材料和试剂
1. 手术胶带（3M，Durapore，货号：1538-0）
2. 金抹布（Yuhan -Kimberly，目录号：41112 ）
3. 牙签（年轻星）
4. 聚酰亚胺管（Wilco，内径0.6毫米，外径0.72毫米，目录号：PITU-0610）
5. 可吸收缝合线（AILEE，Surgifit ，目录号：AV818）
6. 组织粘合剂（3M，Vetbond ，目录号：1469SB）
7. 带针注射器（Feel Tech Bio Co.，目录号：30G-0.5-5 / 16）
8. 注射器过滤器（ADVANTEC，目录号：DISMIC-13CP）
9. 15 ml锥形管（Hyundai Micro，目录号：H20015）
10. 盐酸利多卡因2％（Dai Han Pharm。Co.，Ltd.）
11. 酮洛芬（Unibiotech Co. Ltd.，UNI KETOPRO inj。）
12. 戊巴比妥麻醉液（请参阅食谱）
Entobar （100毫克/ 2毫升戊巴比妥钠，Hanlim Pharm。Co .，Ltd.）
丙二醇（Sigma-Aldrich，目录号：P4347）
100％乙醇（Sigma-Aldrich，目录号：E7023-500ML）

设备
锋利钳（精细科学工具，目录号：11254-20）
弹簧剪刀（精细科学工具，目录号：15018-10 ）
持针器（精细科学工具，目录号：12565-14）
手术刀刀片（精细科学工具，目录号：10011-00）
刀片架（Fine Science To ols，目录号：91003-12）
由黏土制成的车身支架（Bostik，Blu Tack Original；尺寸W55 x D40 x H35 mm；图s 1A - 1 D），固定在回缩系统（Fine Science工具，电磁固定器回缩系统，目录号：18200-03 ；图）上1E）

图1.身体固定器和收回系统。广告。车身支架的俯视图（A），正面（B），侧面（C）和对角向上（D）。E.安装在回缩系统上的车身支架。

烧灼器（Fine Science Tool，目录号：18010-00 ）；使用长柄钳将烧杯器的尖端逐渐变细（图2）

图2.锥形烧杯的尖端（蓝色箭头）

手术显微镜（徕卡，型号： M320 ）
H 吃灯（Forsens Lights Co.，Ltd.，型号：SJ-10）
紫外线消毒器（Bluezone ，型号：CM-1-1）
鸟笼（Quality Cage Crafters，型号：CC-1，尺寸：8“ wx 8” dx 8“ h）
移液管（Nichiryo ，Benchimate 1000）
用于戊巴比妥溶液的压接小瓶和带隔垫的铝制密封件（韩国LK Lab，目录号分别为V01-214-228 和V01-214-603）
涡旋振荡器（IKA，涡旋1）

程序
输液规程由两个主要部分组成，（A）制作管子和（B）通过外科手术将管子插入支气管，以防止外侧阴唇内收。
油管制作
切〜2.5 - 长30毫米的聚酰亚胺管。
如图3A和3B所示，使用刀片或弹簧剪刀切出中间部分和边缘。确保切割端光滑。
如图3D所示，用镊子将其折成两半（图3C）。
用紫外线消毒器对管道进行消毒。

图3.将聚酰亚胺管插入支气管。AB。切掉中间部分和边缘后，管道的侧视图（A）和顶视图（B）。C.折叠后的油管侧视图。D.管子被镊子折叠。

手术
用食指和鸟类的一个小手指（图腿钉扎鸟的颈部保持鸟仰卧小号4A-B）。将70％的乙醇滴在胸上，并用一根手指将羽毛放在一边，使皮肤暴露在左胸肌上方（图4C）。使用30口径的针头将戊巴比妥溶液（对于12 g的鸟[50 mg / kg]，为40 µl；请参见食谱）注射到左胸肌中（图4D）。鸟类通常在10分钟内无法移动。
注意：也可以使用其他麻醉剂注射，但是吸入麻醉（例如，异氟烷）不适合该手术，因为手术过程中包括呼吸系统中的切口，麻醉气体可以通过这些切口轻易地泄漏到体外。

