材料和试剂

AmiconUltra-15 10k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC901024）
AmiconUltra-0.5 10k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC501096）
AmiconUltra-15 30k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC903024）
AmiconUltra-0.5 30k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC503096）
AmiconUltra-15 50k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC905024）
AmiconUltra-0.5 50k过滤器（Merck Millipore，目录号：UFC505096）
2号玻璃微管（Maruemu ，目录号：310109）
Neo Micro盖玻片25毫米x 36毫米（松浪玻璃，目录号：25 x 36 1号）
微型盖玻片18 mm x 18 mm（松浪玻璃，目录号：18 x 18 No.1）
双面胶带NICE TACK（Nichiban，NW-10）
0.2 ml管（Nippon Genetics，目录号：FG-021F）
0.6 ml管（Axygen ，目录号：MCT-060-C）
1.7毫升管（Axygen ，目录号：MCT-175-X）
15ml离心管（Nichiryo ，目录号：1930907）
50ml离心管（Nichiryo ，目录号：1910214）
DuraSeal （生物多样化技术，TestTubeSEAL ，1“ x 150'）
Polyprep 色谱柱（Bio-Rad，目录号：731-1550）
cOmplete His-Tag纯化树脂（罗氏，巴塞尔，目录号：5893682001）
pET15-HIS-的sfGFP-心（在构造Kohyama 等人，2019，注1）
pET29-minE-mCherry-His（在Kohyama 等人构建，2019，注1）
三（羟甲基）氨基甲烷（Nacalai Tesque ，目录号：35434-05）
L-谷氨酸钾盐一水合物≥99 ％（HPLC），粉末（GluK ）（Sigma-Aldrich，目录号：G1501）
牛血清白蛋白（BSA）（Sigma-Aldrich，目录号：A6003）
的HiTrap Q HP（GE ħ ealthcare，目录号：17115301）
5'-三磷酸腺苷镁盐（ADP）（Nacalai Tesque ，目录号：00386-54）
L-谷氨酸hemimagnesium 盐四水合物（GluMg ）（Sigma-Aldrich公司，目录号：49605）
异丙基-β-D（-）- 硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）（Nacalai Tesque ，目录号：19742-94）
磷酸二氢钠（NaH 2 PO 4 ）（Nacalai Tesque ，目录号：31737-65）
二-钠氢（钠2 HPO 4 ）（ナTesque公司，目录号：31726-05）
氯化钠（NaCl的）（ナTesque公司，目录号：31320-05）
咪唑（Nacalai Tesque ，目录号：19004-35）
二硫苏糖醇（DTT）（Nacalai Tesque ，目录号：14128-04）
苯甲基磺酰氟（PMSF）（Nacalai Tesque ，目录号：27327-94）
HEPES（Nacalai Tesque ，目录号：17546-05）
甘油（Nacalai Tesque ，目录号：17018-25）
0.5 mol / L EDTA溶液（pH 8.0）（Nacalai Tesque ，目录号：14347-21）
大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIPL（Agilent Technologies，目录号：230280）（注2）
来自细菌来源（ADP）的5'-二磷酸腺苷钠（Nacalai Tesque ，目录号：01652-24）
十二烷基硫酸钠（SDS）（Nacalai Tesque ，目录号：31606-75）
丙烯酰胺（单体）（Nacalai Tesque ，目录号：00809-85）
N，N'- 亚甲基双丙烯酰胺（Nacalai Tesque ，目录号：22407-52）
考马斯亮蓝（CBB）（Nacalai Tesque ，目录号：09409-42）
盐酸（35％）（HCl ）（Nacalai Tesque ，目录号：18321-05）
Pierce BCA蛋白测定试剂盒（目录号：23227）
大肠杆菌提取物极性（Avanti，目录号：100600C）
矿物油（Nacalai Tesque ，目录号：23306-84）
超纯水（MilliQ 水）
氩气
氨苄西林钠盐（Nacalai Tesque ，目录号：02739-32）
硫酸卡那霉素（Nacalai Tesque ，目录号：19860-44）
Bacto 胰蛋白（（BD，货号：211705）
酵母提取物（BD，货号：212750）
琼脂（Nacalai Tesque ，目录号：01028-85）
氢氧化钾（KOH）（Nacalai Tesque ，目录号：28616-45）
无水柠檬酸（Nacalai Tesque ，目录号：09109-85）
β-环糊精（和光化学，目录号：038-08343）
乙醇（Nacalai Tesque ，目录号：14713-53）
LB培养基（参见配方小号）
含抗生素的LB琼脂培养基（请参阅食谱）
磷酸钠缓冲液（pH 7.6）（请参见配方）
HEPES-KOH（pH 7.6）（请参阅食谱）
Tris-HCl（pH 7.6）（请参阅配方）
LS缓冲区（请参阅食谱）
LS-ADP缓冲器（请参阅配方）
WS缓冲区（请参阅食谱）
EL缓冲器（请参阅配方）
存储缓冲区（请参见食谱）
HG缓冲区（请参阅食谱）
IEX-A缓冲区（请参阅食谱）
IEX-B缓冲区（请参阅食谱）
CBB染色液（请参阅配方）
RE缓冲区（请参阅食谱）

