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药用植物地下茎内生真菌的分离纯化及鉴定

Isolation, Purification and Identification of Endophytic Fungi in Chinese Medicinal Plant Underground Stem

祝 祝英
巩 巩晓芳
杨 杨晖
周 周剑平
王 王治业

发表时间: 2021年06月30日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2103957 浏览次数: 3471

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微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
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摘要：植物内生真菌不但能促进宿主植物生长，还能增强宿主植物抗旱、抗盐和抗病虫害的能力，特别是中药植物内生真菌能产生与中药植物相同或类似的生物活性物质，因此引起广大学者对中药植物内生真菌研究及功能开发的密切关注。内生真菌分离方法常采用组织表面消毒后破碎悬液培养法和去除表皮的组织块原位培养法。本文以药用植物桃儿七为例，利用改进原位组织块培养法不但能够分离得到内生真菌，还能清晰观察到内生真菌的着生部位，菌丝、孢子和菌落等生长状况，为药用植物地下茎内生真菌的分离、纯化、鉴定和功能开发提供可行、可靠的技术支撑。

Keywords: 中药植物 search 地下茎 search 内生真菌 search 组织块培养法 search

材料与试剂

  1. 一次性培养皿
  2. 定性滤纸
  3. 无菌塑封取样袋 (170 mm × 120 mm、140 mm × 100 mm)
  4. 花盆 (220 mm × 250 mm)
  5. 马铃薯 (市场购买)
  6. 氯化汞消毒溶液
  7. 纯净水 (超纯水)
  8. 75%乙醇溶液
  9. 葡萄糖 (上海麦克林生化科技有限公司，麦克林，catalog number: D810588)
  10. 琼脂 (北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，VETEC, catalog number: V900500)
  11. ITS通用引物订购 (生工生物工程 (上海) 股份有限公司，合成部)
  12. 真菌基因组DNA试剂盒 (北京艾德莱科技生物有限公司，艾德莱，catalog number: DN4102)

仪器设备

  1. 超净工作台 (苏净集团苏州安泰空气技术有限公司，苏州安泰，catalog number: SW-CJ-1FD)
  2. 剪刀
  3. 手术刀
  4. 镊子
  5. 酒精灯
  6. 电炉
  7. 2 L玻璃烧杯
  8. 霉菌培养箱 (上海博讯实业有限公司医疗设备厂，catalog number: MJX-250B-Z)
  9. 立式压力蒸汽灭菌器 (上海申安医疗机器厂，catalog number: LCZF-50KB-Ⅱ)
  10. 台式高速离心机 (湖南赫西仪器装备有限公司，catalog number: TGL200MW)
  11. 电子精密天平 (福州 (美国) 华志，catalog number: PTY223/323)
  12. PCR扩增仪 (Bio-Rad公司，Bio-Rad，catalog number: T100)
  13. 光学显微镜 (Leica公司，Leica，catalog number: DM4-B)

软件和数据库

  1. NCBI数据库BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) (https://blast.ncbi.n66 lm.nih.gov/Blast.cgi)
  2. BioEdit v7.2 (https://bioedit.software.informer.com/7.2/)
  3. GeneDoc v2.7.0 (https://genedoc.software.informer.com/download/)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：祝英, 巩晓芳, 杨晖, 周剑平, 王治业. (2021). 药用植物地下茎内生真菌的分离纯化及鉴定. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2103957. DOI: 10.21769/BioProtoc.2103957.
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How to cite: Zhu, Y., Gong, X. F., Yang, H., Zhou, J. P. and Wang, Z. Y. (2021). Isolation, Purification and Identification of Endophytic Fungi in Chinese Medicinal Plant Underground Stem . // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2103957. DOI: 10.21769/BioProtoc.2103957.
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分类

系统生物学 > 微生物组学

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