材料和试剂

组织纸
注意：动物可能会在围栏内排尿或排便。框架玻璃面板上发现的任何液体都应立即进行清洁，因为这可能会影响玻璃面板的导热性。
消毒剂清洁溶液（例如，70％乙醇）
每次使用消毒液清洗液，以清除动物的气味，尿液和/或粪便
动物
注意：每个动物菌株的活动水平可以极大地影响测试，因为需要执行适当的足底放置爪以进行可靠的测试。对于选择哪种菌株，应在实验开始前的一周内对外壳进行习性，以使动物适应该设置以及进行基线读数。

对于老鼠来说，更温和的Lewis菌株对于测试来说可能是理想的，因为它们与其他菌株相比具有最小化的趋势，但是在测试期间它们可能会入睡，导致延迟反应。另一方面，更有活力的Lister-Hooded菌株可能移动太多，因此使测试难以和/或潜在地使结果无效。 Sprague Dawley大鼠具有中度活动水平的倾向，因此是该测试的另一个理想的应变
对于小鼠，C57BL / 6株通常比其他菌株如BALB / c更具活性。更有活力的菌株可能会随着测试难以进展，尽管足够适应测试设备，但可以使用任何菌株。

蔗糖/食品颗粒
可选：将少量（〜5-10）的蔗糖/食物颗粒饲喂动物可能有助于减少其外壳中的动物的运动和平静。

设备

Hargreaves测试（Ugo Basile，目录号：37370或Harvard Apparatus，目录号：72-6692）
一整套Hargreaves测试应包括以下组件（图1-3）：
1. 控制器
  用于操作诸如红外线强度，反应时间显示和电源输入端口等测试设置
2. 发射器/检测器容器
  使用连接到控制器的光纤电缆进行红外发射和爪子运动检测
3. 框架玻璃面板
  为了获得最佳的导热性，玻璃面板应保持清洁，防止损坏
4. 动物围栏
  大：一次最多可容纳6只老鼠小：一次最多可容纳12只小鼠
5. 大平台
6. 支持栏
  
  图1. Hargreaves测试的完整设置
  
  图2. Hargreaves测试控制器和发射器/探测器容器
  
  图3.动物围栏大型围栏最多可容纳6只大鼠，每个隔间有一只动物，而小外壳可容纳12只小鼠。
程序

注意：以下所有动物手术均按照1986年英国动物（科学程序）法进行。请在开始协议之前查阅本地/国家规定。
1. 选择一个适合行为评估的房间。
  注意：外部刺激如环境中的噪音和振动会引起动物的焦虑。如果他们害怕，他们可能会表现出过度的运动，如果他们受到惊吓，就会冻结。在任何一种情况下，这将使测试困难进行。建议选择一个平静安静的房间进行测试，最好在测试过程中没有任何中断的地方。
2. 设置如图1所示的设备。
3. 将动物习惯于测试室。
4. 执行Hargreaves测试。
  建议在开始实验之前获得基线读数。该步骤还允许实验者优化每个特定实验和动物菌株的测试。
数据分析

引出撤回响应所需的时间量称为撤回延迟，以秒为单位。更长的提款延迟表示较慢的提款响应，反之亦然。为了获得动物的平均反应时间，从至少3次试验中计算平均值。如果进行了5次试验，则最低和最高值可以作为离岸价值打折扣。为了获得具有一只动物的一组动物的数据点代表n = 1，计算组中动物的平均反应时间的平均值。如果在不同的实验条件或时间点上重复测试同一组动物，则应使用配对或重复测量统计检验来确定统计学显着性。通常，低于0.05的 P 值被认为具有统计学意义。代表性资料如下（图7）

图7.代表性的Hargreaves测试数据，用于成年Lewis大鼠，其经历左前爪或假手术的四重（C5-C8）背根压伤。在术前和实验一周记录基线读数手术后1-8周每周记录一次。与假手术组相反，手术后一周需要较长时间（以秒为单位）从受伤组引出戒断反应，并且在实验持续期间持续表明慢性热痛感觉缺陷。通过重复测量方差分析来分析数据，表示为平均值±SEM，* P < 0.05有统计学意义，n = 4。

笔记
1. 重要的是，实验者在测试期间密切观察动物，以确保它们不会自动移动它们，因为它们是自动移动的，而不是对热的反应。如果发生这种情况，特定的试验应该被废除，因为观察到的撤回反应可能不会响应热量。哈格里夫装置本身不能区分运动是由于热还是自愿的。典型的由于热量引起的戒断反应应伴随动物检查或舔其爪子。
2. 在动物福利方面，请妥善处理动物。受Hargreaves试验影响的动物可能由于诸如注射高痛药物作为实验的一部分而引起的热痛感过敏，或者由于以前受到外周或中枢神经系统损伤而引起的疼痛感减轻。在疼痛感减轻的情况下，应设置一个截止点（推荐：20秒）以进行测试，以免动物遭受潜在的烧伤。
致谢

M.R.A.得到了生物技术与生物科学研究理事会（BBSRC）的研究资助。 J.W.F.得到欧盟/捷克教育部 - 行动计划研究部（CZ.02.1.01 / 0.0 / 0.0 / 15_003 / 0000419）的资助。

参考