材料和试剂

Staphylococcus delphini DSMZ20771菌株（DSM编号：20071）
注意：DSMZ代表Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen。
胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）（Sigma-Aldrich，目录号：T8907）
Amberilite XAD-16树脂（Sigma-Aldrich，目录号：1-0379）
甲醇
乙酸（Merck KGaA）
Amberilite IRC 50阳离子交换树脂（SERVA Electrophoresis GmbH，目录号：40501）
氢氧化钠
乙醇
50mM和1M磷酸钠缓冲液
SP琼脂糖阳离子交换柱（GE Healthcare，目录号：17-5161-01）
氯化钠
三氟乙酸（TFA）（Sigma-Aldrich，目录号：T6508）
用于HPLC的磷酸（Sigma-Aldrich，目录号：79606）
HPLC的乙腈（Mallinckrodt Baker，目录号：9012）

设备

37℃振荡培养箱（Infors AG）
离心机（Eppendorf）
旋转蒸发器（BÜCHILabortechnik AG）
装备有P-900，UV-900，PH/C-900（GE Healthcare）的ÄktaFPLC
配有Bischoff HPLC紧凑泵QC-P 2250和多波长检测器QC-1157（Bischoff）的制备型HPLC系统
Nucleosil 100 C-18（8×250mm柱）（MACHEREY-NAGEL，目录号：715332.80）
Agilent 1200系列HPLC系统（Agilent）
Waters XBridge C18（5mm，4.6×150mm柱）（Waters，部件号：186003116）

程序

delphini 在37℃下在100ml TSB中在振荡培养箱上以150rpm培养20小时。
将细胞在4℃下以5,000rpm（4500xg）离心10分钟，将上清液施加到填充有10ml Amberilite XAD-16树脂的柱上。
首先用5倍床体积的milliQ水，然后用40％和60％甲醇洗柱，最后用含5％乙酸的80％甲醇以10床体积/小时的流速洗脱。
使用旋转蒸发器蒸发洗脱液，直到除去所有甲醇
将洗脱液用50ml水重悬，并用1M NaOH将pH调节至7.0。然后将其施加到填充有10ml Amberilite IRC-50阳离子交换树脂的柱上。
首先用水，然后用70％乙醇洗涤柱，用5％乙酸酸化的80％乙醇洗脱，每个柱床体积为5倍，流速为每小时10床体积。
使用旋转蒸发器浓缩洗脱液，直到除去所有甲醇
洗脱液用水稀释，并用1M磷酸钠缓冲液调节至终浓度为50mM磷酸钠，用85％磷酸将pH降至4.2。
在第三纯化步骤中，洗脱液在5ml SP琼脂糖阳离子交换柱上在50mM磷酸钠缓冲液中的线性0-1M NaCl梯度在Äkta纯化器FPLC上以3ml/min的流速分离。 br />
每个峰的最终纯化和脱盐通过反相制备型HPLC（RP-PHPLC）在核苷100C-18,8×250mm柱上进行，用线性水乙腈（含0.1％TFA）梯度0％ 60分钟在25分钟内。
将纯化的化合物冻干并储存在-20℃
在Agilent 1200 HPLC系统和RP-HPLC Waters xBridge C18,5mm，4.6×150mm柱上进行定性分析。化合物用15分钟线性梯度的磷酸水溶液（0.1％体积/体积）洗脱至乙腈，流速为1.5ml/min，并在210nm检测。

图1.从S中纯化的两种QS抑制剂的RP-HPLC图，UV-光谱和结构。 delphini A.QS抑制剂，N' - [2-（1H-吲哚-3-基）乙基] - 脲（yayurea A）。 B.QS抑制剂，N' - （2-苯乙基） - 脲（乙酰脲B）。 RP-HPLC在Agilent 1200和Waters XBridge C18,5mm，4.6×150mm柱上进行;化合物用15分钟线性梯度的0.1％磷酸至乙腈以1.5ml/min的流速洗脱。

致谢

这项工作是由LandesgradüllenförderungBadenWürttemberg"抗微生物化合物"和Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB 766的赠款资助的。该协议改编自原始发表的论文Chu等人（2013）。

参考文献

Chu，Y. Y.，Nega，M.，Wölfle，M.，Plener，L.，Grond，S.，Jung，K.andGötz，来自葡萄球菌物种的一类新的quorum淬灭分子影响沟通和生长的革兰氏阴性细菌。 PLoS Pathog 9（9）：e1003654。