材料和试剂

显微镜载玻片（Fisher Scientific，Fisherband TM ，目录号：12-550-343）
盖玻片（Fisher Scientific，Fisherband TM ，目录号：12-548B）
铝箔
Drosophila 样品瓶（VWR，目录号：89092-722）
透明聚碳酸酯板（McMASTER-CARR，目录号：85585K25）
塑料漏斗（Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：10-500-3）
聚碳酸酯气缸（McMASTER-CARR，目录号：8585K62
丙烯酸圆筒管（36“长，4”直径）（McMASTER-CARR，目录号：8486K943）
聚苯乙烯称重盘（Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：S67091A）
Drosophila （Bloomington Drosophila Stock Center：https：//bdsc.indiana.edu/）
二氧化碳
Tangle Trap（BIOCONTROL NETWORK，目录号：268941）
矿物油（Fisher Scientific，BioReagents，目录号：BP26291）
FlyNap（Carolina Biological Supply，目录号：173025）
Signa凝胶电极凝胶（Parker Laboratories，SIGNAGEL ®，目录号：15-60）
LysoTracker Green（赛默飞世尔科技，Molecular Probes ®，目录号：L7526）
磷酸盐缓冲盐水（pH 7.0）
VectaShield（Vector Laboratories，目录号：H-1000）
ImageJ（美国马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院）
由实验者制作的飞食（见食谱）
1. Brewer's Yeast（MP Biomedicals，目录号：903312）
2. 蔗糖（Sigma-Aldrich，目录号：84097-5KG）
3. Gelidium Agar（MoorAgar，目录号：41080）
4. 4-羟基苯甲酸甲酯（Sigma-Aldrich，目录号：H5501-5KG）
5. 丙酸（Sigma-Aldrich，目录号：P1386-1L）

设备

电力塔＆nbsp;
1. 40“x 24”胶合板（底座）
2. AC / DC齿轮电动机（W.W.Grainger，型号：1LRA6）
  制造商：Dayton，型号：1LRA6。
3. 刚性轴联轴器（Climax金属制品，型号：ISCC-025-025-S）
4. 12“x 5”x1½“板x 4
5. 12“x 5”x¾“胶合板
6. AC / DC速度控制（Dayton，型号：4Z827）
7. 20 AMP Fuse（Cooper Bussmann，产品编号：286547）
8. 弯曲¾“方管股票
9. 14“x 11”胶合板x 2（平台）
10. 门铰链
11. 抽屉滑块x 4
12. 聚苯乙烯泡沫塑料垫x 2
13. C-Clamp（W.W.Grainger，型号：2HUK2）
  制造商：WESTWARD，型号：2HUK2。
14. Nalgene Unwire试管架x 4（Thermo Fisher Scientific，Resmer TM ，目录号：5970-0013PK）
15. 货架支架x 4
16. 滑板轮
Jaece Identi-plug TM 塑料泡沫塞（Jaece Industies，目录号：L800-B2）
恒温箱
方形矩形网格屏幕（W.W.Grainger，型号：49N590）
制造商：DIRECT METALS，型号：12002E063Y-48X96。
10“Bungee Cord（Home Depot产品管理局，型号：56052）
Bel-Art无线测试管架（SP Scienceware - Bel-Art Products - H-B仪器，目录号：F18745-0004）
可追溯纳米定时器（Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：14-649-83）
环形支架x 2（Eisco Labs，目录号：CH0653E1RD4）
爪夹（Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：05-769-7Q）
链夹x 2（VWR，目录号：21573-275）
三叉延伸夹（Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：05-769-7Q）
孤立的方波刺激器（Phipps＆amp; Bird，目录号：7092-611）
奥林巴斯相机（奥林巴斯，型号：SP-570 UZ）
解剖显微镜（OLYMPUS，型号：SZ61）
荧光显微镜（Leica Microsystems，型号：DMI6000 B）
Hemostat Straight（专业产品，目录号：083X020）

程序

电力塔设置
1. 电力塔组件见图1。有关Power Tower运动的视频，请参阅视频1.
  
