摘要: 肿瘤的发生进展及治疗预后,与其赖以生存的肿瘤微环境息息相关。免疫细胞作为机体重要的监视防御力量,在肿瘤内部可能扮演着截然不同的角色。M2极化型的巨噬细胞呈现出免疫抑制状态,能够促进肿瘤发生,血管再生及转移 (Noy和Pollard,2014);而M1极化型巨噬细胞对抗肿瘤免疫效应有着关键作用 (Mantovani等,2017)。明晰肿瘤微环境内M1/M2巨噬细胞细胞的极化状态,对于研究肿瘤免疫治疗及预测临床预后有着重要的指导意义。本文旨在运用流式手段检测肿瘤微环境内巨噬细胞的极化状态,这是探究肿瘤相关巨噬细胞功能的重要内容之一。
关键词: 肿瘤相关巨噬细胞, 巨噬细胞极化, 肿瘤微环境, 流式技术
材料与试剂
材料:
仪器设备
实验步骤
注:由于F4/80、MHCII、CD86、CD206染色均显示漂移,没有明显分群,需要额外增加空白对照 (不加相应的流式抗体) 和荧光扣除对照 (加入与相应流式抗体一样的只带荧光的流式抗体)。以anti-mouse-CD206-PE为例,空白对照即不加CD206-PE这支流式抗体,而荧光扣除对照则是添加anti-rat-IgG-PE。
表1. 肿瘤微环境内MDSCs流式染色配色 注:流式抗体使用配色可自行调整,注意不要使用补偿过大的荧光通道。
结果与分析
设门方式 (图1): 肿瘤相关巨噬细胞:Single cell, live, CD45+Ly6C-Ly6G-CD11b+F4/80+ M1巨噬细胞表面标志:MHCII,CD86 M2巨噬细胞表面标志:CD206
溶液配方
注:以下溶液均在超净台内配制。
参考文献
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