实验原理：根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在特定波长下测定叶绿素提取物的吸光值，然后根据公式计算出样品中叶绿素的含量。
实验目的：可以检测水稻叶片中叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。
关键词: 叶绿素a, 叶绿素b, 总叶绿素含量
材料与试剂
- 2 ml离心管
- Parafilm
- 乙醇 (国药试剂) (分析纯)
- 丙酮 (国药试剂) (分析纯)
- 抽提Buffer (见溶液配方)
仪器设备
- 分析天平 (Adventurer, USA)
- 分光光度计DU640 (Backman, USA)
- 离心机 (Backman, USA)
实验步骤
- 取新鲜水稻叶片，擦干后去中脉，剪碎，混匀。
- 用分析天平称取0.1 g左右的叶片到2 ml离心管中，每个编号的样品分成三份作为三个技术重复，每管加入抽提Buffer 2 ml，parafilm封口，4 °C避光抽提12 h。
- 以抽提Buffer为空白对照，使用紫外分光光度计DU640在波长645 nm和 663 nm下测定叶绿素提取物的吸光值。
结果与分析
根据Arnon法 (1949) 的公式加以修正计算叶绿素含量：
叶绿素a = (12.72A663-2.59A645) × v/w × 1,000
叶绿素b = (22.88A645-4.67A663) × v/w × 1,000
叶绿素总含量 = (20.29A645+8.05A663) × v/w × 1,000
注意事项
- 为避免叶绿素见光分解，操作时尽量在弱光下进行，且操作速度要快。
- 样品不宜太多，否则加入抽提Buffer后，2 ml离心管装不下。
- 若4 °C避光抽提12 h后，叶片还没有完全变白，则延长抽提时间至叶片全部变白为止。
- 若叶绿素抽提物浑浊，则可以短暂离心后测定吸光值，否则会对试验结果造成误差。
溶液配方
- 抽提Buffer
乙醇:丙酮:H2O = 4.5:4.5:1 (体积比)
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Q&A
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