  图1. Power Tower在 Drosophila 中启动负地质趋势。 A.电力塔处于静止位置。 Power Tower的下层包含小瓶，泡沫塞被向下推，以防止任何运行。顶层的小瓶泡沫塞子向上，这使得苍蝇可以运行。 B.旋转臂压下杠杆，提升Power Tower平台。当旋转臂释放杠杆时，平台下降，将苍蝇从小瓶的侧面撞到食物上。平台下降后，苍蝇开始爬升。 C.运动组中的苍蝇在他们的泡沫塞上（右）进入机器，而未运动的苍蝇将泡沫塞推下（左）。
  
  视频1.电力塔锻炼设备
2. 电力塔放置在矩形的40“x 24”胶合板上，用C型夹固定在桌子上。一台4.5 RPM Grainger减速电机安装在四个2“x 6”板的顶部，并固定在一个带有三个螺栓的12“x 5”x¾“胶合板顶部。电机，保险丝和速度控制器连接在一个接线盒中，接线盒用两个螺丝固定在四块板的侧面。＆nbsp;
3. 使用两个14“x 11”胶合板制作两个平台。在每个平台上放置两个样品瓶架（每个样品架40个样品瓶; 160个样品瓶/电源塔），并通过每个角落的螺丝将它们固定到位。
  注意：样品瓶架的数量可以增加到三个，以容纳更多的样品瓶。我们已经为我们的一些Power Towers添加了三个样品瓶架，因此可以在其上放置总共240个样品瓶。这允许进行更大的实验，因为可以同时锻炼更多的小瓶。
4. 将弯曲的3/4英寸方管原料连接到胶合板上，弯曲处有门铰链。一个轮子安装在平台下方的管子顶部，允许上面的平台靠着它滚动。＆nbsp;
5. 平台在抽屉滑块上上下滑动，抽屉滑块通过搁板支架连接到胶合板底座。在底部平台的下方，在金属管原料的每一侧放置3英寸厚的聚苯乙烯泡沫塑料垫以缓冲着陆。聚苯乙烯泡沫塑料垫可以通过两侧的两个螺钉固定或粘合到底座上以防止它们移位。
6. 连接到电机的是定制的“S”形旋转臂，另一个车轮连接在一起。带轮子的旋转臂通过Grainger刚性联轴器连接到电机上。
  注意：任何轮子都可以工作。我们发现滑板轮的尺寸，周长和耐用性最好，而不是较小的金属轮。＆nbsp;
7. 当马达打开时，带轮的定制旋转臂将向下推动3/4英寸方管的一侧。这逐渐将平台向上提升到管材的另一端。当旋转臂释放弯曲的原料管时，平台下降到原始位置（视频1）。＆nbsp;
8. 速度可以调整到所需的设置。我们的Power Tower设置为大约每7秒发生一次下降的速度。
9. 风扇用于冷却电机。为了安装风扇，将一个直径为3英寸的孔切成垂直的1/2英寸胶合板。一侧有3英寸风扇连接在胶合板上。在3英寸直径孔的另一侧是一个金属圆筒，它应指向电机。
  注意：我们使用金属圆筒帮助将风扇的冷空气直接聚焦到电机上。
耐力训练协议
1. 使用CO 2 麻醉苍蝇，并为每种基因型收集1,060只雄性。雌性果蝇的运动反应迟钝（Sujkowski et al。，2017），因此雄性更适合评估遗传和药理改良剂。收集到53个小瓶中，每个小瓶包含20只果蝇（图2）。以较低密度分布苍蝇会减少苍蝇对电力塔的响应。为确保年龄匹配，应在三天内收集所有苍蝇。
  注意：需要收集的最小苍蝇数是每种基因型860只苍蝇。然而，在这种情况下，相同的苍蝇将用于训练前疲劳，训练后疲劳和纵向攀爬评估（图2）。
  