设备

AKTA启动（GE Healthcare，目录号：29022094）
Frac30（GE Healthcare，目录号：29023051）
布兰尼松（布兰森，型号：CPX1800H-J）
超声仪模拟系列（布兰森，型号：250）
离心机（久保田，型号：5922）
pH计（HORIBA，带9615S-10D的LAQUA F-52）
倒置显微镜（Zeiss，AxioObserver Z1）带有cMOS相机（滨松光电（Hamamatsu Photonics），ORCA-FLASH4.0 V2）和ScopeLED光源（BioVision Technologies，F系列390/470 / 560P / 640），由micromanager 1.4（R.Vale Laboratory）调节）。滤器立方体购自Thorlabs（用于GFP跟踪的MDF-GFP和用于mCherry 跟踪的MDF-CY3.5 ）
ChemDoc Touch MP（Bio - R ad ，目录号：17001402JA）
涡旋混合器（科学工业公司，型号：Vortex-Genie 2）
-30°C冰箱
-80°C冰箱
高压釜

软件

斐济软件（美国国立卫生研究院，https：//fiji.sc/）

程序

样品制备
His- sfGFP - MinD 和MinE - mCherry -His的表达
转化引入表达质粒。
将100μl 的大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIPL 化学感受态细胞（注2）与1-10 ng pET15b-sfGFP-MinD或pET29-minE-mCherry-His（注1）轻轻混合。
在冰上30分钟。
在42°C下热震1分钟。
再次在冰上冷却。
添加400 微升SOB培养基给细胞，并孵育在37℃进行30分钟。
用100μg / ml氨苄青霉素（对于MinD ）或25μg / ml卡那霉素（对于MinE ）电镀LB琼脂培养基。
在37°C下孵育平板12-18小时。
收集板的单个菌落，并在4 ml LB培养基中接种100μg / ml氨苄青霉素（MinD ）或25μg / ml卡那霉素（MinE ）。
将细胞在LB培养基中于37°C下预培养12-18小时。
将2 ml的预培养物转移到200 ml LB培养基中，其中含有100μg / ml氨苄青霉素（MinD ）或25μg / ml卡那霉素（MinE ）。
当OD 600 达到0.1-0.2（MinD ）或0.6-0.7（MinE ）时，将IPTG添加到1 mM最终溶液中。
进一步在37°C，180 rpm下培养细胞3-4小时（MinD ）或在16°C，120 rpm下培养12小时（MinE ）。
将培养的培养物转移至50 ml离心管中，并通过在4 °C下以8,000 x g离心2分钟收集细胞。
如果此时应停止实验，则除去上清液后，将细胞保存在-80°C。
的His-纯化的sfGFP - MinD的
将表达His- sfGFP - MinD 的储存细胞悬浮在4 ml LS-ADP缓冲液中。
使用Sonifier Analog系列以30％的占空比，输出3 进行超声处理，以破坏细胞30分钟（注3）。
在20,000 xg 在4°C下离心30分钟后，收集被破坏细胞的上清液。
用500混合上清液微升的完全His标签纯化树脂在4℃下30分钟下轻轻转动。
将树脂加载到聚丙烯酸酯色谱柱上。
用25 ml WS缓冲液洗涤上样的树脂。
用2 ml EL缓冲液洗脱目标蛋白。
要将EL缓冲区与具有0.2 mM ADP的存储缓冲区交换，请将洗脱的溶液转移到AmiconUltra-15 30k过滤器中。
加入8毫升的存储缓冲液。
在4°C下以4,000 xg 离心设备。浓缩溶液少于2 ml（通常需要30-60分钟连续离心）。
重复步骤A2i-A2j（共5-6次）。
将浓缩的溶液转移到AmiconUltra-0.5 30k过滤器中。
