材料和试剂

每个开关灭菌Erlen-Meyer瓶
每个开关0.45μm滤光器（Minisart0.45μm滤光器）（Sartorius AG）
每个开关塑料适配器（Tube versilic 4 x 7 mm）（Saint-Gobain或同等产品）
无菌注射器5ml（Terumo Medical Corporation）
条件1的微生物培养
生长条件2的培养基

设备

摇床孵化器
分光光度计和比色皿

程序

图1.切换实验过程

在孵化器中，预热一个空的5ml注射器，两个5ml注射器充满3ml条件2培养基，烧瓶装有30ml条件2培养基，以及在喷嘴上带有塑料适配器的过滤器。在该步骤中必须保持介质的无菌性。
用空的注射器（针内径：0.8mm），在条件1下来自原代培养物的样品细胞注意：
1. 音量取决于两个因素。（i）必须使其最大化在条件2烧瓶中洗脱时的吸光度可以重复在步骤6测量（例如，在OD 600nm = 3时2ml大肠杆菌培养物 ?在原代培养物中提供可测量的OD 600nmλ= 0.2 继代培养）。（ii）必须尽量减少，以避免堵塞在第3步过滤。
2. 从步骤2开始，操作必须尽可能快地执行以使培养物摄动最小化 ?（即在小于2分钟内）。作为一个控制，我们建议执行相同 ?通过用条件1代替条件2培养基并确保实验在次级培养中的初始生长速率等于原代培养物的生长速率。
将过滤器连接到填充有3ml预热条件2培养基的注射器，并冲洗过滤器上的细胞（流出物被丢弃）。
用装有3 ml预热条件2培养基的两个注射器之一更换注射器，并用培养基2冲洗过滤器上的细胞。
使用塑料适配器将填充有3ml预热条件2培养基的第二个5 ml注射器连接到过滤器的另一端。
将细胞洗脱在装有30ml条件2培养基的烧瓶上。
将烧瓶置于摇床培养箱中1分钟，以确保溶液的均匀性，并测量初始OD。立即将烧瓶放回培养箱。
当条件2（通过试验标准化）细胞达到其最大生长速率时，再次监测次级培养物的生长。例如，切换 E。大肠杆菌从葡萄糖到基于乙酸盐的矿物质培养基中培养，需要在OD 600nm处通过分光光度法接种后60和90分钟时测量OD（Enjalbert et al。 >，2015）。在60分钟的测量允许计算滞后（参见步骤8），并且在60和90分钟之间的生长速率的计算确保细胞达到其最大生长速率（条件2中的该最大生长速率必须预先确定）。
使用以下公式计算最大生长前的滞后时间（参见图2的对齐）：
（t sub-t m）=（t 1 -t -t 0）-In（X sub-1） 1 /X ₀）/μ_max

图2.用于计算切换实验中的滞后的理论生长曲线 t是从X 0增加生物质所需的理论时间，如果生长速率从t 0开始是最大的（μ），则将其设置为X <1>。如果存在延迟，则将在t sub1（，即晚于t sub ）获得X sub1 。从这些元素，滞后可以被确定为（t 1 -t -t m）。

按照定义，
公式1：μsub max = sub（X sub/X sub）/（t sub） 0 ）
从中
等式2：（t sub-t sub）= ln（X sub/X sub）/μ_max
因为
方程3：（t 1 -t 1 m）=（t 1 -t 1 0） - （t _m -t ₀）
从Eq3和Eq2，
方程41：（t 1 -t 1 m）=（t 1 -t 1 0） - ln（X 1） sub> 1 /X ₀）/μ_max

致谢

BE椅子由INRA（国立农业研究所）和INSA（国立科学研究所应用物品研究所）（ chaire d'excellence > ）。我们感谢皮埃尔·米勒德，亚历山德拉·丰塔纳和安德烈·贝卢拉提他们的价值贡献。

参考文献

Enjalbert，B.，Cocaign-Bousquet，M.，Portais，J.C.and Letisse，F。（2015）。乙酸暴露决定了大肠杆菌在葡萄糖醋酸盐中的二氢化作用transition。 197（19）：3173-3181。