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以MARCM标记单细胞在果蝇神经系统的应用

Labeling Single Cells by Mosaic Analysis with a Repressible Maker (MARCM) in Drosophila Nervous System

张 张颢馨
周 周雅惠

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010289 浏览次数: 7643

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果蝇实验手册
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摘要：在以果蝇为实验材料的研究中，常利用Mosaic analysis with a repressible maker (MARCM) 标记单个或一群细胞，以观察神经细胞的形态 (morphology) 或操控基因的表达。MARCM的作用原理是当母细胞 (parental cell) 的同源染色体经由FRT发生染色体重组 (homologous chromosome recombination)，经细胞分裂后即有机会产生一个不带有GAL80的子细胞，而使得GAL4得以作用。因为这项技术可标记特定细胞谱系中的单个或一小群细胞，因此适合用于研究细胞谱系、神经回路以及探讨特定基因在神经细胞或其他组织中的功能。

Keywords: 果蝇 (Drosophila) search MARCM search 单细胞克隆 (single-cell clone) search 多细胞克隆 (neuroblast clone) search 神经节母细胞 (ganglion mother cell) search

材料与试剂

  1. 500 μl微量离心管 (Eppendorf tubes) (Axygen, catalog number: MCT-060-C)
  2. 载玻片 (SuperFrostTM Microscope Slides, Ground 45°, 76 × 26 mm) (Thermo ScientificTM, catalog number: 10281711)
  3. 盖玻片 (cover glasses thickness No.1, 22 × 22 mm) (Marienfeld Superior, catalog number: 0101050)
  4. 移液枪头 (移液枪配套使用) [Axygen, catalog number: 14-222-436 (1,200 μl), 14-222-437 (200 μl), 14-222-438 (10 μl)]
  5. 培养皿 (Alpha Plus, 55 × 15 mm, catalog number: PP3-55)
  6. 果蝇
  7. 果蝇管 (信德仪器有限公司，catalog number: PT10-30100)
  8. Embryo Collection Cage-Small (Genesee Scientific, Flystuff, catalog number: 59-100)
  9. 透明指甲油 (露华浓经典指甲油，Revlon，catalog number: Vernis 771)
  10. 葡萄果汁 (味全公司，每日C 100%葡萄综合果汁)
  11. 琼脂 (agar) (GeneTeks, catalog number: WGT-PA001)
  12. 二次过滤水 (ddH2O)
  13. 95%酒精 (景明化工股份有限公司)
  14. 冰醋酸 (glacial acetic acid) (Sigma-Aldrich, catalog number: JT-9508)
  15. 丙酸 (proprionic acid) (Sigma-Aldrich, catalog number: SI-P1386-1L)
  16. CO2 (板桥气体有限公司)
  17. 活性干酵母发酵粉 (Red Star, active dry yeast)
  18. 聚甲醛 (20% paraformaldehyde) (Electron Microscopy Sciences, catalog number: 15713-S) 
  19. 10×磷酸盐缓冲生理盐水 (10× Phosphate buffered saline (PBS)) (UniRegion Bio-Tech, catalog number: UR-PBS001-1L) 
  20. 山羊血清 (Normal Goat Serum) (Jackson ImmunoResearch Laboratories, catalog number: 005-000-121)
  21. Triton X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: X100)
  22. SlowFadeTM Gold Antifade Mountant (Invitrogen, catalog number: S36936)
  23. 1× PBS (磷酸盐缓冲生理盐水) (见溶液配方)
  24. 4%聚甲醛/磷酸盐缓冲生理盐水 (见溶液配方)
  25. PBST (3% Triton X-100/PBS; 1,000 ml) (见溶液配方)
  26. 5%山羊血清 (Normal Goat Serum) (见溶液配方)
  27. 第一抗体溶液 (见溶液配方)
  28. 第二抗体溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镊子 (Dumont #5 Forceps) (Dumont Switzerland, catalog number: 11252-20)
  2. 1,000 ml烧杯 (Pyrex, catalog number: 1000-1L)
  3. 微量移液枪 (Pipetman) [Gilson, P1000 (F123602), P200 (F123601), P20 (F123600), P2 (F144801)]
  4. 解剖显微镜 (Nikon, model: N-SMZ745)
  5. 共轭焦显微镜 (Zeiss, model: LSM780)
  6. 培养箱 (Firstek, model: RI-560)
  7. 恒温水槽 (Firstek, model: B-102)
  8. 3D旋转震荡器 (Digisystem, model: SR-100)
  9. 4 °C冷藏柜 (JunYang, model: JR-2-1100)
  10. 微波炉 (Panasonic, model: NN-ST340)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张颢馨, 周雅惠. (2019). 以MARCM标记单细胞在果蝇神经系统的应用. Bio-101: e1010289. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010289.
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How to cite: Chang, H. H. and Chou, Y. H. (2019). Labeling Single Cells by Mosaic Analysis with a Repressible Maker (MARCM) in Drosophila Nervous System. Bio-101: e1010289. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010289.
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神经科学 > 基础技术

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