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显微镜压片技术(临时制片)   

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Original research article

实验原理:压片技术是对动植物组织样本进行精细观察的常用手段之一。压片技术主要利用来自盖玻片的压力将组织样本表面压到同一焦平面上,以快速简单的对样品结构进行显微观察。
较大的样品进行压片时,需要进行透明。压片常用的透明剂有水合氯醛、低浓度甘油等。透明剂的作用:1)利用化学试剂除去原生质的某组分,使组织变得透明。2)用化学试剂改变细胞质组分的折射率,使之透明。如果组织中含有大量的后含物(如单宁酸),透明就比较困难。可以在透明之前使用漂白剂漂白。
这种方法制作的玻片仅能保持1-2周,故称之为临时制片。
实验目的:对样品结构进行简单快速的观察。

关键词: 小组织, 快速, 临时

材料与试剂

  1. 盖玻片
  2. 载玻片
  3. 丙三醇
  4. 水合氯醛 (Bio Basic INC., High purity)
  5. ddH2O
  6. 丙三醇 (上海森灏精细化工有限公司)
  7. 透明剂 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镊子
  2. 微分干涉显微镜(Nikon 80i)

实验步骤

取清洁载玻片,滴加1-2滴透明剂,将材料放置在透明剂中。之后用镊子夹住盖玻片一侧,将其另一侧压在透明剂旁的载玻片上,缓缓放下至水平位置。此时的样品即可用于显微观察 (视频1)。

视频1. 显微镜压片技术(临时制片)操作

注意事项

  1. 取材尽量小,利于将样品压在同一个焦平面上。
  2. 对于较大样品,如水稻根尖,建议每个盖玻片只压一个样品,以利于聚焦观察。为了节约耗材,可以在载玻片不同区域分别压片,比如一张普通载玻片上最多可以压三个盖玻片(18 x 18 mm)。
  3. 盖片时,若有气泡产生,可在盖玻片的一端滴加透明剂,用吸水纸从另一端吸取即可;或将盖玻片取下重新盖上。如果气泡不在样品附近则不用处理。
  4. 压片时,尽量不要用外力压盖玻片 (比如用铅笔轻敲等操作),以防损坏样品。如果压片效果不好,只需放置数小时乃至一两天 (期间要及时追加透明剂以防风干),依靠盖玻片自身的重力即可将样品压好。
    压片时,可以先滴少许透明剂,放上样品并盖上盖玻片。此时,由于透明剂较少,盖玻片一边翘起。从翘起的一侧继续追加少许透明剂(但不充满盖玻片),这时透明剂在扩散开的同时吸引盖玻片压紧样品,有利于快速有效的压片,可大大降低损坏样品的概率。
  5. 镜检时,个别材料中出现颜色较深类似木质化的黄褐色斑块,说明材料没有透明好。可以尝试37 °C抽真空15 min,以加快透明剂渗透的速度;也可以追加透明剂并放置更长时间后再观察。
  6. 盖玻片上表面应保持干净,不得将透明剂溢到上面,否则镜检时会污染物镜,也会降低盖玻片的透明度,影响观察效果。
  7. 镜检时,使用微分干涉显微镜或者相差显微镜,效果更佳。

溶液配方

  1. 透明剂
    常用配方:

    水合氯醛
    8 g
    ddH2O
    3 ml
    丙三醇
    1 ml
    其他配方:

    水合氯醛
    10 g
    ddH2O
    3 ml
    丙三醇
    2 ml
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:王利凯, 付艳茹, 蒋玮, 黄宏林, 赵毓. (2018). 显微镜压片技术(临时制片). Bio-101: e1010137. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010137.
How to cite: Wang, L. K., Fu, Y. R., Jiang, W., Huang, H. L. and Zhao, Y. (2018). Microscopy Technique (Squash Slides). Bio-101: e1010137. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010137.
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