材料与试剂

1. 灭菌棉拭子
2. 一次性无菌橡胶手套
3. 灭菌纱布
4. 灭菌手术剪和手术刀
5. 灭菌手术缝合线
6. 枪头：10 μl、200 μl、1000 μl
7. 移液管：5 ml、10 ml
8. 离心管：1.5 ml、2 ml、50 ml
9. 玻璃珠：3-4 mm
10. 锆珠：0.1 mm直径（Biospec，目录号：11079101z）
11. 试验动物：商品猪或土种猪（根据实验目的确定性别、日龄、日粮）
12. 微生物总DNA提取试剂盒：QIAamp Fast DNA Stool Mini（QIAGEN，目录号：51604）
13. 微生物RNA保护试剂：RNAprotect Bacteria Reagent （QIAGEN，目录号：76506）
14. 微生物总RNA提取试剂盒：RNeasy Mini Kit（QIAGEN，目录号：74104）
15. 第一链反转录试剂盒：SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix kit（Thermo Fisher，目录号：18080400）
16. 0.2%吐温80生理盐水（见溶液配方）
17. DEPC水（无RNase水；见溶液配方）
18. 75%乙醇
19. TE缓冲液（上海生工生物工程，目录号：B548106）
20. Tris饱和酚溶液（pH 7.9±0.2；上海生工生物工程，目录号：A504193）
21. 氯仿-异戊醇（24:1，v/v）
22. 水饱和酚溶液（上海生工生物工程，目录号：A504195）
23. 95%乙醇（见溶液配方）
24. 70%乙醇（见溶液配方）
25. 3 M乙酸钠溶液（见溶液配方）
26. 磷酸盐缓冲溶液（PBS，pH 7.4；见溶液配方）
    

仪器设备

1. 移液器（Eppendorf，型号：2.5 μl、10 μl、100 μl、200 μl、1000 μl）
2. 电动助吸器（Eppendorf，型号：5-50 ml）
3. 高压蒸汽灭菌锅（Sanyo，型号：MLS-3750）
4. 离心机（Eppendorf，型号：5810 R）
5. 超纯水系统（Sartoris，型号：Arium Pro VF）
6. 生物样品均质器（OMINI，型号：Bead Ruptor 12）
7. 涡旋混匀仪（Scientific Industries，型号：SI Vortex Genie 2）
8. 冷藏冷冻冰箱（西门子，型号：BCD-610W）
9. 超低温冰箱（Thermo，型号：MLT）
10. PCR 仪（Bio-rad，型号：DNAengine）
    

实验步骤