摘要:流式分选可根据细胞发射的不同荧光实现细胞分群及单克隆分选,从而进一步研究不同细胞的基因、蛋白等表达差异。由于其具有检测灵敏度高,回收率高的特点而被广泛用于干细胞的研究。本方案以小鼠乳腺为例,通过流式分选,富集乳腺干细胞类群。为进一步研究乳腺干细胞的生理生化特性及分化潜能提供了基础。
关键词: 乳腺干细胞, 流式分选
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一. 获取乳腺组织及消化
二. 分离单细胞
三. 流式分选乳腺干细胞
结果与分析
如图1所示,在小鼠乳腺单细胞悬液中框取FSC较大的活细胞 (SSC选择log展示)。接着去掉粘连细胞,框取单细胞。在单细胞中选择CD31/CD45/Ter119阴性的细胞。根据CD24和CD29的表达框取luminal,basal和stroma细胞。Basal细胞为CD24+CD29high的一群。根据之前的报道,乳腺干细胞特异性存在于basal细胞层中,在成年 (8w及以上) ICR品系的小鼠乳腺中占3%左右。 图1. 小鼠乳腺干细胞分选示意图
失败经验
如果存在单细胞得率低的情况,可以考虑从以下几点改进:
如果出现细胞分群不好的情况,可以考虑:
溶液配方
致谢
曾艺实验室的工作得到国家自然基金的支持。本文实验方案用于本实验室发表的文章 (Cai等, 2014; Wang等, 2015; Song等, 2019)。
参考文献
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