  图2.从苍蝇收集到实验评估的工作流程。在耐力训练之前，每个被评估的基因型应收集总共1,060只雄性果蝇。使用雄性果蝇是因为它们比雌性表现出更强壮的运动反应。苍蝇应分为两组，分别运动和未运动，每组有530只苍蝇。经过三周的耐力训练后，在第四周（运动最后一天后一周内）进行训练后评估。致命评估以黑色显示，然后评估对苍蝇是致命的。如果来自纵向攀爬评估的苍蝇也用于疲劳评估，则可以完成所有实验评估，每种基因型只有860只雄性果蝇。
2. 将每种基因型分为两组：运动（实验）和未运动（对照）（图2）。＆nbsp;
3. 在运动之前，将苍蝇翻转到装有新鲜食物的新小瓶中。在用过的食品瓶中留下的苍蝇倾向于对负趋地性诱导的响应降低。当苍蝇被电力塔撞倒并减少伤害时，食物为苍蝇提供更柔软的着陆。
4. 运动和未经处理的苍蝇都被放置在电力塔上。未加工的苍蝇被放置在电力塔上以控制任何非特定的机器效应。为了限制未经处理组中苍蝇的移动，将泡沫塞向下推向小瓶的底部，在食物和泡沫塞之间留下约2-3mm的空间（图1C）。首先在柔软的表面上连续轻敲样品瓶，使小瓶底部的苍蝇。然后，将泡沫塞向下推向样品瓶的底部。以均匀的压力推动塞子中间有助于最小化小瓶侧面的捕获苍蝇。如果苍蝇被困在侧面，请使用钝钳或直式止血钳等工具释放卡住的苍蝇。将塞子拉向小瓶顶部，直到苍蝇脱落，然后重新开始向下推动塞子。＆nbsp;
5. 将锻炼组和未锻炼组放在电力塔上。我们的Power Tower有两层，没有层级依赖效应。将矩形网格屏幕放在样品瓶上，并用弹力绳固定屏幕。打开电源塔，使其达到当天所需的时间（表1）。
  注意：运动训练应在一天的大致同一时间进行。我们尝试尽可能接近开始训练，因为这是苍蝇最活跃的时间。
  
  表1.斜坡式运动训练协议
6. 运动结束后，关闭机器并从电源塔中取出苍蝇。使用钝钳或直的止血钳将泡沫塞子拉到未锻造组的小瓶顶部，然后将苍蝇放回培养箱直到下一个训练日。
7. 将苍蝇保存在25°C培养箱中，12小时/ 12小时光照/黑暗循环。
8. 经过三周的培训后，进行所需的培训后评估，并在最后一个培训日的一周内完成。
  注意：如果在上一个培训日之后超过一周完成，培训后评估的绩效可能会降低。
疲劳评估
1. 疲劳评估测量耐力，并在运动前和训练后进行（图2）。运动后疲劳评估在整整三周的训练后进行。
  注意：收集所有苍蝇后至少48小时进行预疲劳，因为幼蝇的耐力降低（不到两天）。预疲劳的影响不会影响比较，因为来自运动和未锻炼队列的苍蝇都会进行疲劳前疲劳评估。此外，如果苍蝇被用于其他评估，那么他们应该至少休息12小时才能用于其他评估，以确保完全恢复并确保成功的评估不受影响。＆nbsp;
2. 将每个基因型的八只运动和未运动的果蝇翻转到装有食物的新小瓶中。
  注意：在开始疲劳之前计算小瓶中的苍蝇数量。我们从每瓶20只苍蝇开始进行预训练疲劳评估。在运动训练方案中经历一些死亡是正常的。训练后，每个小瓶的苍蝇数量应至少为5.如果数量低于5，则将小瓶合并到n≥5。
3. 将这些样品瓶放在电源塔上并分开以获得最佳观察效果。不要将泡沫塞子推向未锻造组中的小瓶。用弹力绳将长方形网格屏固定在小瓶顶部。＆nbsp;
4. 打开电源塔，锻炼苍蝇直到疲劳。当80％或更多的果蝇已经停止攀爬一小时或更多的小瓶，然后再连续三次跌落之前，小瓶被定义为疲劳。
  注意：如果实验苍蝇的运动缺陷会降低其攀爬能力，则疲劳阈值可能会有所不同。
5. 在保持Power Tower运行的同时从Power Tower移除疲劳的样品瓶并记录样品瓶被移除的时间。小瓶在统计学上作为个体进行处理。
6. 最初，大约每小时监测一次样品瓶。由于小瓶似乎接近疲劳，应该更频繁地检查它们。
  注意：在三周的训练中，苍蝇经历了大量的衰老，因此训练后他们的耐力并不比以前高。但是，它通常远高于未经锻炼的年龄匹配控制。＆nbsp;
7. 我们一式三份地进行这种评估，并寻找重复之间的一般趋势。例如，如果基因型A明显短于基因型B，我们将在连续重复中寻找相同的排名顺序。
  注意：根据我们的经验，为此评估测试的八个小瓶准确地代表了人口的耐力。
航班评估
1. 航班评估由Babcock和Ganetzky（2014年）修改。＆nbsp;
2. 将一个大型铸造丙烯酸管固定在带有链夹的一个环形支架的杆上，并将其竖直放置在地板上。使用环形夹将塑料漏斗固定到第二个环形支架上。将聚碳酸酯圆筒（下落管）固定在杆上，在漏斗上方放置一个三叉延伸夹，并放置在第一支撑架上方的台面上。将下降管的中心与丙烯酸管的中心对齐（图3）。
  