在4°C下以14,000 xg 离心设备以浓缩小于0.1 ml的溶液（通常需要30分钟）。
通过SDS-PAGE（请参阅CBB染色定量）和二辛可宁酸（BCA）分析（根据制造商的程序）分离后，通过CBB染色估算蛋白质纯度和浓度。
使用缓冲液将纯化蛋白的蛋白浓度调节为100μM ，并在使用前将蛋白存储在-80 °C（注4）。
MinE - mCherry -His的纯化（注释5）
将表达MinE - mCherry -His的细胞悬浮在4 ml LS缓冲液中。
使用Sonifier Analog Series 以30％的占空比（0.3 s ON和0.7 s OFF的周期）进行超声处理以破坏细胞，输出3（每10个周期），持续30分钟（注3）。
在20,000 xg 在4°C下离心30分钟后，收集被破坏细胞的上清液。
用500混合上清液微升的完全His标签纯化树脂在4℃下30分钟下轻轻转动。
将树脂加载到聚丙烯酸酯色谱柱上。
用25 ml WS缓冲液洗涤上样的树脂。
用2 ml EL缓冲液洗脱目标蛋白。
用5至10倍的HG缓冲液稀释洗脱级分。
通过使用AKTA起始液将稀释的溶液应用于用IEX-A缓冲液平衡的HiTrap Q HP色谱柱。
通过使用离子交换协议（基本安装在AKTA中，开始为“ IEX交换”），洗涤装有IEX-A缓冲液的色谱柱，并通过梯度混合IEX-A和IEX-B缓冲液洗脱蛋白质。
通过SDS-PAGE 确定MinE - mCherry -His的峰分数，然后进一步使用这些峰分数。
要用存储缓冲液交换缓冲液，请将洗脱的溶液转移到AmiconUltra-15 10k过滤器中。
加入8毫升的存储缓冲液。
离心设备4 ，000 X 克于4 ℃。集中小于2毫升溶液（通常，30分钟- 需要60分钟连续离心）。
重复步骤A3 m -A3n（共5-6次）。
将浓缩的溶液转移到AmiconUltra-0.5 10k过滤器中。
在4°C下以14,000 xg 离心设备以浓缩小于0.1 ml的溶液（通常需要30分钟）。
估计蛋白纯度，并通过CBB浓度通过SDS-分离后染色PAGE（参见由CBB染色的定量）（根据制造商和BCA测定ř 的过程）。
使用缓冲液将纯化蛋白的蛋白浓度调节为100μM ，并在使用前将蛋白存储在-80°C（注4）。
洗涤BSA
在15 ml离心管中取100〜200 mg BSA。
将10毫升的MQ水加入管中，并涡旋溶解BSA 。
将BSA解决方案转移到AmiconUltra-15 50k过滤器。
在4°C下以4,000 xg 离心设备以浓缩小于2 ml的溶液（通常需要30-60分钟）。
加入8 ml RE缓冲液。
重复步骤A4d-A4e（共5-6次）。
通过在4°C下以4,000 xg 离心将溶液浓缩至不足2 ml 。
将浓缩溶液转移到AmiconUltra-0.5 50k过滤器中。
在4°C下以14,000 xg 离心设备30分钟，以进一步浓缩小于0.3 ml的溶液。
通过BCA测定法估计蛋白浓度（根据厂家专业cture R” s手术）。
使用前（通常为300 -400 mg / ml），将BSA溶液存储在RT的存储缓冲液中。BSA溶液应每月更新一次。
通过CBB染色进行蛋白质定量
负载的样品和稀释系列在12.5％SDS-PAGE凝胶（BSA（200，400，600，800，1000纳克）的由12.5％或随N 1 / 37.5 15％丙烯酰胺，N” - 亚甲基双对的His- 的sfGFP - MinD的或的MinE - mCherry的-His，分别）。
运行SDS-PAGE（通常为20 mA，60分钟）。
在室温下用CBB溶液将凝胶染色30分钟。
在室温下将凝胶浸入水中30分钟，以去除多余的染料
通过ChemDoc touch MP 拍摄CBB染色的凝胶图像。
用斐济软件测量BSA的谱带强度，以构建标准曲线（注6）。
通过测量条带强度并使用标准曲线（注6）来量化足够的负载量。
将数量转换为蛋白质浓度。

