材料和试剂

容量为150毫升的防滴漏瓶（Classic Drinker de Luxe; Zooplus）（见图1）

图1.防滴漏瓶＆nbsp;
动物：使用成年雄性Wistar大鼠（Envigo Laboratories，Barcelona，Spain），11周龄，体重281.2（±2.1）g
过滤和高压灭菌的水
蔗糖（适合人类食用的白糖.AzucareraEspañolaS.A。）
32％蔗糖溶液（见食谱）
4％蔗糖溶液（见食谱）

设备

定时器和天文台（Digital Onstart 100）（图2A）
消费室
矩形（30 x 30 x 15 cm）树脂玻璃盒（图2B）
称重秤（WLC 1 / A2精密天平; Radwag©）（图2C）
个人防护装备（实验室外套，手套，口罩，等。）（图2D）

图2.设备。 A.计时器和计时器。 B.消费室。 C.称重秤。 D.个人防护装备。

程序

＆nbsp;＆nbsp;参见图3了解每日实验程序的时间表。

＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP;＆NBSP;
＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP; ＆nbsp; 图3.每日实验程序的时间表。 *高/低值蔗糖，取决于每个实验组。

在聚碳酸酯标准笼中使每只动物个体化，自由饮水并在受控的标准条件下维持（12小时黑暗/光照循环，从08:00开始，24℃温度和50％-60％湿度）。在整个实验过程中，将食物的动物剥夺到其自由重量的82％-85％。一旦动物达到所需的体重，每天喂食9克（±1.5克）大鼠食物以维持体重。所有操作必须每天在同一时间进行，并且最好由同一个人进行。必须努力减少痛苦并减少实验中使用的动物数量。为了在实验开始前评估动物的体重，重要的是每天称量每个样本并在每个疗程结束后不少于30分钟提供补充食物。此外，蔗糖溶液必须每天新鲜制备，以避免污染。＆nbsp;
cSNC培训每天举行19次会议：16次转发前会议，然后是3次转职后会议。＆nbsp;
在cSNC任务中，至少需要两个实验组。在转移前的会议期间，其中一人可获得大额奖励（例如，32％蔗糖解决方案），另一人获得小奖励（例如，4％蔗糖解决方案）。在转换后的会议期间，两组都接受了小额奖励（4％蔗糖溶液）。
在每次训练之前，必须将动物架移动到进行实验的不同房间，让老鼠在他们的家笼中放置15分钟，然后将它们放置在消耗室中。＆nbsp;
对比期从第一次接触吸管开始持续5分钟。每天平衡瓶子的位置以最小化侧面偏好的影响。在会话结束时将动物放回家笼中。＆nbsp;
每个盒子的会话持续时间可以使用数字时钟手动测量（Digital Onstart 100）。＆nbsp;
记录每个动物在会话之前和之后称量瓶子的蔗糖消耗量，然后使用以下公式将重量转换为毫升（已考虑每种溶液的密度）：消耗的溶液克数/密度（克/毫升）。所有动物每天以4人为一组接受训练，组的顺序在几天内抵消。在每次疗程结束时，必须用湿纸巾擦拭对比室，并根据需要去除粪便。
必须给动物喂食适量的大鼠食物，以在每次训练结束后不少于30分钟保持体重。

数据分析

在cSNC情况下，因变量是每个阶段消耗的蔗糖总量（以毫升计;图4）。
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＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP;＆NBSP;
的＆NBSP; ＆NBSP; ＆NBSP;图4.最后一次换水期（16）和三次换水期（17-19）期间的平均（±SEM）蔗糖消耗量（ml）。 32-4：暴露于奖励贬值的动物从32％降至4在移位后的会话中％蔗糖。 4-4：暴露于未移位的奖赏条件下的动物，在整个实验过程中始终接受4％蔗糖。星号反映了降档和未降档组之间的显着差异。（图片改编自Jiménez-García等人，2016年。）

