（100 IU / ml ）-链霉素（100μg/ ml ）

1 µl表皮生长因子（5 ng / ml ）

在4存储℃下，预先温热至37 ℃，在使用前

低（5 mM ）葡萄糖培养基（1：1比例）
500 m l DMEM（50 m l胎牛血清（10％wt / vol ），10 m l青霉素（100 IU / ml ）-链霉素（100μg/ ml ）和1μl表皮生长因子（5 ng / m l ）
500 m l F-12 + GlutaMAX （10 mM葡萄糖）（50 m l胎牛血清（10％wt / vol ），10 m l青霉素（100 IU / ml ）-链霉素（100 µg / ml ）和1 µl表皮生长因子（5 ng / ml ）
当天，在无菌环境中将每种培养基以1：1的比例混合至所需的体积。储存于4 °C ，使用前预热至37 °C 。

低（5 mM ）无葡萄糖血清培养基（1：1比例）
500 m l DMEM（10 m l青霉素（100 IU / ml ）-链霉素（100 µg / ml ）和1 µl表皮生长因子（5 ng / ml ））
500米升F-12 + GlutaMAX的（10 mM的葡萄糖）[10米升青霉素（100IU /米升） -链霉素（100微克/米升）和1 μ升表皮生长因子（5毫微克/米升）
当天，在无菌环境中将每种培养基以1：1的比例混合至所需的体积。储存于4 °C ，使用前预热至37 °C 。

5（6）-羧基荧光素（200 µM）
3.95毫克5（6）-羧基荧光素

加入50米升的1 ×平衡盐溶液或1含钙×无钙平衡盐溶液。在37 °C下以44 kHz的频率超声处理10-20分钟，直到完全溶解。

1 ×含钙平衡盐溶液（1 L，pH 7.4）
8.0克氯化钠（NaCl ，137 mM ）

0.4克氯化钾（KCl ，5.36 mM ）

0.2克镁的硫酸盐七水合物（硫酸镁4 · 7H 2 O，0.81 mM ）

0.06 g磷酸氢二钠二水合物（Na 2 HPO 4 · 2H 2 O，0.34 mM ）

0.06克钾的二氢磷酸盐（KH 2 PO 4 ，0.44毫摩尔）

0.35克碳酸氢钠（碳酸氢钠3 ，4.17毫摩尔）

2.38 g的HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸，10 mM ）

0.19 g二水氯化钙（CaCl 2 · 2H 2 O，1.26 mM ）

0.36克d葡萄糖（C 6 H ^ 12 ö 6 ，2.02毫）

使用dH 2 O补足至1 L，并使用1M氢氧化钠（NaOH ）或盐酸（HCl ）将pH调节至7.4 。储存在4 °C直到需要，然后在37 °C加热。

可以将其制成10倍的原料，而无需添加二水合氯化钙和葡萄糖，并可以长期保存在冰箱中。在使用当天，通过用dH 2 O稀释10 ×储备液1:10来补充1 L ，在1 L 1 ×平衡盐溶液中添加0.19 g二水氯化钙和0.36 g D-葡萄糖，并预热使用前应降至37 °C 。

1 ×无钙平衡盐溶液（1 L，pH 7.4）
8.64克氯化钠（NaCl ，137mM）

0.4克氯化钾（KCl ，5.36mM）

0.2克镁的硫酸盐七水合物（硫酸镁4 · 7H 2 O，0.81mm快速）

0.06 g磷酸氢二钠二水合物（Na 2 HPO 4 · 2H 2 O，0.34 mM ）

0.06克钾的二氢磷酸盐（KH 2 PO 4 ，0.44毫摩尔）

0.35克碳酸氢钠（碳酸氢钠3 ，4.17毫摩尔）

2.38 g的HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸，10 mM ）

0.36克d葡萄糖（C 6 H ^ 12 ö 6 ，2.02毫）

0.038克EGTA（乙二醇-双（β-氨基乙基醚） - N，N，N 'N' -四乙酸，100 μM）

使用ddH 2 O补足至1 L，并使用1 M氢氧化钠（NaOH ）或盐酸（HCl ）将pH调节至7.4 。储存在4 °C直到需要，然后在37 °C加热。

这可以是米ADEü P作为10 ×库存不添加EGTA和葡萄糖并保持在冰箱为长期。在使用当天，通过用ddH 2 O稀释10 ×储备液1:10补足1 L ，在1 L 1 ×平衡盐溶液中添加0.038 g EGTA和0.36 g D-葡萄糖，并预热至37 °C使用前。

