材料和试剂

Superfrost plus显微镜载玻片（Thermo Fisher Scientific，目录号：12-550-17）
盖玻璃（Thermo Fisher Scientific，目录号：12-545-88）
组织样品
Fluor-Jade B（Merck Millipore Corporation，目录号：AG310）
多聚甲醛（Electron Microscopy Science，目录号：19210）
高锰酸钾（KMnO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：223468）
DAPI（Life Technologies，目录号：D3571）
注意：目前，"Thermo Fisher Scientific，Molecular Probes ^TM ，目录号：D3571"。
冰乙酸（CH 3 CO 2 H）（Sigma-Aldrich，目录号：A9967）
乙醇
二甲苯（Sigma-Aldrich，目录号：534056）
氢氧化钠（NaOH）（Sigma-Aldrich，目录号：S8045）
十水合四硼酸钠（Sigma-Aldrich，目录号：B9876）
氯化钠（NaCl）（Sigma-Aldrich，目录号：S3014）
磷酸二氢钾（K 2 HPO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P3786）
磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P9791）
4％多聚甲醛（见配方）
KPBS（请参阅配方）
0.2％氟玉（见配方）
Fluoro-Jade解决方案（参见配方）
0.2％DAPI（参见配方）

设备

程序

在superfrost plus载玻片上安装组织切片（在切片机或低温恒温器上切割20-35μm），让载玻片在真空下干燥过夜。
固定组织在幻灯片加热30分钟在60℃和/或20分钟在多聚甲醛4％
在KPBS后2分钟。
注意：以下所有步骤都是在室温下进行。
在50％-70％-100％乙醇中脱水2分钟。
通过回到70％-50％乙醇和KPBS中再水合，每次2分钟。
在室温下在高锰酸钾中孵育0.06％（在水中稀释）5分钟。
在水中冲洗1分钟。
在氟 - 玉溶液中在室温下孵育10分钟并在定轨振荡器上轻轻摇动或通过在孵育期间进行几次浸渍（孵育期间三次浸泡几秒钟3次）。使用不透明的杯子为氟玉孵化，并保持幻灯片在避难所从光为其余的程序。
注意：氟玉溶液和高锰酸钾0.06％必须新鲜制备。
随后在水中漂洗三次，每次1分钟
在室温下在真空下干燥载玻片过夜
清除二甲苯中的幻灯片（3 x 2分钟）。
在显微镜分析前，用DPX盖住玻片并在罩下干燥24-48小时

图1.用于孵化和/或在不同解决方案中浸渍幻灯片的设置示例

代表数据

图2.缺血性中风后小鼠大脑皮质中的FJB阳性神经元

笔记

为了确保方案之间的重现性，使用相同的组织制备方法。

食谱

致谢

该协议改编自Schmued等人（1997）。这项工作得到加拿大健康研究所（CIHR）和加拿大多发性硬化症科学研究基金会的资助。

参考文献

Anderson，K.J.，Fugaccia，I.and Scheff，S.W。（2003）。 Fluoro-Jade B在啮齿动物脊髓中染色静止和反应性星形胶质细胞。 J Neurotrauma 20（11）：1223-1231。
Damjanac，M.，Rioux Bilan，A.，Barrier，L.，Pontcharraud，R.，Anne，C.，Hugon，J。和Page，G。 Fluoro-Jade B染色作为在阿尔茨海默病小鼠转基因模型中鉴定活化的小胶质细胞和星形胶质细胞的有用工具疾病。 Brain Res 1128（1）：40-49
Schmued，L.C.，Albertson，C。和Slikker，W.，Jr。（1997）。 Fluoro-Jade：一种用于敏感和可靠的神经元变性的组织化学定位的新颖荧光染料。 Brain Res 751（1）：37-46。