图4.麻醉管理。AB。用食指（A）捏住鸟颈，用小指（B）捏住鸟腿，使鸟仰卧。C.左胸肌上方的裸露皮肤（黄色箭头）。D.使用30号针头将戊巴比妥溶液注入左胸肌。E.握住腿并垂下鸟的身体，检查腿的反射。
握住双腿并悬挂鸟类的身体检查腿部反射（图4E），以确保完全麻醉。如果家禽在悬吊位置仍然不动，请继续执行下一步。如果不是，则注入10 µl戊巴比妥溶液，然后再等待10分钟。重复此过程，直到禽只在悬挂位置不动为止。
通过用手指一次捏和拉出几根羽毛，在上胸部和下颈部周围拔出羽毛。
将禽鸟放在身体固定器上（图5A），并用外科胶带将腿和头缠在底板上，如图5B所示。
注意：确保颈部伸展良好，并且头部向后拉得足够好。否则，在以下步骤中，syrinx将无法完全暴露。

图5.一只鸟躺在车身支架（A）上，并用胶带粘在底板（B）上。黄色箭头表示手术胶带。

用70％的乙醇擦拭下颈部和上胸部周围的皮肤。
提起皮肤轮下颈部区域使用尖锐的镊子和注射利多卡因HC 升，2％（约50 μ 升）皮下注射。
做一个切口（10 - 沿着从下颈部到上胸部（图6）的中线皮肤15mm长）。

图6.从下颈部到上胸部的中线皮肤切口（黄色三角形）

用剪刀和镊子将脂肪组织从胸肌中分离出来，然后将脂肪组织推向喙。此操作将暴露interclavicular气囊（图小号7A- 7 B）。

图7.暴露并切开锁骨间气囊。A.将脂肪组织推向喙后，胸部区域的远景。B. A的放大图，显示了左右胸肌之间的锁骨间气囊。C.切开气囊后，可以在体腔中看到syrinx。

用弹簧剪刀切开锁骨间气囊，露出体腔中的syrinx（图7C）。
将牵开器连接到胸肌的边缘，然后将其拉向两侧（图8）。调整身体和头部的位置，以使整个syrinx清晰可见。
注意：将牵开器向侧面拉时，请确保它们不会妨碍胸部呼吸。呼吸周期应始终规则且大于1 Hz。

图8.暴露的syrinx

完全烧灼连接到syrinx（食管气管支气管动脉）的血管（图9中的蓝色箭头）。此步骤对于减少将在步骤B 12 中进行的syrinx切口出血至关重要。

图9.烧灼之前（A）和之后（B）的血管。蓝色箭头指示血管上的烧灼部位，黄色箭头指示syrinx。

麦E在气管只是用弹簧剪刀（F瘘管以上的最底部和腹侧部的水平切口igure 10A），然后使一垂直切口在沿中线（图10B）的空洞的腹侧。

图10. 在气管上做一个水平切口（A中的箭头），在syrinx上做一个垂直切口（B中的箭头）

使用镊子轻轻打开syrinx，并确保syrinx内的支气管开口可见（图11A）。如果切口出血，请在切口上放一块扭曲的Kimwipe，并放置一会儿以吸收血液。确保syrinx内部没有血液，否则手术后鸟将呼吸困难。
握住管子，用镊子将其折叠（如图3D所示），用其他镊子打开syrinx的垂直切口（图11A），然后将管子插入syrinx内的支气管开口（图11B）。
注意：确保将软管的两端正确插入支气管，以防止侧唇向呼气气流中内吸。可以通过从顶部看内部的管道来检查管道的位置。如果导管位置正确，则可以看到支气管的内壁通过导管深入到内部。
保持syrinx的切口不变（图11C），然后卸下牵开器。
注意：不建议使用手术粘合剂闭合切口，因为这可能会干扰syrinx内部的气流并降低手术的成功率。

图11.将导管插入支气管。A.插入管道之前，先将syrinx内部。箭头指示支气管的开口。B.将管子插入支气管后，syrinx的内部。箭头指示管道的左右部分。C.插入管道后的Syrinx。

将脂肪组织放回原始位置（左右胸肌之间），然后用牙签和镊子用组织粘合剂将其粘到肌肉上（图12）。
注意：粘合脂肪组织时，至关重要的一点是，将脂肪组织接触肌肉的整个区域粘合起来。否则，空气可能会通过脂肪组织和肌肉之间的开口进入或离开体腔。这种异常的呼吸将阻止syrinx切口的愈合。

