摘要:在丛枝菌根 (AM) 真菌研究中,某些情况下需要获得纯净的菌丝,在无菌条件下研究真菌菌丝的特性或与某种特定微生物的相互作用。但是AM真菌是专性活体营养微生物,一般来说只能通过与植物共生进行培养,不能单独纯培养,这就为AM真菌的无菌培养带来了困难。目前,通过在灭菌的固体培养基上让AM真菌与植物的根器官 (如胡萝卜根器官) 建立共生关系,可以达到获得无菌菌丝的目的。与传统隔网分室研究方法相比,分隔培养皿无菌培养体系相对封闭的特点更易于实现无菌环境,可控性更高,并且可以使用显微镜直接观测菌丝的形态以及细菌在菌丝表面的定殖情况,因而可以建立较为理想的菌丝际环境,研究AM真菌菌丝际的微生物互作过程。
材料与试剂
- 一次性塑料无菌分隔培养皿 (90 × 15 mm)
- 封口膜 (ParafilmTM)
- 胡萝卜根器官:转移Ri T-DNA 质粒的胡萝卜 (Daucus carota L.) 根器官,克隆为DC2
- AM真菌:Rhizophagus irregularis DAOM 197198 (或者其他种类的AM真菌)
- 细菌:解磷细菌 (根据具体研究问题选择特定功能细菌或细菌群落)
- MSR (Modified Strullu-Romand Medium) 培养基 (见溶液配方)
仪器设备
- 镊子
- 解剖刀
- 酒精灯
- 高压灭菌锅
- 超净工作台
- 恒温培养箱
- 精密pH计
- 天平
实验步骤
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