Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

丛枝菌根真菌菌种资源收集、培养与保藏方法

Method of Collection, Cultivation and Storage of AM Fungi Strain Resources

王 王幼珊
王 王晓燕
孙 孙昊
张 张淑彬
邢 邢礼军

发表时间: 2022年02月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2104422 浏览次数: 12112

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微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
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摘要：丛枝菌根 (arbuscular mycorrhiza，AM) 真菌是植物专性共生真菌，可与大多数陆生植物形成共生关系，不仅为植物提供水分和矿质养分，还能缓解干旱、盐分、土传病害和重金属等环境胁迫对植物的影响，维持生态平衡和植物多样性。作为土壤微生物资源的重要组成部分，AM真菌菌种资源是AM研究持续发展及应用的物质基础。当前，AM真菌研究技术不断发展，新技术不断涌现，但是纯培养依然很难实现。对于AM真菌菌种资源的分离、培养和收集，盆栽培养法仍然是基础的、最可靠和最广泛的方法。本文从野外样品采集、诱导培养、单孢扩繁、菌剂扩繁、收获及菌种保藏等方面描述了AM真菌的分离和培养过程及保藏方法，为环境中AM真菌菌种资源的分离、培养与保藏提供实用、可操作的方法。

Keywords: 丛枝菌根真菌 search 菌种分离 search 保藏 search 盆栽培养 search

材料与试剂

  1.  一次性无菌PE手套
  2. 消毒湿纸巾 (75%医用酒精湿巾)
  3. 塑料自封袋 (9号自封袋，宽20 cm × 高28 cm)
  4. 标签纸
  5. 铅笔 (HB)
  6. 记号笔
  7. 布袋 (宽22 cm × 高35 cm)
  8. 干净的纸 (新复印纸)
  9. 吸水纸 (Vinda/维达V4609有芯卷纸)
  10. 采样记录本
  11. 塑料托盘
  12. 玻璃棒
  13. 玻璃培养皿和塑料培养皿 (直径9 cm) 
  14. 表面皿
  15. 高粱 (Sorghum bicolor (L.) Moench)种子
  16. 沸石2 mm (河北省全利饲用沸石粉有限公司) 
  17. 河砂 (小于2 mm的水洗砂) 
  18. 蒸馏水
  19. 无水乙醇 (国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR，catalog number: 10009218)
  20. 次氯酸钠溶液 (国药集团化学试剂有限公司，化学纯CP，catalog number: 80010428，活性氯 ³ 5.2%)
  21. 甲醛溶液 (上海久亿化学试剂有限公司，分析纯AR，甲醛含量37-40%)
  22. Hoagland's (霍格兰) 营养液 (参考《现代实用无土栽培技术》141-146页)

仪器设备

  1. 小铁锹
  2. 剪刀和枝剪
  3. 花盆 (高210 mm ´ 口径170 mm) 
  4. 50穴加深苗盘 (54 cm × 28 cm × 10 cm) 
  5. 单道移液器 (20-200 µl; Eppendorf, catalog numbers: 3120000054)
  6. 移液器枪头 (200 µl; Axygen, T-200-Y)
  7. 壁纸刀
  8. 镊子 (蒂梵妮尔；NZ-037；长12.3、17.9、24.5 cm)
  9. 洗瓶
  10. 筛子 (孔径分别为0.8、0.25、0.055 mm) 
  11. GPS (Garmin/佳明 GPSMAP)
  12. 相机 (佳能EOS 6D或像素较高的手机相机)
  13. 4 °C冰箱 (青岛海尔股份有限公司，型号：BCD-290W)
  14. 压力蒸汽灭菌锅 (致微(厦门)仪器有限公司，型号：GR60DA)
  15. 电子天平 (奥豪斯仪器(常州)有限公司，型号：Valor)
  16. 光照培养室 (北京库蓝科技有限公司建设，飞利浦农艺钠灯400 W，光照强度10,000-15,000 lx，光照时间16 h) 
  17. 体视镜 (Nikon SMZ1500，照相系统) 
  18. 生物显微镜 (Nikon ECLIPSE80i，配DIC和照相系统) 
  19. 酒精灯
  20. 净水器 (安利益之源100188CH净水器)

实验步骤

Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王幼珊, 王晓燕, 孙昊, 张淑彬, 邢礼军. (2022). 丛枝菌根真菌菌种资源收集、培养与保藏方法. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2104422. DOI: 10.21769/BioProtoc.2104422.
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How to cite: Wang, Y. S., Wang, X. Y., Sun, H., Zhang, S. B. and Xing, L. J. (2022). Method of Collection, Cultivation and Storage of AM Fungi Strain Resources. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2104422. DOI: 10.21769/BioProtoc.2104422.
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分类

系统生物学 > 微生物组学

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