  图3.飞行评估装置。小瓶的苍蝇从设备顶部的圆柱形管中落下。环形支架用漏斗将该管固定到位。当小瓶撞击圆柱形管的底部时，蝇将从漏斗中排出并进入丙烯酸管中，该管保持聚碳酸酯板衬有Tangle-Trap。由于Tangle-Trap，苍蝇将沿着管落地并粘在它们的着陆点上。
3. 切割聚碳酸酯板，使其略长于丙烯酸管的高度。将聚碳酸酯板放在台面上，并在一侧涂上一层薄薄的Tangle-Trap。
4. 将片材卷成圆筒并将其插入丙烯酸管中。
5. 将装有矿物油的聚苯乙烯盘放在大圆筒下方的支撑架上，这将抓住任何不会飞到侧面的苍蝇。
6. 点击一小撮苍蝇，使苍蝇落到小瓶的底部。快速取下泡沫塞，将小瓶倒置，然后将其放入滴管中。苍蝇将落入丙烯酸圆筒管中，本能地飞向两侧，它们会粘在Tangle-Trap上。每组测试8个小瓶。＆nbsp;
7. 取出矿物油。照片中的苍蝇落到了矿物油中。无法飞行的苍蝇会受到审查，以控制Power Tower治疗对机翼的伤害。
8. 从丙烯酸管中取出聚碳酸酯板，并将其固定在白色背景下，底部有一个码棒。
9. 使用数码相机拍摄聚碳酸酯板（我们使用标准的Olympus数码相机）。确保整个纸张在框架中（图4）。
  
  图4.飞行评估照片示例 A.飞行能力决定苍蝇沿聚碳酸酯板落地的位置。使用数码相机捕捉苍蝇的着陆高度，并使用想象软件（如ImageJ）调整图像的对比度，使苍蝇显示为黑点（右图）。 B.（A）中图像上的黑框表示（B）中放大的区域。在分析之前，确认黑点（右）对应于苍蝇（左）。
10. 用镊子从薄片上取下所有苍蝇，重新铺开Tangle-Trap，使其均匀，然后将薄片放回丙烯酸管中。
11. 对剩余的同类群重复步骤D6-D10。
纵向攀登评估
1. 该评估用于检查攀爬速度的纵向下降，并且应该在训练和训练后每周进行三次（图2）。该方法由（Gargano et al。，2005）修改。
  注意：此评估应在当天的运动训练课程之前完成，苍蝇应在评估后返回小组进行培训。＆nbsp;
2. 从每组中随机选择五个小瓶进行评估。
  注意：整个实验过程中将使用相同的五个样品瓶，以准确测量攀爬速度的纵向下降。
3. 将Bel-Art No-Wire机架放在机架背面和侧面的白色背景或胶带白色打印纸上。
4. 将相机放在距离样品瓶架前部20厘米处。在整个实验过程中保持距离一致。＆nbsp;
5. 将五个小瓶的苍蝇从一个小组翻转到五个新的空小瓶中。
  注意：苍蝇在新鲜的小瓶中爬得更好，因此必须每天将苍蝇翻转到新的小瓶中，以便准确测量攀爬速度。
6. 将样品瓶放入样品瓶架的前排，并用胶带将其固定在底部（图5）。每天进行评估时，将相同的样品瓶放在样品瓶架的相同位置。这使您可以跟踪每个小瓶的爬升速度。
  
