材料和试剂

新鲜收获的链霉菌孢子在水中
大豆粉（来自当地超市）
D-甘露醇（Sigma-Aldrich，目录号：63560）
琼脂（Kobe I）（Roth北美）
3-（N-吗啉代）丙磺酸（MOPS）缓冲液（Roth North America）
氯霉素（Merck KGaA）
氢氧化钠丸（Roth North America）
MOPS缓冲区（参见配方）
SFM琼脂（见配方）

设备

棉毛（当地药房的标准问题）孢子准备
0.22μm孔径过滤器（PVDF）（Sartorius AG）
30°C旋转振动器
将挡板锥形烧瓶（500ml）（GlasgerätebauOchs，Laborfachhandel e.K.，目录号：100500）
标准尺寸的塑料培养皿，用于细菌生长和孢子制备
气密玻璃用于用丁基橡胶隔片（GlasgerätebauOchs，Laborfachhandel e.K.，目录号：1020471）进行厌氧工作的Hungate管（16ml）
冷却的台式离心机（例如 Eppendorf）
针（0.6mm规格）（B.Braun Melsungen AG）
水浴或加热块（Biometra）
能够测量可见光范围内的吸收的分光光度计
光学"FirestingO 2"氧气计（Pyro Science GmbH）
非接触光学氧传感器点（Pyro Science GmbH）
'Bare fiber'（Pyro Science GmbH）
可调节的微型磁力搅拌器（例如IKA）（10mm×0.3mm磁力搅拌棒）（例如Roth North America）

软件

Firesting Logger软件（Pyro Science GmbH）

程序

在30℃下在SFM琼脂平板上生长天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor），直到菌落形成孢子（Kieser等人，2000）。通过使用棉签分离孢子，并用水洗涤并通过棉绒过滤两次（Kieser等人，2000）。随后，将它们调节至10或20的OD 450nm（1ml的OD 450 = 1等于3.5×10 8个孢子 ml ^-1或2.37×10 8 cfu。）。
在30℃的室或室中，在16ml气密的Hungate小瓶中测量孢子的氧还原速率。
小瓶中装入5ml含有氯霉素（400μg/ml）的50mM MOPS缓冲液（pH7.2）和OD 450nm 25为25的孢子悬浮液Fischer等人，2013）。
用磁力搅拌器以800rpm将孢子悬浮液连续搅拌至孢子悬浮液中的氧饱和度。对于进行的每个实验，根据经验确定氧饱和度，并且基于800rpm的搅拌速度，该过程通常花费约2分钟。用气密性橡胶塞封闭小瓶，同时用针均衡一次压力，并开始在线测量循环，完全如制造商提供的方案中所示。实验设置的图片位于 http://www.pyro-science.com/optical_oxygen_meter_firesting_O < sub> 2 .html 。
使用Pyro Science GmbH的氧测量系统并且使用Firesting Logger软件记录，在15小时的时间内非侵入地并且连续地监测剩余的11ml顶部空间中的氧水平。为此，将氧依赖性发光传感器点固定到顶部空间内的管的玻璃壁，并使用光学氧计（Firesting2）通过小瓶的玻璃壁测量信号。 br />
氧气呼吸速率计算为相对于孢子干重（1OD ml -1 sup = 0.12mg干重）的顶部空间中每体积氧减少的氧的摩尔数。在Fischer等人中示出了数据的代表性示例。（2013）。

食谱

MOPS缓冲区
用NaOH调节至pH 7.2 通过0.22μm过滤器过滤灭菌
SFM琼脂
20g L -1 -1大豆粉 20g L -1 -D-甘露糖醇琼脂（Kobe I）

致谢

这项工作得到了德意志交流协会（SA 494/4-1）的支持。

参考文献

Fischer，M.，Falke，D。和Sawers，R.G。（2013）。呼吸性硝酸还原酶仅在专性气单胞菌链球菌的休眠孢子中有效。 > A3（2）。 Mol Microbiol 89（6）：1259-1273。
Hopwood，D.A。（2006）。土壤基因组学：链霉菌染色体。 > Annu Rev Genet 40：1-23。
Kieser，T.，Bibb，M.J.，Buttner，M.J.，Chater，K.F.and Hopwood，D.A。（2000）。实用链霉菌遗传学。诺维奇：约翰·因尼斯基金会