笔记

消毒室应使用无菌水清洗，以去除任何动物气味。有必要用标准的家用笼式锯末覆盖箱子的地板。不允许食用或饮用水。
对于蔗糖呈现，可以使用带有金属吸管的量筒（0.01ml单位）。
cSNC培训可以减少到每天15次：10次预换班，然后是5次换班。该程序是cSNC实验中的典型方案，因此也是有利的。一些实验已经报道了cSNC效应，具有最小的升档前经验（一次会议：Flaherty 等人，，1983），但不常使用少于10次的预换档会话。选择的最终协议将取决于与感兴趣的问题相关的其他要求。
可以选择使用记录系统（即，相机）。因此，将记录系统放在腔室的侧面。确保动物的口腔区域清晰可见。
磁力搅拌器可用于适当溶解蔗糖。

食谱

32％蔗糖溶液
32克蔗糖（商业白糖）
68克蒸馏水
4％蔗糖溶液
4克蔗糖（商业白糖）
96克蒸馏水

致谢

本文得到西班牙经济和竞争力部（授予PSI-2013-44945-P），JuntadeAndalucía（授予CTS109），FEDER基金以及格拉纳达大学基础与应用神经科学与疼痛硕士课程的部分支持。，西班牙。 MRP的参与得到了富布赖特美国学者奖的支持。根据欧盟指令2010/63 / EU维持动物用于动物实验。我们感谢CTS430小组，尤其是M.Á。萨弗拉，他们的帮助。该协议和数据改编自我们以前的工作（Jiménez-García et al。，2016）。

利益争夺

作者声明没有利益冲突或竞争利益。

伦理

实验方案经格拉纳达大学研究伦理委员会批准。参考：SSA / SIS / MD / jv（有效期为2016年3月31日至31/03/2021）。

参考

Flaherty，C。F.（1996）。激励相对论。剑桥大学出版社，英国：剑桥。
Flaherty，C.F.，Becker，H.C。和Checke，S。（1983）。在蔗糖浓度反复变化的情况下，在完成性行为中反复连续对比。 Anim Learn Behav 11：407-414。
Jiménez-García，A。M.，Ruíz-Leyva，L.，Cendán，C.M。，Torres，C.，Papini，M。R.和Moron，I。（2016）。大鼠奖励贬值引起的痛觉过敏。 PLoS One 11（10）：e0164331。
Manzo，L.，Donaire，R.，Sabariego，M.，Papini，M.R。和Torres，C。（2015）。大鼠抗焦虑自我药疗：奖励贬值后口服氯氮卓和乙醇。 Behav Brain Res 278：90-97。
Ortega，L.A.，Uhelski，M.，Fuchs，P。N.和Papini，M。R.（2011）。前扣带皮层病变后的激励降档恢复受损：情绪或认知缺陷？ Behav Neurosci 125：988-995。
Papini，M.R.，Fuchs，P。N.和Torres，C。（2015）。心理痛苦的行为神经科学。 Neurosci Biobehav Rev 48 ：53-69。
Pellegrini，S.，Wood，M.，Daniel，A。M. and Papini，M。R.（2005）。阿片受体调节从完全连续的阴性对比中恢复。 Behav Brain Res 164（2）：239-249。
Rowan，G.A。和Flaherty，C.F。（1987）。吗啡在完美对比范例中的作用。 Psychopharmacology（Berl） 93：51-58。
Wiech，K。和Tracey，I。（2009）。负面情绪对疼痛的影响：行为影响和神经机制。神经影像 47：987-994。
Wood，M.，Daniel，A。M.和Papini，M。R.（2005）。 δ-阿片受体激动剂DPDPE对完全连续阴性对比的选择性影响。 Behav Neurosci 119：446-454。
Wood，M.D.，Norris，J.N.，Daniel，A.M。和Papini，M.R。（2008）。 U50,488H（κ-阿片受体激动剂）对完全连续阴性对比的试验选择性作用。 Behav Brain Res 193：28-36。
Xie，J.，Bi，Q.，Li，W.，Shang，W.，Yan，M.，Yang，Y.，Miao，D。和Zhang，H。（2012）。疼痛患者焦虑和抑郁之间的正负关系：个体模型分析。 PLoS One 7：e47577。