  图5.纵向攀爬评估。 A.纵向攀爬评估的设置和样本照片。 B.图像（A）的高对比度版本，用于使用ImageJ进行数据分析。
7. 将计时器设置为从2秒开始倒计时。
8. 将样品瓶架向上提起并将其向下撞到桌面上，直到所有苍蝇都落到样品瓶的底部。＆nbsp;
9. 一旦苍蝇落到小瓶底部，就立即启动计时器。
10. 定时器从2秒开始倒计时后立即拍照。
11. 重复步骤E6-E9三次，共计四张图片。＆nbsp;
12. 每个培训日和培训结束后的任何额外天数每天每组4x张照片。将计算每张图片的所有五个小瓶的平均攀爬指数并用于分析。
心脏起搏
1. 心脏起搏是心脏应激抗性的评估（Wessells和Bodmer，2004）。用铝箔覆盖每个末端准备显微镜载玻片。在中间留一个小间隙（约2毫米）并将电线焊接到箔上。将导线连接到隔离方波刺激器上的刺激输出，并将振幅设置为40 V，频率设置为6 Hz（图6）。
  
  图6.心脏起搏设置。显示的是温控滑动支架。滑板通过胶带固定到位。电极焊接到载玻片的顶部并连接到方波刺激器。
2. 将导电胶冻沿箔放置两排，确保胶冻不接触（图7）。三组后更换导电胶，避免接触。
  注意：三组后，建议更换导电胶，避免两排接触。在温度较高的温度下，果冻更容易流动，更容易接触。
3. 用FlyNap麻醉实验苍蝇2分钟。每组将使用100只苍蝇。
  注意：乙醚或二氧化碳不应用于麻醉，因为它们会改变心脏功能。
4. 将苍蝇的腹侧向下放置，使它们的头部排成一排果冻，腹部则位于另一排（图7）。
  注意：为了更好地观察，如果使用倒置范围，苍蝇的腹侧朝上。
  
  图7.在心脏起搏载玻片上放置导电胶冻的苍蝇。导电胶冻接触箔片。导电果冻中间的间隙保证了电流通过苍蝇，从而使心脏踱步。＆nbsp;
5. 将刺激设定为连续并打开方波刺激器30秒。
  30秒后，关闭方波刺激器并使用显微镜（任何放大倍率为10倍的显微镜都能工作），以便在视觉上评分心脏的表现。如果心脏壁未收缩（逮捕）或未同步移动（原纤维化），则心脏评分为失败。如果心脏壁在同步的，有效的收缩（无论速度如何）下跳动，心脏被评分为没有失败。有关完整动物心脏跳动的视频，请参阅视频2.
  注意：幼蝇的失败率约为25％-30％，而较老的苍蝇（3周龄）的失败率约为65％-70％。众所周知，运动有助于保持心脏功能。因此，运动的野生型苍蝇的失败率将低于年龄匹配的未开蝇（Sujkowski等，2015）。
  
  视频2.果蝇心脏跳动
LysoTracker染色
1. LysoTracker染色测量溶酶体活性，其在运动后脂肪组织中增加（Sujkowski et al。，2012）。
2. 我们按照Vogler和Ocorr（2009）的描述剖析果蝇，但我们使用PBS，pH 7.0，而不是人工血淋巴。简而言之，将腹侧向上解剖，暴露脂肪体并去除任何外来组织。快速工作，让样品在室温下放置不超过1小时。
  注意：使用pH值为7.0的PBS对于准确染色是必不可少的。＆nbsp;
3. 在PBS pH 7.0中洗涤1次。
4. 在PBS中将LysoTracker Green稀释至0.01μM，将其应用于样品（解剖的腹部脂肪）并使其静置45秒。
  注意：LysoTracker有不同的颜色，LysoTracker的不同颜色可用于此实验。如果使用不同的LysoTracker染料，用于观察脂肪组织的光的波长必须匹配。
5. 在PBS中洗涤3次。
6. 用附着的脂肪组织取出心脏，然后使用VectaShield将其安装到载玻片上。
  注意：将心脏从胴体中拉出后，脂肪组织很容易被去除。出于这个原因，用脂肪组织拉出心脏比尝试拔出脂肪组织更有效。建议解剖并安装至少10个附有脂肪组织的心脏样本。量化需要至少5个样本。＆nbsp;
7. 图像在500-520nm宽场荧光下滑动，绿色荧光蛋白过滤器为40x（图8）。
  
