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柑橘试管嫁接   

袁东亚袁东亚*王伟 王伟 *解凯东 解凯东 *郭文武 郭文武  (*contributed equally to this work)
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Original research article

A brief version of this protocol appeared in:
Rice Protocol e-book

实验原理及目的:经过植物组织培养产生的试管苗,一般会将其转入生根培养基,待根长出后进行移苗和炼苗。而有些试管苗存在生根难、移栽难的问题,利用试管苗嫁接,可以省掉生根和移苗的环节,同时发挥砧木的特性。

关键词: 试管苗, 嫁接, 砧木

材料与试剂

  1. 封口膜
  2. 滤纸
  3. 玻璃皿
  4. 柑橘果实
  5. 4% NaOH
  6. 3% NaClO
  7. 播种培养基 (详见柑橘组培常用培养基配制方法 [杨雯惠等,2018]) 
  8. 液体生根培养基 (见溶液配方)

仪器设备


  1. 三角瓶
  2. 镊子
  3. 手术刀
  4. 光培室
  5. 超净工作台
  6. 暗培养箱
  7. 电子天平
  8. pH计

实验步骤

  1. 砧木准备
    1.1
    在果实成熟期采收枳、枳橙等的果实,取出种子,将种子用4% NaOH溶液浸泡约10 min,去除种子表面的果胶,然后剥去其外种皮,用3% NaClO溶液对种子消毒处理15 min。
    1.2
    于无菌条件下,用镊子剥去种子内种皮,将种子播于播种培养基 (MT培养基,蔗糖减少为25 g) 中,暗培养30-40 d左右,选取生长粗壮、未木质化的黄化苗用于试管嫁接。
  2. 嫁接 (超净工作台)
    2.1
    于嫁接前提前准备好灭菌的铺有滤纸的玻璃皿,含滤纸桥的液体生根培养基 (见溶液配方)。
    2.2
    砧木处理:将枳黄化苗从试管中取出,置于铺有滤纸的培养皿中,用手术刀在子叶上下各1.5-2.0 cm处去掉部分茎和根,在茎段顶部切一个深度约为0.3-0.5 cm的切口。
    2.3
    接穗处理:将未生根的组培苗置于培养皿的滤纸上,用手术刀将其茎上的叶片全部切除,再将其切为1-2 cm左右的茎段,随后将茎段基部削成楔形后快速插入到砧木的切口中,使其与砧木切口紧密吻合。
    2.4
    嫁接完毕后,立即将其放入带有滤纸桥的液体生根培养基中,最后置于光照培养室中培养。
    注:
    1)
    滤纸桥即为滤纸中间插一个小孔,具有支撑试管苗的作用。
    2)
    嫁接时,确保砧木和接穗至少有一边对齐,便于伤口愈合。
    3)
    整个操作过程均在无菌条件下进行,且动作要快,防止失水。
    4)
    在光照条件下培养,伤口愈合后,及时清除砧木切口处的萌蘖;待伤口充分愈合,且接穗芽长出新叶后,即可将其炼苗并移入温室。

溶液配方

  1. 生根培养基
    MT培养基
    50 ml/L
    大量元素
    25 g/L蔗糖
    NAA
    0.5 mg/L
    IBA
    0.1 mg/L
    活性炭
    0.5 g/L
    pH:5.86-5.88

参考文献

  1. 杨雯惠,解凯东,郭文武. (2018). 柑橘组织培养常用培养基配制方法. Bio-101 e1010184. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010184.
  2. Trevor A. T. and Edward C. Y. (Eds.) (2011). Plant embryo culture: methods and protocols [M]. Humana Press.
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:袁东亚, 王伟 , 解凯东 , 郭文武 . (2018). 柑橘试管嫁接. Bio-101: e1010190. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010190.
How to cite: Yuan, D. Y., Wang, W., Xie, K. D. and Guo, W. W. (2018). Tube Grafting Citrus. Bio-101: e1010190. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010190.
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