脂质液滴内部的自组织测定
脂质油的制备
根据先前的报道（Fujiwara and Yanagisawa，2014），遵循了制备微滴的一般方案。将20 µl 25 mg / ml 大肠杆菌极性脂质提取物（溶于氯仿并在-30°C下储存，总计1 mg）放入圆形玻璃微管（Maruemu 玻璃微管2号）中（图1A，注7））。
干涸在温和的氩气流中的脂质溶液（图URE 小号1B- 1 d，注小号7-9）。
向干燥的脂质膜中加入1 ml矿物油至1 mg / ml（注7）。
用DuraSeal 密封玻璃管。
使用Bransonic 在60°C下超声处理脂管，用矿物油溶解脂质90分钟。
在室温下涡旋超声脂质油1分钟。
将脂质油储存在室温下，并且必须在白天使用。不要在冰上冷藏或存放在冰箱中。
微滴制备
使反应混合物由1 µM（0.58 mg / ml ）His- sfGFP - MinD ，1 µM （0.38 mg / ml ）MinE - mCherry -His，2.5 mM ATP，100 mg / ml洗涤过的BSA在RE缓冲液中组成一个0.2 毫升的试管。
将100μl 的脂油添加到0.6 ml试管中，然后将2μl 的反应混合物倒入脂油中（图2A）。
轻轻敲打试管约10 times 进行乳化（图2B）。

图1.脂质膜的制备。一。圆形玻璃微管中的脂质溶液。乙。带有调节器的氩气。Ç 。干燥步骤。d 。脂质膜。

图2.乳化的代表性结果。一。乳化前。乙。乳化后。

微滴旁的Min蛋白的自组织观察
准备两块盖玻片（我们使用25 mm x 36 mm 和18 mm x 18 mm ）以双面胶带（约90 µm 厚度）作为隔离物来制作盖玻片腔（图3）。
轻轻地将一部分乳液（15μl ）放入盖玻片腔中（注10）。
在室温（约25°C）下，通过荧光显微镜以5-20 s的间隔观察液滴中Min蛋白的自组织化，间隔为5-20 s或更长时间。一般情况下，曝光时间为500 毫秒的博日GFP和mCherry的。通常，最小浪非常稳定，至少持续10小时。因此，我们可以在一个盖玻片腔中观察到许多不同（至少10个）位置的Min 波。代表性的结果显示在视频1中。

图3.用于该方案的盖玻片腔

视频1. Min蛋白在脂质液滴中的波传播。该协议出现了脂质液滴中的最小波的延时图像。绿色表示His- sfGFP - MinD ，红色表示MinE - mCherry -His。视频的链接显示在手稿的末尾。

数据分析

图像分析
敏波涌现及其模式的检验
使用斐济软件打开tiff图像文件。通常使用2 ，048×2 ，048像素，16位，双色通道的sfGFP调心性和地雷的mCherry 和延时堆叠图像。
选择“图像”，“调整”，然后为每个两种颜色的通道单击“重置”按钮（“重置”按钮自动调整对象图像中包括的最小像素强度和最大像素强度之间的对比度）。
如果图像的对比度太低（通常是由于蛋白质聚集引起的高像素强度会导致这种现象），请使用“调整”子菜单手动调整对比度。
运行定时影片并确认是否出现最小蛋白波[ 通常至少以20 s 间隔（总共5分钟）使用至少16个序列图像来判断波形和波形” 。
如下所述，通过His- sfGFP - MinD 的行为将波分为5种模式（行波，驻波，非均质膜定位，均质膜定位和均质胞质定位）。
行波：sfGFP-MinD 沿人造细胞膜连续移动。通常，在1 µM His- sfGFP - MinD 和1 µM MinE - mCherry -His条件下，行波每5分钟移动1.5-2发。
驻波：sfGFP-MinD 交替出现在细胞极的每侧（随机选择极的轴）。通常，表示在1 µM sfGFP-MinD 和1 µM MinE-mCherry 条件下每5分钟2-3发。
不均匀的定位：sfGFP-MinD 不均匀地定位在膜上（通常约占内膜表面积的一半），但并不表示5分钟内有动态运动。
均匀的膜定位：sfGFP-MinD 均匀地定位在膜上并且不移动。
均匀的胞质定位：sfGFP-MinD 均匀地位于液滴（胞质）内部，并且不会移动。
计时机的构造
将图像转换为RGB颜色（选择“图像”“类型”“ RGB颜色”）或将单独的通道（选择“图像”“颜色”“拆分通道”）转换为2个堆栈图像文件。要制作合成图像，应将图像分为两种颜色，并在制作每种颜色的运动记录仪后将其合并。
选择一个人造细胞来构建运动记录仪。
沿使用“椭圆”工具选择的人造细胞的外围绘制一个圆圈（图4A）。
选择“编辑”“选择”“区域到线”以将圆转换为曲线。
选择“编辑”“选择”“拉直”，在“线宽”文本框中输入“ 5”，然后选中“处理整个堆栈”复选框。然后单击“确定”按钮将曲线转换为直线。
选择“图像”，“调整”，“大小”，然后取消选中“约束纵横比”复选框。然后，在“高度”文本框中输入“ 1”，选中“缩小尺寸时的平均值”复选框，然后单击“确定”按钮压缩图像的高度。
选择“图像”“堆栈”“制作蒙太奇”，并在“列”中填入所需的数字“ 1”，在“行”中填入所选图像的时间点数，在“比例因子”中填入“ 1”，“ 1” “”代表“第一片”，所选图像的时间点数代表“最后一片”，“ 1”代表“增量”，“ 0”代表“边界宽度”。
单击“确定”按钮创建一个运动图像。由图像构造的典型运动记录仪如图4B 所示。
要将两个单色运动记录仪合并为一个图像，请选择“图像”“颜色”“合并通道”，然后选择两个图像。然后单击“确定”以制作合成图像。