  图8. LysoTracker染色图像。显示雄性未锻造和运动的野生型蝇的LysoTracker染色的40倍图像。雄性EX图像中的亮绿色斑点表明溶酶体活性增加。比例尺=50μm。＆nbsp;

数据分析

为确保重复性和准确性，建议一式三份重复整个实验和对照，不要直接比较各种重复的数据。相反，寻找在多次重复中具有重要意义的结果。这可以控制可能影响某些评估定量的任何微妙的环境变化。虽然特定测量值的变化是常见的，但重复通常提供相同的排序和统计差异。我们使用ImageJ来分析飞行评估，攀爬评估和LysoTracker染色。 Prism用于分析从ImageJ导出的数据，但可以使用任何统计数据包。

疲劳评估
每个20只苍蝇的小瓶记录为单个基准。每个小瓶达到“疲劳”的时间以分钟记录并被视为事件。将疲劳时间绘制为曲线（有时称为运行曲线）并通过对数秩分析显着性（图9A）。或者，可以使用ANOVA或 t -test在组之间比较平均疲劳时间。
航班评估
与使用ImageJ攀爬相似地分析飞行。拍摄展开的粘性管，苍蝇仍然附着，小心跟踪哪一端向上。使用图片底部的码棒作为参考来设置比例。调整图像的对比度和亮度（图4），以及像素大小和圆度等参数，因此只有苍蝇被检测为数据点。将输出设置为XY坐标以确定苍蝇的着陆高度。将文本文件导出到标准统计程序以进行绘图和分析（图9B）。可以使用单向ANOVA或 t - 测试来执行统计分析，这取决于组的数量。
纵向攀登评估
高对比度照片是分析的最佳选择。调整照片的亮度和对比度，以便ImageJ能够将苍蝇清晰地检测为明亮背景上的暗点（图3）。调整参数，如像素大小和圆度，以便ImageJ将黑点识别为数据点。一旦您确定了它们在照片上的位置，就使用ImageJ来计算苍蝇的XY坐标。数据可以作为文本文件导出到统计程序进行分析。
＆NBSP;我们发现将爬升的高度转换为爬升指数很有用。为了生成这个攀爬指数，我们将样品瓶水平分成四个相等的象限。象限的四分位数值为1到4，小瓶顶部的象限值为4。计算每个象限中的苍蝇数量，乘以四分位数值，然后除以苍蝇总数以生成象限分数。然后将象限分数平均以产生该图片的攀爬指数。我们使用攀爬指数来表示数据以考虑非特定的方差来源（例如，苍蝇沿对角方向移动而不是垂直向上移动小瓶）。
＆NBSP;如果主要目的是研究基因型之间攀爬速度的差异，那么应该使用原始数据（上面的攀爬指数计算）。如果调查攀爬速度的下降，则应使用标准化数据。攀爬指数可以归一化为攀爬前2-4天的平均值。攀爬高度通常会随着年龄的增长而下降，但慢性运动可以减缓与年龄相关的攀爬速度下降（Piazza et al。，2009）。可以将标准化或原始爬升指数绘制为线图中的数据点。使用具有Bonferroni事后校正的双向ANOVA来确定显着性（图9C）。
心脏起搏
在起搏后失败的果蝇百分比报告为失败率百分比。意义由二元变量的卡方检验确定，其中'1'被认为是失败事件，'0'被认为是通过（图9D）。
LysoTracker染色
将图像裁剪到所需的分析区域，并使用比例尺来适当地设置比例。使用阈值函数，使用ImageJ计算所选区域中的斑点密度。调整图像的亮度和对比度，以便能够将绿色斑点检测为数据点。调整像素大小和圆度等参数，以便仅将puncta分析为输出文件中的数据点。确保输出文件可靠地反映照片中溶酶体的外观。使用单因子方差分析或学生的 t - 测试来确定组间的显着性（图9E）。

图9.野外型数据耐力训练后的例子。 A-B。耐力训练的苍蝇运行时间明显更长（ P = 0.0065，n = 160）并且具有比年龄匹配的未经训练的苍蝇更好的飞行能力（ P = 0.0006，n = 160）。 C.训练过的苍蝇的爬升速度增加（ P <0.0001，n = 100）。 D.训练过的野生型蝇对心脏应激的抵抗力增加（ P = 0.02，n = 100）。 E.运动野生型苍蝇LysoTracker后脂肪组织中的斑点数量增加（ P <0.0001）。

