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原位酶谱法高分辨率实时检测土壤微界面酶活分布

High Resolution Real-time Detection of Soil Enzyme Activity Distribution by in situ Zymography

魏 魏晓梦
魏 魏亮
郝 郝存抗
祝 祝贞科
吴 吴金水
葛 葛体达

发表时间: 2021年04月29日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2003833 浏览次数: 4899

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微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
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摘要：荧光标记的底物与土壤微界面的胞外酶充分反应，释放出的荧光基团被原位保留，并可在355 nm左右的激发光下发射出460 nm左右的可见光 (M. Vepsäläinen et al., 2001)。由于发射光强度与荧光基团释放量有良好的回归关系，而酶促反应释放的荧光基团与被降解的荧光底物在物质的量上相等，可通过相机捕捉发射光的强度与分布情况，实现对酶活性的原位高分辨率定量检测。

Keywords: 原位酶谱 search 土壤微界面 search 根土界面 search 酶活性 search 荧光底物 search

一、 根土界面酶活性原位检测

材料与试剂

  1. 离心管 (预灭菌)
  2. 酒精棉
  3. 聚酰胺膜 (0.45 μm)
  4. 铝箔纸
  5. 糙纸
  6. 吗啡啉乙磺酸半钠盐MES (C6H13NO4SNa0.5)，相对分子质量206.73 g/mol
  7. TRIZMA-Base，相对分子质量121.14 g/mol
  8. TRIZMA-HCl，相对分子质量157.60 g/mol
  9. 4-甲基伞形酮 (MUF)，相对分子质量176.17 g/mol
  10. 7-氨基-4-甲基香豆素 (AMC)，相对分子质量175.18 g/mol
  11. 带MUF或AMC标记的酶底物

仪器设备

  1. 试管 (预灭菌)
  2. 500 ml容量瓶
  3. 玻璃棒
  4. 剪刀
  5. 镊子
  6. 酒精灯
  7. 1/10000天平
  8. 斡旋振动仪
  9. 水浴锅
  10. 恒温培养箱
  11. 紫外灯
  12. 数码单反相机
  13. 460 nm带通滤光片

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：魏晓梦, 魏亮, 郝存抗, 祝贞科, 吴金水, 葛体达. (2021). 原位酶谱法高分辨率实时检测土壤微界面酶活分布. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003833. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003833.
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How to cite: Wei, X. M., Wei, L., Hao, C. K., Zhu, Z. K., Wu, J. S. and Ge, T. D. (2021). High Resolution Real-time Detection of Soil Enzyme Activity Distribution by in situ Zymography. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003833. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003833.
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分类

系统生物学 > 微生物组学

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