材料和试剂

Hamilton注射器，50μl容量，用30号钝端固定的1/2英寸针（Hamilton，目录号：80608），
1ml结核菌素（TB）注射器（Benton Dickenson，目录号：309625）
伤口夹（Becton Dickinson，目录号：427631）
动物：8-12周龄雌性免疫受损小鼠
注意：NSG，NOD scidγ[NOD.Cg-Prkdcscid II2rgtm1Wj1/SzJ（HE JACKSON LABORATORY，目录号：005557）]。或者，SCID /米色小鼠（Fox Chase SCID Beige CB17.Cg-PrkdcscidLystbg-J/Crl）可以仅用于注射DCIS细胞系。虽然尚未进行形式比较，但患者衍生的DCIS上皮细胞在NSG小鼠中似乎更有效地生长。
在单个细胞中感兴趣的细胞[即EM细胞系MCF10DCIS.COM和SUM225（Behbod Lab，2009＃329）或患者来源的DCIS上皮细胞]
PBS（pH 7.4,1×），无菌（Life technologies，目录号：10010023）
注意：目前，它是"Thermo Fisher Scientific，目录号：10010023"。
无菌的台盼蓝（Sigma-Aldrich，目录号：T8154）
70％乙醇
无菌水
Nembutal钠溶液（戊巴比妥钠注射液，USP）（Akorn，Oak Pharmaceuticals，目录号：NDC 7647850120）
Ketofen ^TM（Ketoprofen）（Patterson Veterinary Supply，目录号：10004029）

设备

剪刀小号适合小鼠
Sharp-Blunt（Fine Science Tool，目录号：14028-10）
Castroviejo弹簧剪刀（Fine Science Tool，目录号：15017-10）
球形剪刀（Fine Science Tool，目录号：14086-09）
快船（Fine Science Tool，目录号：1501710）
圆头平头手柄镊子（ROBOZ，型号：RS5095）
弹簧剪（Fine Science Tool，目录号：1501710）
球形剪刀（Fine Science Tool，目录号：1408609）
圆头镊子（Fine Science Tool，目录号：1105210）
大鼠牙镊（Fine Science Tool，目录号：1105310）
施夹器（Becton Dickinson，目录号：427630）
热垫（Sunbeam Products，型号：PN126985900）
夹子去除剂（Becton Dickinson，目录号：427638）

程序

准备注射用细胞
1. 重悬细胞在PBS与0.04％台盼蓝。对于细胞系，最终 ?浓度应为5,000-10,000个细胞/μl。对于原代细胞浓度应为12,500-17,500个细胞/μl。台盼蓝会表示注射后管道内存在细胞程序。
2. 确保所有仪器已灭菌， Hamilton注射器通过交替地提起无菌水和70％酒精，以无菌水结束。
准备手术小鼠
1. 称重鼠标。
2. 使用1 ml TB注射器，给予Nembutal 40μg/g腹膜内（这将提供1小时的镇静）。
3. 等待鼠标入睡;通过捏脚检查后肢反射来确认。
4. 使用剪刀刮削腹部暴露腹股沟乳头，并注意不要割伤他们
5. 使用1ml TB注射器，施用5mg/kg的Ketofen TM（酮洛芬）腹膜内用于缓解疼痛。
6. 将鼠标放在手术板上，用手术胶带固定四肢。
7. 用70％酒精消毒腹部。
手术
1. 切断腹股沟腺的乳头的尖端，使注射器可以直接插入通过乳头。使用圆角端 ?平面手柄镊子，以保持皮肤下的乳头，并强迫它突出。使用弹簧剪刀剪掉顶部0.5mm处乳头。注意不要取出太多，否则注射器会滑下 ?皮。正确切割的乳头将具有火山锥形状
2. 使用球形剪刀，在腹部做一个倒Y形切口开始于腹股沟乳头下方的中线向上延伸约1英寸。切口的另外两个切口应该在两侧和第四和第五接头之间延伸。
3. 使用圆端镊子和大鼠牙镊，分离皮肤 ?覆盖腹股沟乳腺脂肪垫以暴露腹股沟
4. 使用Hamilton注射器，吸取两微升PBS（含有 0.04％台盼蓝），含有适当浓度的细胞;保持 ?皮肤瓣向上，将注射器的尖端插入乳头90° ?角度到皮瓣，仔细注射细胞。台盼蓝色将使注入的液体在管道中可见。
5. 重新放置皮瓣和缝合用伤口夹。
  
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  视频1.导管内注射
  
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手术后
1. 允许小鼠在最低设置的热垫上恢复。
2. 24小时后腹膜内给予酮托芬^TM 5mg/kg
3. 7-10天后移除剪辑。

致谢

该协议是在贝勒医学院分子和细胞生物学系以及堪萨斯大学医学院病理和实验室医学系发展起来的。我们感谢David Edwards在制作过程视频方面的帮助。该工作由NCI（1K99/R00CA127462）到FB和NCI（1K22CA160587-01A1）到KV支持。

参考文献

Behbod，F.，Kittrell，FS，LaMarca，H.，Edwards，D.，Kerbawy，S.，Heestand，JC，Young，E.，Mukhopadhyay，P.，Yeh，HW，Allred，DC，，Polyak，K.，Rosen，JM和Medina，D。（2009）。导管内人类小鼠移植模型模拟导管原位癌的亚型，/em>。乳腺癌研究 11（5）：R66
Valdez，K.E.，Fan，F.，Smith，W.，Allred，D.C.，Medina，D.and Behbod，F。（2011）。人类原发性导管原位癌（DCIS）亚型特异性病理是保存在小鼠管内（MIND）异种移植模型中。 Pathol 225（4）：565-573。