水稻DNA小样抽提   

材料与试剂

1. 1.5 ml (或2 ml) 离心管
   
2. 水稻叶片
   
3. CTAB (Bio Basic INC., catalog number: GB0308 BJ0011J)
   
4. Tris (进口分装)
   
5. 浓盐酸 (中平能化集团开封东大化工有限公司试剂厂)
   
6. NaCl (国药集团有限公司，分析纯)
   
7. EDTA
   
8. 氯仿 (国药，分析纯)
   
9. 异戊醇 (国药，分析纯)
   
10. 95%乙醇 (国药，分析纯)
    
11. 1.5x CTAB配方 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 离心机 (Sigma, Beckman)

实验步骤

1. 取约2 cm长的水稻叶片置于1.5 ml (或2 ml) 离心管中。
   
2. 在研钵中加入800 μl 1.5x CTAB，研磨叶片至匀浆并倒回离心管内。
   
3. 65 °C水浴 20-30 min，每5 min中颠倒混匀一次。
   
4. 用玻璃滴管加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)，上下颠倒混匀，持续10 min。
   
5. 10,000 rpm离心10 min。
   
6. 用移液器吸取400 μl上清液至新的离心管，加入2倍体积经冰镇的95%乙醇，-20 °C放置20 min。
   
7. 12,000 rpm离心15 min。
   
8. 弃上清，加入500 μl 75%乙醇，12,000 rpm离心5 min。
   
9. 弃上清，置于超净台吹干或自然晾干后，加100 μl ddH₂O溶解。
   

注意事项

1. 水浴颠倒混匀时，注意确认离心管盖是否盖好，避免颠倒时样品泄漏。
   
2. 水浴后开离心管盖子时一定要逐个完全打开，以避免样品间出现交叉污染。
   
3. 用滴管加24:1的氯仿/异戊醇时，由于氯仿具有很强的去除蛋白能力和腐蚀性，可以适当的少加一些（少于样品的体积），一方面减少氯仿使用量(既节省试剂又环保)，另外避免下一步离心过程中导致离心管破裂(尤其是1.5 ml离心管)。
   
4. 吸取上清时注意不要吸到固体残渣或氯仿。
   
5. 如果只需要做阳性检测，可以只吸取300 μl上清液，抽提的DNA就足够后续使用，同时可减少乙醇用量。
   

溶液配方

1. 1.5x CTAB缓冲液配方

   CTAB	15 g
   1 M Tris-HCl (pH 8.0)	75 ml
   0.5 M EDTA (pH 8.0)	30 ml
   NaCl	61.4 g
   加 ddH2O至	1,000 ml