材料和试剂

人MDA-MB-231细胞系（ATCC，目录号：HTB-26 TM）
Dulbecco's改良的Eagle培养基（DMEM）（Life Technologies，Invitrogen TM，目录号：10313-021）
胎牛血清（FBS）（ATCC，目录号：30-2020 TM）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）（Life Technologies，Invitrogen TM，目录号：14190-144）
戊二醛（Sigma-Aldrich，目录号：G6257）
乙醇（Sigma-Aldrich，目录号：459836）
结晶紫（Sigma-Aldrich，目录号：C3886）

设备

BD Falcon 24孔组织培养板（Fisher Scientific，目录号：08-772-1H; BD Biosciences，目录号：353226）
Rainin移液管吸头（1ml）（Mettler-Toledo，目录号：GPS-L1000）
细胞培养孵育器：37℃和5％CO 2/h

软件

Photoshop或ImageJ（ http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html ）

程序

在补充有10％FBS的DMEM中生长细胞
将种子细胞以24小时生长后的密度接种到24孔组织培养板中，它们应当作为单层达到约70-80％汇合。
不要更换介质。轻轻地和慢慢地划伤单层，使用新的1毫升移液管尖端穿过孔的中心。当刮擦孔的表面时，尖端的长轴应始终垂直于孔的底部。因此，所得到的间隙距离等于尖端的端部的外径。间隙距离可以通过使用不同类型的尖端来调节。沿一个方向划一条直线。
划出另一条垂直于第一条直线的直线，在每个井中创建一个十字
擦伤后，用培养基轻轻冲洗孔两次，以除去分离的细胞
用新鲜培养基补充孔。
注意：中等可能含有您想测试的感兴趣的成分，例如抑制/促进细胞运动和/或增殖的化学物质。
生长细胞额外48小时（或如果使用不同的细胞所需的时间）。
用1x PBS洗涤细胞两次，然后用3.7％多聚甲醛固定细胞30分钟
用1％结晶紫在2％乙醇中染色固定的细胞30分钟
在显微镜上为染色的单层拍照。当为染色单层的不同视图拍摄照片时，设置相同的显微镜配置。间隙距离可以使用诸如Photoshop或ImageJ（ http：//rsb。 info.nih.gov/ij/download.html ）。为了减少结果的变异性，建议对每个孔的多个视图进行记录，并且每个实验组应重复多次。

致谢

该方案在美国加利福尼亚州La Jolla的Scripps研究所免疫学系中开发，并改编自Lampugnani（1999）和Yarrow等人。（2004）。该工作由NIH资助，CA079871和CA114059以及加利福尼亚大学的烟草相关疾病研究计划15RT-0104由Jiing-Dwan Lee博士资助[参见Chen （2009）]。

参考文献

Chen，Y.，Lu，B.，Yang，Q.，Fearns，C.，Yates，J.R.，3rd和Lee，J.D。（2009）。组合整合素磷蛋白分析和基于小干扰RNA的功能筛选确定了癌细胞粘附的关键调节因子，。 Cancer Res 69（8）：3713-3720。
Lampugnani，M.G。（1999）。体外细胞迁移到受伤区域。 < em> Methods in Mol Biol 96：177-182。
Yarrow，J.C.，Perlman，Z.E.，Westwood，N.J.，Mitchison，T.J。（2004）。使用刮痕伤口愈合的高通量细胞迁移测定，基于图像的读出方法的比较。 BMC Biotechnol 4：21.