致谢

CEH和PES要感谢英国糖尿病协会（Diabetes UK）的慷慨支持（16/0005427 16/005544和18/0005919）。

利益争夺

作者宣称他们没有竞争利益。

参考文献

Bosco ，D.，Haefliger ，JA和Meda ，P。（2011）。连接蛋白：内分泌功能的关键介质。生理学版本91（4）：1393至1445年。
Brokamp ，C.，Todd，J.，Montemagno ，C.和Wendell，D.（2012）。Cx43半通道和聚集通道的电生理学。PLoS One 7（10）：e47775。
Cea ，LA，Fernandez，G.，Arias-Bravo，G.，Castillo-Ruiz，M.，Escamilla，R.，Branes ，MC和Saez ，JC（2020）。半通道的阻断使成纤维细胞的分化命运和来自Dysferlin缺陷小鼠的骨骼肌特征正常化。INT Ĵ分子科学21（17）：6025。
Ceelen ，L.，Haesebrouck ，F.，Vanhaecke ，T.，Rogiers ，V.和Vinken ，M.（2011）。细菌病原体及其毒素对连接蛋白信号传导的调节。Cell Mol Life Sci 68（18）：3047-3064。
Hills，C.，Price，GW，Wall，MJ，Kaufmann，TJ，Chi- Wai ，S.，Yao ，WH and Squires，PE（2018）。转化生长因子Beta 1驱动糖尿病肾小管细胞中连接蛋白介导的细胞间通讯转换。Cell Physiol Biochem 45（6）：2369-2388。
Johnson，RG，Le，HC，Evenson ，K.，Loberg ，SW，Myslajek ，TM，Prabhu ，A.，Manley，AM，O'Shea，C.，Grunenwald ，H.，Haddican ，M.，Fitzgerald，PM ，罗宾逊，T.，西斯特纳，BA，赛斯，JC，刘，TF，莱尔德，DW和谢里登，JD（2016）。连接蛋白半通道：染料吸收和泄漏的方法。Ĵ Membr生物学249（6）：713-741。
洛佩兹，W.，德兰，J.，Alsamarah ，A.，罗，Y.，哈里斯，AL和孔特雷拉斯，JE（2016）。连接蛋白半通道中钙的门控机制。美国国家科学院院刊（Proc Natl Acad Sci）美国A 113（49）：E7986-E7995。
Musil ，LS和Goodenough ，DA（1991）。连接蛋白43细胞内运输，磷酸化和组装成间隙连接斑块的生化分析。细胞生物学杂志115（5）：1357-1374。
Pinto，BI，Pupo ，A.，Garcia，IE，Mena- Ulecia ，K.，Martinez，AD，Latorre ，R.和Gonzalez，C.（2017）。Cx46半通道中的钙结合和电压门控。科学代表7（1）：15851。
Price，GW，Chadjichristos ，CE，Kavvadas ，P.，Tang，SCW，Yiu ，WH，Green，CR，Potter，JA，Siamantouras ，E.，Squires，PE and Hills，CE（2020）。在实验性慢性肾脏疾病中，阻断连接蛋白43介导的半通道活性可防止早期肾小管损伤。小区通信信号18（1）：79。
Roy，S.，Jiang，JX，Li，AF and Kim，D.（2017年）。连接蛋白通道及其在糖尿病性视网膜病变中的作用。Prog Retin Eye Res 61：35-59。
Sáez研究，JC，Contreras的-Duarte的，S.，拉夫拉，VC，桑蒂瓦涅斯，CA，Mellado ，LA，Inostroza ，CA，阿尔韦亚尔，TF，雷塔马尔，MA，Velarde的，V。和奥雷利亚纳，JA（2020）。干扰素-γ和高葡萄糖诱导的Cx43半通道开放导致内皮细胞功能障碍和损害。生物化学生物生物物理学ACTA分子细胞RES 1867（8）：118720。
Sáez ，JC和Green，C.（2018）。连接蛋白半通道参与慢性疾病的炎症反应。INT Ĵ分子科学19（9）：2469。
Siamantouras ，E.，Price，GW，Potter，JA，Hills，CE and Squires，PE（2019）。嘌呤能受体（P2X7）激活可减少近端肾小管上皮细胞之间的细胞粘附。纳米医学22：102108。
Solini ，A.，Usuelli ，V.和Fiorina，P.（2015）。肾脏疾病中细胞外ATP的阴暗面。J Am Soc Nephrol 26（5）：1007-1016。
Spray，DC和Hanani ，M.（2019）。间隙连接，pannexins和疼痛。神经科学快报695：46-52。
Taruno ，A.（2018年）。ATP释放渠道。INT Ĵ分子科学19（3）：808。
Trexler ，EB，Bukauskas ，FF，Bennett，MV，Bargiello ，TA和Verselis ，VK（1999）。连接蛋白46半通道制剂揭示了pH对连接蛋白的快速直接影响。Ĵ根生理学113（5）：721-742。
Veenstra ，RD（2001）。双全池间隙结电流和电压记录的电压钳位限制。I.电导测量。Biophys J 80（5）：2231-2247。