Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

热泉高温细菌分离培养方法

Methods for Isolation and Cultivation of Thermophiles in Hot Springs

鲜 鲜文东
胡 胡超建
李 李文均

发表时间: 2021年05月11日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2003741 浏览次数: 3637

返回专辑目录

微生物组实验手册：架起各领域通向微生物组世界的桥梁
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：热泉的温度、酸碱度及营养构成迥异于普通生境，是极端环境的典型代表。其中蕴藏着丰富的微生物资源，它们在长期适应极端生境过程中形成了独特的代谢方式和多样的物种组成，对生命起源与进化等相关理论研究和生物技术开发都有重要意义。热泉一般为小型流动水体，因而泉水中微生物丰度不高。热泉中的微生物主要存在于沉积物及高温菌席中，故在分离培养时常选取沉积物和菌席为研究对象。为了在实验室条件下高效分离培养高温热泉环境中的微生物，了解高温热泉环境中可培养微生物的多样性，并为后续的新分类单元的鉴定、功能菌株的筛选提供优质的种质资源，本文根据前期经验，系统总结了高温热泉微生物的分离培养、初步鉴定及保藏的一般流程，并推荐了两种分离效果较好的培养基及其培养条件，最后对初学者可能忽视的注意事项进行了总结。本文阐述的方法适用于分离热泉中的可培养高温菌，对挖掘热泉中的微生物资源有一定的借鉴意义。

Keywords: 热泉 search 高温菌 search 分离培养 search 鉴定 search 保藏 search

材料与试剂

  1. 无菌培养皿
  2. 涂布棒
  3. 接种针
  4. 无菌PCR管
  5. 10 ml注射器
  6. 各种型号的枪头 (20 μl，200 μl，1 ml)
  7. 0.22 μm无菌有机系滤膜
  8. R2A broth (Coolaber)
  9. 酵母提取物 (OXOID)
  10. 琼脂 (Solarbio)
  11. 吉兰糖胶 (Gelrite)
  12. 琼脂糖（TsingKe）
  13. Chelex (Bio-Rad，SIGMA)
  14. 2x PCR Mix (GenStar)
  15. 27F和1492R引物 (Sangon Biotech)
  16. ddH2O
  17. 甘油
  18. Tris-HCl Buffer
  19. EDTA
  20. Sodium pyruvate
  21. KH2PO4
  22. (NH4)2SO4
  23. FeSO4•7H2O
  24. MgSO4•7H2O
  25. CaCl2•2H2O
  26. NaCl
  27. MnSO4•4H2O
  28. ZnSO4•7H2O
  29. Co(NO3)2•6H2O
  30. CuSO4•5H2O
  31. Na2MoO4•2H2O
  32. H3BO3
  33. Trisodiurn EDTA
  34. Nicotinic acid
  35. Thiamine hydrochloride
  36. Biotin
  37. P-aminobenzoic acid
  38. Cobalamin
  39. Calcium pantothenate
  40. Pyridoxine hydrochloride
  41. Folic acid
  42. R2A (见溶液配方)
  43. 02YE (见溶液配方)
  44. 10% Chelex (见溶液配方)
  45. 微量盐 (见溶液配方)
  46. 复合维生素 (见溶液配方)
  47. 甘油管 (见溶液配方)
  48. 1x TE缓冲液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 15 ml玻璃试管
  2. 250 ml和1 L锥形瓶
  3. 酒精灯
  4. 各种型号的移液枪
  5. 研钵
  6. 研磨棒
  7. 超净工作台 (BJ-2CD)
  8. 全温振荡培养箱 (ZQZY-88BN)
  9. 全自动高压灭菌器 (HVA-85)
  10. 隔水式恒温培养箱 (GHP-9270)
  11. 触摸屏梯度PCR仪 (T100)
  12. 台式高速冷冻离心机 (5427R)
  13. 电热鼓风干燥箱 (DHG-9140A)
  14. 凝胶成像系统 (GenoSens1850)
  15. 无损蓝光投射切胶仪 (Ultraslim)

软件和数据库

  1. EzBioCloud (https://www.ezbiocloud.net/)
  2. NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：鲜文东, 胡超建, 李文均. (2021). 热泉高温细菌分离培养方法. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003741. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003741.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Xian, W. D., Hu, C. J. and Li, W. J.
(2021). Methods for Isolation and Cultivation of Thermophiles in Hot Springs. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003741. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003741.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

系统生物学 > 微生物组学

您对这篇实验方案有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A