图12.粘合将组织置于胸肌上。脂肪组织在粘上之前（A，蓝色箭头），部分粘在左胸肌上（B），而（C）完全粘在左右胸肌上。

从伤口的顶部到底部缝合皮肤以闭合切口（图13）。与缝合线业务承包商穿刺皮肤的左侧和右侧开始E（图小号13A- 13 C），结并列有固定螺纹到位，继续朝向缝合伤口（图的底部小号13D- 13 E），并用另一根系结结束缝合以防止松动（图13F）。
注意：确保没有空气通过切口进出；如果空气泄漏，切口的一部分会随着呼吸周期定期打开。

图13.通过缝合皮肤闭合切口。箭头指示缝合针；三角形表示缝合线。

用30号针头（如图4D所示）将酮洛芬（5 mg / kg）注入胸肌，以减轻麻醉剂消退后的潜在疼痛。
将鸟放在一个小笼子里，并保持加热灯亮，直到鸟完全康复。鸟类通常在12小时内恢复；完全康复的迹象是在笼子里经常跳来跳去，没有身体羽毛浮肿。
注意：如果家禽在手术后的一天内未显示完全恢复的迹象，请立即对其实施安乐死。如果鸟类在完全康复后发出喘息声，则插入支气管的管道很可能会被血液或粘液部分堵塞。可以通过重做手术并清洁或更换导管来解决这种情况。

数据一nalysis

经过彻底灭绝手术的鸟类在完全恢复后立即开始正常表现，可以用于其他实验，包括诱导雄鸟定向唱歌。处于清醒状态的女性通常不会出现运动障碍或呼吸困难（请参见视频2）。与发出声音的完整雌性相反（图14A和视频1），发声清晰的雌性几乎完全静音。它们只产生很短的非常安静的耳语声音（图14B- 14 C和视频2），几乎不会污染定向歌曲录音。

图14.根除术主要消除女性发声。A.灭绝手术前一天对雌性雄鸟的发声，以频谱图（顶部）和声音波形（底部）显示。红色箭头表示发声（呼叫），蓝色箭头表示运动声。另请参阅视频1，它与该录音同时录制。B.灭绝手术后一天从同一只鸟录制的声音。橙色箭头指示鸟儿发出耳语声音的时间点，通过目视检查同时录制的视频（视频2）可以识别出这些声音。C.灭绝手术后34天从同一只鸟录制的声音。约定与B相同。另请参见同时录制的视频3。

视频1. 灭绝手术前一天，雌鸟的发声行为

视频2. 灭绝手术后同一只鸟的发声行为

视频3. 灭绝手术后34天同一只鸟的发声行为

笔记

在整个手术过程中检查鸟的呼吸。如果它变得不规则或异常缓慢（约< 1 Hz），请调整牵开器，以免干扰呼吸。如果呼吸仍然不规则或缓慢，请中断手术并将禽鸟放在加热灯下，直到恢复正常呼吸为止。
手术期间，经常会因皮肤上的切口，处置组织或syrinx发生少量出血。可以通过在切口上放置一块扭曲的Kimwipe片并放置一会儿或烧灼出血部位来停止这种出血。如果体腔中的主要血管被意外切开，则会发生更严重的出血。在这些情况下，很难控制出血，因此应立即对家禽实施安乐死。

菜谱
戊巴比妥麻醉药
Entobar （100毫克/ 2毫升戊巴比妥钠）
丙二醇
100％乙醇
ddH 2 O
使用涡旋振荡器在15 ml锥形管中混合Entobar （2 ml），丙二醇（4.2 ml），EtOH（1 ml）和ddH 2 O（2.8 ml）。混合物（10.0 ml）含有10 mg / ml戊巴比妥
使用注射器过滤器过滤溶液，并将其保存在室温下带有隔膜的压接小瓶中

致谢

这项工作得到了KBRI基础研究计划（SK的18-BR-01-06拨款）的资助。使用该协议的原始研究论文为（Kojima et al。，2013 and 2018）。感谢塔夫茨大学的MH Kao和J. Ahn 对本文的讨论和评论。

竞争我nterests

作者宣称没有利益冲突。

伦理

由韩国脑科学研究所的动物护理和使用委员会（ID：IACUC-18-00011 ;有效期：4/1 / 2018-3 / 31/2021）审查并批准了对实验动物的护理和治疗。

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