材料和试剂

将雄性白化Wistar大鼠（250-270g）

设备

玻璃槽（44 x 33 x 30厘米）
塑料管（21×6cm，直径6cm）
个人笼（47 x 32 x 20厘米）
冷室或冰箱（4℃）

程序

本协议中使用的应激计划列于表1中。应激每天在不同的时间开始，以最小化其可预测性（从上午8:00到下午8:00）。

表1.慢性变应性压力治疗期间使用的紧张性刺激计划
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日    压力            时间
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1     强迫游泳 10分钟
2     约束                   3小时
3 水剥夺   24小时
4     在4°C下保持      90分钟
5 隔离                   24小时
6 食物剥夺     24小时
7     水剥夺    24小时
8 在4°C下保持      2 h
9 食物剥夺     24小时
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第一天：强迫游泳

在23±2℃下用22厘米深的水填充玻璃罐（图1）。
将动物放在玻璃罐中10分钟。而动物是游泳它可能会试图离开坦克，所以防止逃脱它可能必须用厚盖子仔细关闭它
将动物放回干净，干燥的笼子里，新鲜的床上用品，以避免寒战和感冒

图1.典型的装满冷水的玻璃槽的图片

第2天：约束

将动物放在21 x 6厘米的塑料管; 用塑料调整胶带在外面，所以动物不能移动（图2）。管子必须在远端有一个6厘米的孔，以允许定期呼吸。至将动物放置在塑料管中，必须放置头部的动物靠近入口，之后它应该进入本身（图3）。

图2.带有胶带和动物的管子的图片

图3.显示使用塑料管的约束程序的图片
等待3小时。虽然塑料管应该足够防止动物出来是需要离开防盗器内部。
将动物回到笼子里。最好的方法提取动物是使突然向下运动，放下它进入笼子。尽量避免从尾部拉扯。

第3天：水剥夺

在24小时内从笼子里取出一瓶水。如果动物房子是由工作人员监督，表明水/食物不能在该笼中更换
在到达时间点后将瓶子放回去。

第4天：在4℃下保持

将动物放在上述塑料管中。
放置管与动物在冷室或冰箱在4°C 90 min。冷是一种良好记录的应激源（Krishnamurthy等人，2011）。因此，有必要找到一个具有这些特征的地方动物在。
将动物在室温下放回笼子。

第5天：隔离

将动物单独放在一个新的笼子里。
将动物送回笼子与他们的伴侣。

第6天：食物剥夺

从笼子里取出食物24小时。
将食物放回。

第7天：水剥夺

从笼子中取出水箱24小时。
将瓶子的水倒回来。

第8天：在4℃下约束

将动物放在上述塑料管中。
放置管与动物在冷室或冰箱在4°C 2 H。已经观察到，在第一冷环境暴露之后，在4℃下90分钟没有足够的时间来达到足够的应力水平，这就是为什么在4℃下2小时更方便。
将动物在室温下放回笼子。

第9天：食物剥夺

从笼子里取出食物24小时。
把食物放回去。

代表数据

应力模型的验证：前额叶皮层中皮质酮和多巴胺（DA）和3,4-二羟基苯基乙酸（DOPAC）水平的身体和肾上腺重量，血液水平的变化是应激的典型效应，并且使用作为评估应力模型的方法。使用这种慢性变应激方案，动物的体重减少，而肾上腺重量和皮质酮的血液水平增加（图4）。还已经发现，观察到前额皮质中多巴胺和DOPAC的水平增加（表2）。
关于再现性和变异性的注意：压力感知是非常主观的，并且每个动物，正如每个人，被强调到不同程度。因此，结果呈现一些变化是正常的。为了避免这种情况，推荐葡萄糖偏好试验（Hu et al。，2010）;那么，只有实际上受压迫的动物必须包括在研究中。

表2.对照和强调大鼠脑皮层中的DA和DOPAC量

在处理后的不同时间点（分别为0,2,4,8和10天）处死动物，收获前额皮质，并通过HPLC进行DAOP和DOPAC定量，如de Pablos et al。（2006）。数字表示为每克湿织物的纳克数，并且是五次独立实验的平均值±SD。与对照动物相比，* p <0.05，** p <0.01，统计学显着性（Student's t检验）。

图4. A。体重增加（g）; B.肾上腺重量（mg，条）和肾上腺重量和体重增加之间的比率（散点图和线）。 C.血清皮质酮（对照动物的百分比）。统计意义：在C和10天变异应激（S10d）之间比较的Student's 试验; *，p < 0.05; **，p < 0.01; ＃，p < 0.01（对于肾上腺重量/体重增加的比率）。单因素方差分析，随后是多范围比较的LSD事后检验，p < 0.01; *，与对照相比; a，与先前时间点（S1d至S10d指示经受变化应力的天数）相比。

致谢

慢性可变应激来自其他可变应激模型（Gamaro等人，2003; Konarska等人，1990; Murua和Molina，1992; Muscat et al。，1992; Papp et al。，1991; Willner et al。，1987），其具有显着的修饰。这项工作得到了来自西班牙经济和竞争力部的SAF-2012-39029和P10-CTS-6494（安达卢西亚安达卢西亚的Proyecto de Excelencia）的支持。

参考文献

Cryan，J.F。和Holmes，A。（2005）。鼠标的上升：建模人类抑郁症和焦虑的进展。 Rev Drug Discov 4（9）：775-790。
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de Pablos，R.M.，Herrera，A.J.，Espinosa-Oliva，A.M.，Sarmiento，M.，Munoz，M.F.，Machado，A.and Venero，J.L。（2014）。慢性应激增强小胶质细胞活化，并加重黑曲霉多巴胺能神经元在炎症条件下的死亡。 J Neuroinflammation 1 1：34.
de Pablos，R.M.，Villaran，R.F.，Arguelles，S.，Herrera，A.J.，Venero，J.L.，Ayala，A.，Cano，J.and Machado，A。（2006）。压力增加了大鼠前额叶皮层炎症的易感性。 J Neurosci 26（21）：5709-5719。
Gamaro，G.D.，Manoli，L.P.，Torres，I.L.，Silveira，R。和Dalmaz，C。（2003）。慢性变异压力对不同大鼠脑结构中的摄食行为和单胺水平的影响。 Neurochem Int 42（2）：107-114。
Hu，H.，Su，L.，Xu，Y.Q.，Zhang，H.and Wang，L.W。（2010）。在大鼠慢性轻度应激模型中的行为和[F-18]氟脱氧葡萄糖微正电子发射断层扫描成像研究 Neuroscience 169（1）：171-181。
Konarska，M.，Stewart，R.E.and McCarty，R。（1990）。慢性间歇性压力的可预测性：对实验室大鼠的交感神经肾上腺髓质反应的影响。 Behav Neural Biol 53（2）：231-243。
Krishnamurthy，S.，Garabadu，D.，Reddy，N.R。和Joy，K.P。（2011）。超低剂量的利培酮通过调节应激途径来保护啮齿动物冷冻抑制模型中的应激。 a> Neurochem Res 36（10）：1750-1758。
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Muscat，R.，Papp，M。和Willner，P。（1992）。通过非典型抗抑郁药，氟西汀和马普替林来逆转压力诱导的快感缺乏。 Psychopharmacology（Berl） 109（4）：433-438。
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Willner，P.，Towell，A.，Sampson，D.，Sophokleous，S.and Muscat，R。（1987）。通过慢性不可预测的轻度压力降低蔗糖偏好，并通过三环抗抑郁药恢复。 Psychopharmacology（Berl） 93（3）：358-364。