笔记

耐力训练响应：可以对渐变训练方案进行修改，但训练响应的程度可能因任何修改而有所不同。饮食，温度，细菌感染，遗传干预和机器上的时间都是影响运动适应性的因素，可能会影响训练反应。此外，各种遗传背景在不同程度上对耐力训练作出反应。为了获得最佳的训练反应，我们建议苍蝇是健康的，没有任何细菌感染，并且如果在训练期间细菌或真菌在小瓶中可见，则中止实验。

食谱

飞食
10％酵母
10％蔗糖
2％琼脂
0.1％丙酸
0.1％4-羟基苯甲酸甲酯
注意：饮食的变化可能会改变运动反应。

致谢

我们要感谢Tinkerhess et al。（2012a），Babcock和Ganetzky（2014），Gargano 等。（2005），以及Wessells和Bodmer（2004），他们的工作被修改以分别产生耐力协议，飞行评估，纵向攀爬评估和心脏起搏。这项工作得到了NIH / NIA的支持（R21 AG055712-01至R.W.）。

利益争夺

我们没有利益冲突申报。

参考

Babcock，D。T.和Ganetzky，B。（2014）。一种改进的方法，可准确，快速地测量果蝇的飞行性能。 J Vis Exp （84）：e51223。
Booth，F.W.，Ruegsegger，G.N.，Toedebusch，R.G。和Yan，Z。（2015）。耐力运动和骨骼肌代谢调节。 Prog Mol Biol Transl Sci 135：129-151。
Ciolac，E.G。（2013）。运动训练作为与年龄有关的疾病的预防工具：简要回顾。 Clinics（圣保罗） 68（5）：710-717。
Gargano，J。W.，Martin，I.，Bhandari，P。和Grotewiel，M。S.（2005）。快速迭代阴性趋地性（RING）：一种评估的年龄相关运动衰退的新方法>果蝇。 Exp Gerontol 40（5）：386-395。
Piazza，N.，Gosangi，B.，Devilla，S.，Arking，R。和Wessells，R。（2009）。年轻 Drosophila melanogaster 的运动训练可减少年龄相关的行动能力下降和心脏表现。 PLoS One 4（6）：e5886。
Sujkowski，A.，Bazzell，B.，Carpenter，K.，Arking，R。和Wessells，R。J.（2015）。耐力运动和长寿选择育种通过重叠机制扩展 Drosophila healthspan。老龄化（奥尔巴尼纽约） 7（8）：535-552。
Sujkowski，A.，Ramesh，D.，Brockmann，A。和Wessells，R。（2017）。章鱼胺可以改善 Drosophila 的耐力运动适应性。 Cell Rep 21（7）：1809-1823。
Sujkowski，A.，Saunders，S.，Tinkerhess，M.，Piazza，N.，Jennens，J.，Healy，L.，Zheng，L。和Wessells，R。（2012）。 dFatp调节果蝇的营养分布和长期生理学。老化细胞 11（6）：921-932。
Tinkerhess，M。J.，Ginzberg，S.，Piazza，N。和Wessells，R。J.（2012a）。 Drosophila melanogaster 的耐力训练方案和纵向性能分析。 J Vis Exp （61）：3786。
Tinkerhess，M。J.，Healy，L.，Morgan，M.，Sujkowski，A.，Matthys，E.，Zheng，L。和Wessells，R。J.（2012b）。 Drosophila PGC-1α同源物spargel调节耐力运动的生理效应。 PLoS One 7（2）：e31633。
Vogler，G。和Ocorr，K。（2009）。可视化果蝇中的跳动心脏。 J Vis Exp （31）：1425。＆nbsp;
Wessells，R。J.和Bodmer，R。（2004）。对果蝇中心脏功能突变体的筛选分析。 Biotechniques 37（1）：58-60,62,64 passim。
Wilson，M.G.，Ellison，G.M。和Cable，N。T.（2015）。运动对心血管益处背后的基础科学。 Heart 101（10）：758-765。