摘要:生物传感芯片是基于表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)的生物相互作用分析仪测试的核心部件。传感芯片为玻璃基底上镀金膜,在测试分子相互作用前,先将一种受体分子固定在金膜表面,然后使与之相互作用的配体分子流过芯片表面,SPR检测器就能实时监测配体分子与受体分子结合、解离过程。通常,供应商开发的传感芯片使用最为广泛,但是,固定蛋白或其他受体的芯片经过数次循环测试后,分子容易失去生物活性或脱落,而芯片则因不能再生而失去了继续使用的价值。考虑到生物传感芯片价格昂贵,本文尝试对废弃芯片进行回收利用,并重制用于直接偶联蛋白的具有羧甲基化葡聚糖表面(carboxymethylated dextran matrix surface,CM)的芯片,可再次用于SPR分析测试。
材料与试剂
- 废弃生物传感芯片(Cytiva,CM5、CM7、SA等芯片)
- 裸金芯片(Cytiva,SIA Kit Au:BR-1004-05)
- 乙醇(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,Aladdin,AR:E111989-500mL)
- 浓硫酸(天津市津东天正精细化学试剂厂,津东天正,AR)
- 双氧水(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,Aladdin,AR,30 wt% in H2O:H112515-500mL)
- 11-巯基十一醇(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司,Sigma-Aldrich,97%)
- 环氧氯丙烷(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,Aladdin,AR,99.5%)
- 二乙二醇二甲醚(安徽泽升科技有限公司,安耐吉化学,99.5%)
- 葡聚糖(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,Aladdin,Mw = 1,500、25,000、60,000 以及500,000 g/mol,AR,99.5%)
- 溴乙酸(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司,Sigma-Aldrich,97%)
- 透明双面胶(丰裕工业胶带,皇冠,PET透明双面胶带:7982)
- 牛血清蛋白(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,Aladdin,96%)
- 氨基偶联试剂盒(Cytiva,Amine Coupling Kit:catalog number: BR100050)
- 醋酸钠缓冲溶液(Cytiva,Acetate 4.0:catalog number: BR100349)
- 98% H2SO4/30% H2O2(7:3)溶液(见溶液配方)
- 11-巯基十一醇溶液(见溶液配方)
- 表氯醇溶液(见溶液配方)
- 葡聚糖(Dextran)水溶液(见溶液配方)
仪器设备
- 生物分子相互作用分析仪(Cytiva,catalog number: Biacore T200)
- 微孔板恒温振荡器(杭州米欧仪器有限公司,MIU LAB,catalog number: ST70-2)
- 氮吹仪(杭州米欧仪器有限公司,MIU LAB,catalog number: NDK200-1N)
- 干式金属浴(杭州米欧仪器有限公司,MIU LAB,catalog number: DHT-100)
实验步骤
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