图4.人造细胞中Min波的运动图构造。A.沿人造细胞外围构造矫正器的拉直过程的代表性插图。B.根据图像构造的运动记录仪的示例。通过2π标度将运动记录仪的宽度归一化。左侧图像中指示的人造细胞数量与运动记录仪编号相对应。

笔记

补充文献中显示了His- sfGFP - minD 和MinE - mCherry - His的序列信息。如果读者有兴趣使用这些质粒，我们准备分享这些质粒。
RIPL菌株可用其他带有（DE3）的菌株代替，例如原始的BL21（DE3）。
该步骤最重要的一点是通过超声彻底破坏细胞。使用其他超声波仪的实验人员应使用典型条件，通过超声波仪破坏大肠杆菌细胞。
不需要快速冻结。
由于MinE的过度表达会导致生长抑制，因此该方案不同于His- sfGFP - MinD的情况。
可以在线获取通过斐济软件（ImageJ）进行的谱带强度测量的教程。例如，https : //www.youtube.com/watch ? v =t9k8HFL88kk，http://www.yorku.ca/yisheng/Internal/Protocols/ImageJ.pdf。
这些步骤在通风室内进行。
因为优选均匀的干燥膜，所以通过缓慢的气流进行慢速干燥（30 s或更多以完成干燥）更好。
氩气可以用其他惰性气体（例如N 2 气体）代替。
我们建议尽快将混合物快速转移到载玻片上，尽管时间与我们测试无关紧要。

菜谱

LB培养基
1克Bacto 胰蛋白酶
0.5克酵母提取物

每1升10克氯化钠

含抗生素
LB培养基的LB琼脂培养基，含1.5％琼脂和100μg / ml氨苄青霉素或25μg / ml卡那霉素
磷酸钠缓冲液（pH 7.6）
通过将它们溶解在超纯水中分别制备300 mM NaH 2 PO 4 和300 mM Na 2 HPO 4
将它们混合以将pH调节至7.6（NaH 2 PO 4 和Na 2 HPO 4的约13:87 v / v比）
制备HEPES-KOH（pH7.6）
1 M HEPES，并通过KOH调节pH
制备Tris-HCl（pH 7.6）1 M Tris，并用HCl调节pH
LS缓冲液
50 mM NaH 2 PO 4 （pH 7.6）
300毫米氯化钠

10毫米咪唑

1 mM二硫苏糖醇（DTT）

0.1 mM 苯基甲基磺酰氟（PMSF）

LS-ADP缓冲器
带有0.2 mM ADP的LS缓冲器
WS缓冲液
50 mM NaH 2 PO 4 （pH 7.6）
300毫米氯化钠

20 mM咪唑

10％甘油

0.1毫米EDTA

0.1毫米PMSF

EL缓冲液
50 mM NaH 2 PO 4 （pH 7.6）
300毫米氯化钠

250 mM咪唑

10％甘油

0.1毫米EDTA

0.1毫米PMSF

储存缓冲液
50 mM HEPES-KOH（pH 7.6）
150 mM 胶

10％甘油

0.1毫米EDTA

HG缓冲液
50 mM HEPES-KOH（pH 7.6 ）
10％甘油

0.1毫米EDTA

IEX-A缓冲液
50 mM HEPES-KOH（pH 7.6）
50毫米氯化钠

10％甘油

0.1毫米EDTA

IEX-B缓冲液
50 mM HEPES-KOH（pH 7.6）
1 M氯化钠

10％甘油

0.1毫米EDTA

CBB染色液每1 L
100 mg CBB ，5 ml乙醇，13.7 g柠檬酸，5 gβ-环糊精
RE缓冲液
25 mM Tris-HCl（pH 7.6）
150 mM 胶

