材料和试剂

用于组织培养的方盘[外部尺寸（mm）：126.40 x 126.40 x 20.00]（SPL Life Sciences，目录号：10125）
1.5 ml微型管（Eppendorf，目录号：0030121589）
显微镜载玻片（尺寸：76 x 26毫米;厚度：1毫米）（Marienfeld ，目录号：1000200）
透明幻灯片盖玻片（尺寸：60 x 24 mm;厚度：0.170 mm±0.005 mm）（Marienfeld ，目录号：0107242）
拟南芥
二苯硼酸-2-氨基乙酯（DPBA）（Sigma-Aldrich，目录号：D9754）
海卫一X-100 （Sigma-Aldrich，目录号：T8787）
含B5维生素的Murashige ＆Skoog培养基（Duchefa Biochemie ，目录号：M0231）
Phyto Agar （Duchefa Biochemie ，目录号：P1003）
蔗糖（Duchefa Biochemie ，目录号：S0809）
DPBA染色液（请参阅配方）

设备

镊子
植物生长室
微管旋转器
吸管
共聚焦显微镜系统（Leica，型号：SP8）

程序

植物生长和DPBA染色程序
在这里，阿拉比dopsis拟南芥使用。但是，该协议也可以应用于其他工厂。在补充2％蔗糖和1.2％植物琼脂的MS培养基上培养植物5天（图1）。生长室条件为22±1℃，长日照（16小时光照/ 8小时黑暗），和光强度100微摩尔米-2小号-1 。
注意：播种后，切记将中板垂直放置在生长室中。从而，根在培养基的表面上生长，并且可以获得完整的根尖样品。

图1.五天大的拟南芥幼苗。标尺a a r = 5毫米。

向每个微管中加入1 ml DPBA染色溶液（配方1）。
用干净的镊子将5天大的拟南芥幼苗小心地转移到装有DPBA染色液的微管中（5苗/微管）。
将微管放在旋转器中，在室温下旋转5分钟。
停止旋转器，将微管转移到机架上，然后去除DPBA染色溶液。
注意：在此步骤中，请小心使用移液器除去DPBA染色溶液，并尽量不要损坏植物，尤其是根尖。
洗涤时，向每个微管中加入1.5 ml蒸馏水。将微管放在旋转器中，在室温下旋转2分钟。
停止旋转器，将微管转移到机架上并除去水。
再重复两次步骤A6和A7 。
注：一压脚提升冲洗，能保持植物在水中，并尝试立即检测。请勿将样品在水中停留超过30分钟。
将幼苗转移到显微镜载玻片上，盖上并用共聚焦显微镜检测根尖中的黄酮类化合物。

共聚焦显微镜
对于DPBA-山emp酚，应用发射光谱（475-500 nm）。
对于DPBA-槲皮素，应用发射光谱（585-619 nm）。
请记住要拍摄其他明场照片以进行控制。

数据分析

按以下顺序排列数据：（1）明场；（2）山萘酚；（3）槲皮素。请查看以前的出版物以获取详细信息（Nguyen等人，2013、2015和2016 ； Vu等人，2015）。

图2. 5天大拟南芥幼苗（野生型）根尖中的黄酮醇（山ka酚和槲皮素）的积累。刻度尺b AR = 100 μ米。

菜谱

DPBA染色液
100 ml的试剂量
DPBA 0.25克
海卫一X-100 20 μ升
Milli-Q水高达100毫升
注意事项：
混合后可以保留并看到一些DPBA晶体。
该染色液可在-20℃保存 °C进一步使用。

致谢

我要感谢Cuong Thach Nguyen博士（越南阮达城大学）和Minh Tan Nguyen博士（美国加州大学洛杉矶分校牙科学院）对本协议的批判性阅读。该协议源自先前的出版物（Nguyen等，2013、2015和2016）。作者宣称他们没有利益冲突。

参考文献

Lewis，DR，Ramirez，MV，Miller，ND，Vallabhaneni ，P.，Ray，WK，Helm，RF，Winkel，BS和Muday ，GK（2011）。生长素和乙烯通过不同的转录网络诱导黄酮醇积累。植物生理学156（1）：144-164。
Nguyen，HN，Kim，JH，Hyun，WY，Nguyen，NT，Hong，SW and Lee，H.（2013年）。TTG1介导的黄酮醇的生物合成减轻了对ABA响应的根系生长抑制。植物细胞Rep 32（4）：503-514。
Nguyen，NH，Jeong ，CY，Kang，GH，Yoo ，SD，Hong，SW和Lee，H.（2015）。通过采用HY5增加MYBD通过压制花青素积累MYBL2在拟南芥。植物J 84（6）：1192-1205。
Nguyen，NH，Kim，JH，Kwon，J.，Jeong ，CY，Lee，W.，Lee，D.，Hong，SW和Lee，H.（2016年）。表征拟南芥黄酮醇合成酶1（FLS1）-overexpression植物响应于非生物胁迫。植物生理学生物化学103：133-142。
Sheahan，JJ和Rechnitz，GA（1992）。拟南芥的类黄酮特异性染色。生物技术13（6）：880-883。
Vu，TT，Jeong ，CY，Nguyen，HN，Lee，D.，Lee，SA，Kim，JH，Hong，SW和Lee，H.（2015年）。表征油菜黄酮醇合成酶在黄酮生物合成相关油菜L. ĴAGRIC食品化学63（35）：7819-7829。