Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource
- 实验方法
- Request a Protocol
- 关于
-
通过高内涵成像分析系统进行小分子与溶酶体共定位分析及溶酶体通膜透性检测
Lysosomal Localization and Lysosomal Membrane Permeability Assay of Small Molecules by LmageXpress Micro XLS
发表时间: 2021年08月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010849 浏览次数: 3453
返回专辑目录
PDF 
提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：高内涵成像分析系统通过细胞高清晰快速成像，能够获得细胞、蛋白分布、基因表达的高清晰图像。通过软件系统对高清晰细胞图像进行分析，能够快速获得细胞形态学、功能学等性状改变情况，并能通过细胞内蛋白表达改变、GPCR受体内吞、细胞凋亡和死亡，细胞粘附等特征快速准确高效获得细胞变化的数据，并以此为依据，研究细胞变化的规律及疾病状态下细胞的变化和细胞间的相互作用，为研究疾病发生和寻找相应的药物提供依据和手段。高内涵成像分析系统是在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、毒性、代谢途径及信号传导各个环节的影响, 在单一实验中获取大量与基因、蛋白及其他细胞成分相关的信息，确定其生物活性和潜在毒性的过程。同时, 也是一种应用高分辨率的荧光数码影像系统，旨在获得被筛样品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息, 在细胞水平上检测多个指标的多元化、功能性筛选技术平台。高内涵成像分析系统广泛应用于细胞凋亡机制的研究，溶酶体在细胞凋亡调节中的研究越来越受到重视，溶酶体膜通透性(LMP)改变可以启动溶酶体凋亡途径，LMP改变可能被证明是一种有价值的治疗方法，可以作为细胞死亡的触发器，也可以作为治疗药物释放参与细胞凋亡的指标之一。
因此，本文通过高内涵分析对配位化合物1-3进行溶酶体共定位分析。在实验过程中，需要对高内涵plate、wavelength等参数进行调整，还需对图片通道、自动曝光、自动聚焦、图片颜色及清晰度进行选取，最后合理保存所拍图片以便进行结果分析。实验结果表明，配位化合物1-3定位溶酶体腔内且可以使溶酶体通透性增强。溶酶体内包含了多种蛋白水解酶，在细胞细胞凋亡中起关键作用，因此我们进一步研究配位化合物1-3作用于溶酶体并参与细胞凋亡的机制。
因此，本文通过高内涵分析对配位化合物1-3进行溶酶体共定位分析。在实验过程中，需要对高内涵plate、wavelength等参数进行调整，还需对图片通道、自动曝光、自动聚焦、图片颜色及清晰度进行选取，最后合理保存所拍图片以便进行结果分析。实验结果表明，配位化合物1-3定位溶酶体腔内且可以使溶酶体通透性增强。溶酶体内包含了多种蛋白水解酶，在细胞细胞凋亡中起关键作用，因此我们进一步研究配位化合物1-3作用于溶酶体并参与细胞凋亡的机制。
材料与试剂
- 细胞株 (SGC-7901) (中山大学细胞库)
- 胎牛血清 (FBS) (美国Gibco公司, catalog number: 10270106)
- 新生牛血清 (NBCS) (美国Gibco公司, catalog number: 16010142)
- RPMI-1640培养液 (美国Gibco公司, catalog number: 31870082)
- DMEM高糖培养液 (美国Gibco公司, catalog number: 11965092)
- 溶酶体红色荧光探针 (Beyotime生物技术有限公司, catalog number: C1046)
- 吖啶橙 (AO) (Beyotime生物技术有限公司, CAS number:: 494-38-2)
- 青霉素/链霉素 (Beyotime生物技术有限公司, catalog number: C0222)
- RPMI-1640/DMEM (Gibco) 的配制 (见溶液配方, catalog number: 31800022/12800017 )
仪器设备
- 超净工作台(苏洁医疗器械有限公司, model: SJ-CJ-2FD)
- 二氧化碳培养箱 (日本松下电器公司, model: 371)
- 倒置生物显微镜 (奥林巴斯公司, model: CKX31-A11RC)
- 立式压力蒸汽灭菌器 (上海申安医疗器械厂, model: LDZM-60KCS-II)
- 电热鼓风干燥箱 (上海凯朗仪器设备厂, model: DHG-9140A)
- 低速离心机 (上海安亭科学仪器厂, model: TDL-5-A)
- 高速冷冻离心机 (上海卢湘仪仪器有限公司, model: TGL-16M)
- -86 °C医用低温箱 (日本松下公司, model: MDF-193)
- 高内涵细胞成像系统 (MOLECULAR DEVICES, model: ImageXpress Mcro XLS)
实验步骤
Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张园媛, 张慧雯, 田莉, 周怡, 郝静, 刘云军. (2021). 通过高内涵成像分析系统进行小分子与溶酶体共定位分析及溶酶体通膜透性检测. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010849. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010849.
下载引用格式
Download Citation in RIS Format
下载引用格式
How to cite: Zhang, Y. Y., Zhang, H. W., Tian, L., Zhou, Y. Hao, J. and Liu, Y. J.
(2021). Lysosomal Localization and Lysosomal Membrane Permeability Assay of Small Molecules by LmageXpress Micro XLS. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010849. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010849.
Download Citation in RIS Format
您对这篇实验方法有问题吗？
在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。
发布问题0 Q&A