5 毫米葡萄糖

致谢

该研究由JSPS KAKENHI资助号JP16H00809，JP26650044，JP15KT0081，JP15H00826，JP18H04565（授予KF），JP26800219，JP16H00793和JP17K05605（授予NY）资助。我们也很感谢您获得博士学位。庆应义university大学的计划研究补助金授予了SK。此处描述的协议基于先前在Kohyama 等人中发表的研究。（2019）。

利益争夺

作者宣称他们没有利益冲突。

参考文献

Bonny，M.，Fischer-Friedrich，E.，Loose，M.，Schwille ，P.和Kruse，K.（2013）。MinE的膜结合可以全面描述Min-蛋白质模式的形成。PLoS Comput Biol 9（12）：e1003347。
Denk ，J.，Kretschmer ，S.，Halatek ，J.，Hartl ，C.，Schwille ，P.和Frey，E.（2018）。MinE 构象转换使自组织Min蛋白模式具有鲁棒性。PROC国家科科学院科学USA 115（18）：4553-4558。
Fujiwara，K.和Yanagisawa，M.（2014）。使用高渗条件生成在生理细胞内浓度包含生物大分子的巨型单层脂质体。ACS Synth Biol 3（12）：870-874。
Halatek ，J。和Frey，E。（2012）。高度渠道化的MinD转移和MinE螯合解释了强大的MinCDE蛋白质动力学的起源。细胞代表1（6）：741-752。
Huang，KC，Meir，Y. and Wingreen ，NS（2003）。大肠杆菌中的动态结构：MinE环和MinD极区的自发形成。PROC国家科科学院科学USA 100（22）：12724-12728。
S.Kohyama ，N.Yoshinaga ，M.Yanagisawa ，K.Fujiwara 和N.Doi（2019）。细胞大小的限制可控制蛋白质波的产生和稳定性，以调节细胞中的时空。EL IFE 8 ：e44591。
Loose，M.，Fischer-Friedrich，E.，Ries ，J.，Kruse，K。和Schwille ，P。（2008）。细菌细胞分裂的空间调节剂在体外自组织成表面波。科学320（5877）：789-792。
Loose，M.，Fischer-Friedrich，E.，Herold，C.，Kruse，K.和Schwille ，P.（2011）。Min蛋白的模式来自MinE的快速结合和膜相互作用。Nat Struct分子生物学18（5）：577-583。
Rothfield ，L.，Taghbalout ，A.和Shih，YL（2005）。细菌分裂部位位置的空间控制。Nat Rev Microbiol 3（12）：959-968。
大众Rowlett，大众汽车和Margolin，W。（2013）。细菌敏系统。Curr Biol 23（13）：R553-556。
Vecchiarelli ，AG，Li，M.，Mizuuchi ，M.和Mizuuchi ，K.（2014）。MinD和MinE对阴离子磷脂的差异亲和力影响体外Min模式动力学。摩尔微生物学93：453-463。
Vecchiarelli AG，Li，M.，Mizuuchi ，M.，Hwang，LC，Seol ，Y.，Neuman，KC和Mizuuchi ，K.（2016）。膜结合的MinDE复合物充当触发开关，驱动Min振荡耦合到MinD的细胞质消耗。PROC国家科科学院科学USA 113（11）：E1479-1488。
Wu，F.，van Schie ，BG，Keymer ，JE和Dekker，C.（2015）。形状和细菌形状中对称和比例最小的Min蛋白模式。Nat Nanotechnol 10（8）：719-726。
吉田，A.，Kohyama ，S.，藤原，K.，西川，S.和Doi，N。（2019）。通过定义的蛋白质表达系统调节人工细胞中的时空模式。Chem Sci ，10：11064-11072。
Zieske ，K.，Chwastek ，G.和Schwille ，P.（2016）。脂质单层和微滴中的蛋白质模式和振荡。Angew Chem Int Ed 55（43）：13455-13459。
Zieske ，K。和Schwille ，P。（2013）。在微工程化的聚二甲基硅氧烷小室中重建最小蛋白质的极对极振动。Angew Chem Int Ed 52：459-462。