引言

新冠病毒为了适应不同的环境，在不断地进化，因此具有高度变异性。其高度变异的特性不仅会造成病毒具有强大的传播能力，还对疫苗以及抗病毒治疗药物、抗体产生巨大的威胁。目前发现上市的许多抗体对新毒株失去了结合或者中和能力，因此，快速筛选新抗体对于新冠肺炎的治疗具有重要意义。由于从新冠康复患者血清中筛选抗体周期较长，因此我们以结构为基础，在现有已报道抗体的基础上进行单点氨基酸突变以达到快速筛选抗体的目的。我们构建了大量突变体，利用传统筛选方法只能定性分析抗体与抗原是否结合，无法得到抗体与抗原的亲和力，亦无法比较不同抗体之间的亲和力差异，本文利用Biacore8K对点突变的抗体进行快速筛选，并可以比较不同抗体的亲和力，从而可以筛选出高亲和力的抗体。

材料与试剂

1. 吐温20（VETEC，catalog number： V900548-500 mL）
2. DMEM 培养基（Gibco，catalog number：C11995500BT 500 mL）
3. 悬浮细胞培养基（北京义翘神州科技股份有限公司，catalog number：M293TII）
4. 细胞计数板（Marienfeld，catalog number：0650030）
5. 胎牛血清（Gibco，catalog number：10437-028）
6. 12孔细胞培养板（Corning，catalog number：3513）
7. 0.22 µm微孔滤器（millipore，catalog number：SLGVR13SL）
8. 0.22 µm微孔滤膜（水系）（金晶，catalog number：QYCE-006）
9. 1 mL一次性注射器（江苏治宇医疗器材有限公司：规格 0.45 × 16RWLB）
10. 5 mL一次性注射器（江苏治宇医疗器材有限公司：规格 0.6 × 25RWLB）
11. S 系列 Protein A传感芯片（Cytiva，catalog number：29127555）
12. 10× PBS缓冲液（北京索莱宝科技有限公司，catalog number：P1022）
13. 293T细胞转染试剂PEI（上海懋康生物科技有限公司，catalog number：MX2202）
14. 293F细胞转染试剂（北京义翘神州科技股份有限公司，catalog number：STF02）
15. 96孔板（Greiner，catalog number：650101）
16. His纯化柱（Cytiva，catalog number：HisTrap HP 17524801）
17. 10KDa超滤管（Millipore，catalog number：UFC901096）
18. 分子筛纯化柱（Cytiva，catalog number：Hiload™ 16/600 Superdex™ 200 pg）
19. 咪唑（普西唐，catalog number：I50001-1KG）
20. 补料液（北京义翘神州科技股份有限公司，catalog number：M293-SUPI）
21. 一步法快速配胶试剂盒12%（诺唯赞，catalog number：E304-01）
    

仪器设备

1. 贴壁细胞培养箱（Thermo Scientific, Model：STERI-CYCLE）
2. 悬浮细胞培养箱（CRYSTAL, Model：IS-RDS3C）
3. 蛋白纯化仪（GE Healthcare，Model：ÄKTATM pure）
4. 微量冷冻离心机（Thermo Scientific, Model：Fresco 21）
5. 水平浓缩离心机（HITACH, Model: CF5RE）
6. 高速冷冻离心机（HITACH, Model: CR22N）
7. 分子相互作用分析仪（Cytiva, Model：Biacore 8K）
8. 微量分光光度计（Thermo Scientific，Model：Nanodrop2000）
9. 生物安全柜（北京东联哈尔仪器制造有限公司 Model：CLASS II TYPE A2）
10. 蠕动泵（LongerPump，Model：BT100-2J）
    

实验步骤