摘要: 生物节律是生物进化过程中形成的内源性的适应地球昼夜交替的机制,并对生物体内多种代谢过程和生理功能具有调控功能。在细胞内,生物节律主要通过转录-翻译反馈环进行调控,BMAL1-CLOCK复合体可以启动PER2等下游基因的表达,PER2可以通过抑制BMAL1-CLOCK复合体的转录功能。PER2作为核心节律基因之一,其表达水平具有明显的周期性,其振幅和周期也是生物节律的重要特征。因此,通过检测PER2表达水平的周期性可以反应生物节律的强弱。在本次siRNA文库筛选中,我们使用表达PER2-荧光素酶融合蛋白的小鼠MEF细胞,通过检测生物发光值的变化,来表征PER2表达水平的变化,从而发现新的可以调控生物节律的基因。本文主要介绍了运用siRNA文库以及通过检测生物发光值进行高通量筛选的方法,该方法适用性强,操作简单,有助于获得稳定的筛选结果。
关键词: 生物节律, siRNA文库 , Luciferase
材料与试剂
材料
试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
可能遇到的问题及调整建议
溶液配方
致谢
感谢中国科学院生物化学与细胞生物学研究所化学生物学技术平台各位老师对本实验方法的帮助和改进。本实验得到国家自然科学基金项目 (31471342 and 31671408) 的资助。
参考文献
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